陳利明 楊紅兵 陳海英 郭秋紅

(河北省蔚縣人民醫(yī)院外科，河北 蔚縣 075700)

實(shí)驗(yàn)研究

富硒靈芝對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血脂和一氧化氮、內(nèi)皮素水平的影響※

陳利明 楊紅兵 陳海英1郭秋紅2

(河北省蔚縣人民醫(yī)院外科，河北 蔚縣 075700)

目的 觀察富硒靈芝對(duì)高脂血癥大鼠血脂和一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)水平的影響，探討其治療高脂血癥的作用機(jī)制。方法 將50只SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、富硒靈芝高劑量組、富硒靈芝低劑量組、吉非羅齊陽(yáng)性藥對(duì)照組，各10只。采用喂養(yǎng)高脂飼料方法復(fù)制高脂血癥大鼠模型，在造模同時(shí)各組每日灌胃予藥物(或水)治療，連續(xù)8周。第8周末各組大鼠末次給藥后禁食禁水12 h，斷頭取血，測(cè)定各組大鼠血脂、血清NO、血漿ET的水平。結(jié)果 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、ET水平顯著升高(P＜0.01)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)、NO水平顯著降低(P＜0.05);與模型對(duì)照組比較，各治療組均可降低高脂血癥大鼠TC、TG、NO水平(P＜0.01)，升高HDL－C、NO水平(P＜0.05);各治療組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 富硒靈芝可以調(diào)節(jié)大鼠脂質(zhì)代謝的異常，緩解高脂血癥所引起的ET和NO的失衡。

疾病模型，動(dòng)物;芝;藥理學(xué);高脂血癥;血脂;一氧化氮;內(nèi)皮素

高脂血癥(hyperlipoidemia，HLP)是一種全身脂密度代謝異常的病癥，它會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)增加、血脂比例改變和(或)脂質(zhì)質(zhì)量異常、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、內(nèi)皮素(ET)的合成及釋放增加、一氧化氮(NO)合成減少等。因此，如何切實(shí)有效的防治高脂血癥對(duì)人體的危害，已成為一個(gè)很重要的研究課題。我們通過(guò)觀察富硒靈芝對(duì)高脂血癥的防治作用，以期尋找抗高脂血癥損傷的有效藥物。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年健康雄性SD大鼠50只，體質(zhì)量180～200 g，河南實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基地提供，合格證號(hào):SCXK (鄂)2004－0007。

1.1.2 動(dòng)物飼料 普通飼料由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。高脂飼料［1］:膽固醇1.5%、膽鹽0.5%(均購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司)、普通飼料88%、豬油10%。高脂飼料由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工制作。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑 在液體培養(yǎng)基中加入亞硒酸鈉培養(yǎng)出富硒靈芝(含硒量為4.32 mg/g)［2］，課題組實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，80℃烘干，超微粉碎備用。吉非羅齊(山西創(chuàng)隆制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H14020050，生產(chǎn)批號(hào)為20071101)?？偰懝檀?TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)及NO試劑盒由南京建成生物工程研究所提供;ET測(cè)試盒由北京東亞免疫技術(shù)研究所提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 造模與給藥 50只大鼠自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)于18～22℃明暗各12 h的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組，各組10只。①正常對(duì)照組:普通飼料喂養(yǎng)，每日涼開水1 mL/100 g灌胃1次。②模型對(duì)照組:高脂飼料喂養(yǎng)，每日涼開水1 mL/100 g灌胃1次。③吉非羅齊陽(yáng)性藥對(duì)照組(簡(jiǎn)稱吉非羅齊組):高脂飼料喂養(yǎng)，每日吉非羅齊混懸液(含藥量1.05 g/100 mL)1 mL/100 g灌胃1次。④富硒靈芝低劑量組(簡(jiǎn)稱低劑量組):高脂飼料喂養(yǎng)，每日富硒靈芝(含藥量2 g/100 mL)1 mL/100 g灌胃1次。⑤富硒靈芝高劑量組(簡(jiǎn)稱高劑量組):高脂飼料喂養(yǎng)，每日富硒靈芝(含藥量8 g/100 mL)1 mL/100 g灌胃1次。各組均自由飲水，連續(xù)8周，第8周末各組大鼠末次給藥后禁食禁水12 h，斷頭取血。

1.2.2 檢測(cè)方法 TC、TG、HDL－C、NO檢測(cè)均采用酶法;ET檢測(cè)采用放射免疫法。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件(SPSS 11.5 for windows)進(jìn)行數(shù)據(jù)的輸入和計(jì)算，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示，多組均數(shù)比較用單因素方差分析法(Oneway ANOVA)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清TC、TG及HDL－C比較 見表1。

表1 各組大鼠血清TC、TG及HDL－C比較 mmol/L，±s

表1 各組大鼠血清TC、TG及HDL－C比較 mmol/L，±s

與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 n TG TC HDL－C正常對(duì)照組10 0.65±0.10 2.13±0.50 1.11±0.59模型對(duì)照組 10 1.59±0.64＊＊ 3.27±0.32＊＊ 0.60±0.23*低劑量組 10 1.03±0.29△△ 2.68±0.41△△ 1.09±0.47△高劑量組 10 0.87±0.33△△ 2.74±0.50△△ 1.11±0.31△吉非羅齊組 10 0.75±0.22△△ 2.49±0.29△△ 1.03±0.34△

由表1可見，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清TC、TG水平顯著升高(P＜0.01)，HDL－C水平顯著降低(P＜0.05)，表明高脂血癥大鼠造模成功;與模型對(duì)照組比較，各治療組均可降低高脂血癥大鼠TC、TG水平(P＜0.01)，升高HDL－C水平(P＜0.05);各治療組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 各組大鼠血清NO、血漿ET比較 見表2。

表2 各組大鼠血清NO、血漿ET比較 ±s

表2 各組大鼠血清NO、血漿ET比較 ±s

與正常對(duì)照組比較，*P＜0.01;與模型對(duì)照組比較，△P＜0.05

組 別 n NO(mg/L) ET(ng/L)正常對(duì)照組10 67.08±11.97 139.24±40.41模型對(duì)照組 10 30.22±9.44* 189.96±28.72*低劑量組 10 43.34±10.61△ 153.09±37.64△高劑量組 10 42.85±18.66△ 150.17±31.05△吉非羅齊組 10 49.98±13.69△ 155.73±32.59△

由表2可見，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組NO水平顯著降低(P＜0.01)，ET水平顯著升高(P＜0.01);與模型對(duì)照組比較，各治療組均可顯著升高NO水平(P＜0.05)，顯著降低ET水平(P＜0.05);各治療組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

硒是人體谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH－Px)的組成成分，是人體必需的微量元素。人體的硒主要來(lái)源于食物，從營(yíng)養(yǎng)學(xué)和生化代謝角度考慮，生物源有機(jī)硒以其吸收利用率高、毒副作用小等特點(diǎn)優(yōu)越于無(wú)機(jī)硒。靈芝是藥食兩用菌，對(duì)增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗癌、抗腫瘤方面研究也早有報(bào)導(dǎo)［3］。靈芝對(duì)某些微量元素特別是硒具有高度的富集作用，并把無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒，利于人體攝入。本實(shí)驗(yàn)采用的富硒靈芝是靈芝在加硒深層培養(yǎng)中，對(duì)無(wú)機(jī)硒進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化而成為富含生物有機(jī)硒的靈芝。本實(shí)驗(yàn)是以血脂、NO、ET為觀察指標(biāo)來(lái)探討富硒靈芝對(duì)高脂血癥的治療作用。

高脂血癥是一種脂代謝紊亂病癥，它會(huì)造成血中TC、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)水平及甘油三酯(TG)水平過(guò)高和(或)HDL－C水平過(guò)低。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，富硒靈芝能較好地降低血清TC、TG水平，升高HDL－C水平，說(shuō)明富硒靈芝能調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的異常。

正常生理?xiàng)l件下，NO和ET由血管內(nèi)皮細(xì)胞(EC)合成和釋放，這兩類物質(zhì)相互拮抗，互相調(diào)節(jié)，共同維持血管功能。1980年Furchgott RF等［4］首次發(fā)現(xiàn)的血管內(nèi)皮舒張因子，現(xiàn)已證實(shí)為NO或其類似物。NO由L－精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的催化下合成，生成的NO以游離或復(fù)合物形式由EC釋放。NO激活細(xì)胞內(nèi)的鳥苷酸環(huán)化酶，使胞內(nèi)環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)增高，而產(chǎn)生一系列生物學(xué)效應(yīng):①松弛血管平滑肌，維持血管舒張狀態(tài)。②抑制血小板的黏附和聚集，影響白細(xì)胞黏附分子CD11、CD18的活性或抑制其表達(dá)。③抑制平滑肌細(xì)胞分裂增殖，減少膠原纖維、彈力纖維的產(chǎn)生。④攜帶額外電子，清除自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)［5－6］。

ET是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)烈的內(nèi)皮源性縮血管活性多肽，含有21個(gè)氨基酸殘基，有ET－1、ET－2、ET－3 3種亞型，分別有不同基因編碼［7］。EC是合成分泌ET的主要細(xì)胞，ET在EC粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成，作用于平滑?。?］。ET受體有ETA受體和ETB受體2種亞型。ETA受體主要存在于血管平滑肌細(xì)胞，激動(dòng)后引起平滑肌細(xì)胞的收縮。而EC上的ETB受體激動(dòng)后可以誘發(fā)前列環(huán)素(PGI2)和NO的釋放引起平滑肌松弛，并能抑制ET的分泌，形成負(fù)反饋調(diào)節(jié)［9］，即正常生理狀態(tài)下，EC合成和釋放的NO和ET相互作用與調(diào)節(jié)，保持著動(dòng)態(tài)平衡。高脂血癥時(shí)EC受損，打破此平衡，可加重內(nèi)皮損傷。有研究表明NO活性下降是高膽固醇血癥最早出現(xiàn)的異常改變［10］，NO活性降低主要是由于動(dòng)脈內(nèi)皮氧自由基(OFRs)形成增多，使NO氧化降解增加［11］。

本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠高脂飼料喂養(yǎng)8周后，血清NO水平顯著降低，血漿ET水平升高，表明食餌性高脂血癥引起血管內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷。用藥組均不同程度地升高血清NO水平，降低血漿ET水平，表明富硒靈芝能緩解高脂血癥引起的血漿ET和NO的失衡，對(duì)EC具有一定的保護(hù)作用。富硒靈芝組與吉非羅齊組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。我們推測(cè)其機(jī)制可能為:硒作為人體必需微量元素，具有保護(hù)機(jī)體免受氧化損害的功能。物質(zhì)在體內(nèi)代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生許多氧化活性很強(qiáng)的代謝產(chǎn)物，如過(guò)氧化氫(H2O2)、超氧陰離子(O2－)、羥游離基(HO)及脂酰游離基(ROOH)等，這些代謝產(chǎn)物在體內(nèi)可氧化脂肪酸和蛋白質(zhì)，損害生物膜和細(xì)胞的功能結(jié)構(gòu)。硒通過(guò)增強(qiáng)GSH－Px的活性，催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)還原為還原型谷胱甘肽(GSH)，使生物膜和細(xì)胞免遭自由基的損害而減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。

本實(shí)驗(yàn)選用富硒靈芝作為對(duì)抗高脂血癥的藥物，確實(shí)可以使高脂血癥大鼠血清TC、TG，血漿ET水平顯著低于模型組(P＜0.01，P＜0.05)，血清HDL－C、NO水平顯著高于模型組(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，富硒靈芝可以調(diào)節(jié)大鼠脂質(zhì)代謝的異常，緩解高脂血癥所引起的ET和NO的失衡?？傊?，富硒靈芝可以有效地防護(hù)高脂血癥所造成的損害。

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Effects of Ganoderma lucidum rich in selenium on levels of NO and ET in blood of rats with hyperlipoidemia

CHEN Liming*，YANG Hongbing，CHEN Haiying，et al.*Department of Surgery，Yu County People＇s Hospital of Hebei，Hebei，Yu County 075700

ObjectiveTo explore the mechanism of action by observing the effect of Ganoderma lucidum rich in selenium on levels of NO and ET of rats with hyperlipoidemia.Methods50 rats were randomly divided into 5 groups:the normal control group，the model group，the high－dose of Ganoderma lucidum rich in selenium group，the low－dose of Ganoderma lucidum rich in selenium group and Gemfibrozil positive control group.The animal models of hyperlipoidemia were duplicated with high fat diet.Each

daily oral administration of drugs(or water) treatment for 8 weeks while modeling.At 8th week after the last administration the rats received fasting for 12h，decapitated，blood.The levels of blood fat and NO，ET in each group were detected.ResultsCompared with the normal control group，the levels of TC，TG and ET(P＜0.01)were significantly increased and the levels of HDLC and NO were obviously decreased(P＜0.05)in the model group.Compared with the model group，the levels of TC，TG and ET(P＜0.01)were significantly decreased and the levels of HDL－C and NO were obviously increased (P＜0.05)in each treatment group.There was no significant difference among each treatment group(P＜0.05).ConclusionGanoderma Lucidum rich in selenium can effectively regulate the abnormality of blood fat，and relieve the unbalance of ET and NO in blood of rats with hyperlipoidemia.

Disease model;Animal;Ganoderma lucidum;Pharmacology;Hyperlipemia;Blood lipid;Nitric oxide;Endothelin

R－332;R589.2;R282.710.5

A

1002－2619(2012)08－1221－03

※項(xiàng)目來(lái)源:河北省中醫(yī)藥管理局2006年度中醫(yī)藥、中西醫(yī)結(jié)合科研計(jì)劃(編號(hào):2006064)

1 河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)課教學(xué)部，河北 石家莊 050091

2 河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥臨床教研室，河北 石家莊 050091作者簡(jiǎn)介:陳利明(1964—)，男，副主任醫(yī)師，學(xué)士。研究方向:心腦血管病。

2012－01－09)