葉青華，陳 濤

（1.成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院，四川 成都 611130；2.成都美寶畜禽研究所，四川 成都 610066）

犬心絲蟲病又名犬惡絲蟲病，是由絲蟲科惡絲蟲屬的絲蟲成蟲寄生于犬的右心室、肺動脈（少見于胸腔、支氣管）內(nèi)，導(dǎo)致犬循環(huán)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等遭受損害，引起循環(huán)障礙、呼吸困難及貧血等臨床癥狀的一種寄生蟲病。成蟲雌蟲產(chǎn)出的幼蟲——微絲蚴進(jìn)入并寄生在犬外周血液中，當(dāng)蚊蟲等中間宿主在患犬身上吸血時(shí)，微絲蚴就進(jìn)入到蚊蟲體內(nèi)，并逐漸發(fā)育成具有感染性的幼蟲。當(dāng)正常犬被含有微絲蚴的蚊蟲叮咬時(shí)，微絲蚴就順著吻管進(jìn)入到犬體內(nèi)，這樣正常犬只就被感染。

本次試驗(yàn)首次在大陸地區(qū)使用商品化的犬心絲蟲ELISA快速檢測試劑盒進(jìn)行檢測，在早期臨床診斷和預(yù)防上具有重大意義。該病初期沒有臨床癥狀，但會逐漸導(dǎo)致犬的運(yùn)功能力及生理機(jī)能下降，這對工作犬而言是至關(guān)重要的，特別是防爆犬、追蹤犬，工作能力的下降就預(yù)示著該犬應(yīng)被淘汰，而工作犬特別是警犬的選育及訓(xùn)導(dǎo)需要花費(fèi)大量的人力物力，犬只的淘汰對公安機(jī)關(guān)和廠礦企業(yè)的損失很大。目前，四川省內(nèi)工作犬、伴侶犬的心絲蟲病流行狀況還未見報(bào)道，人們對此病沒有引起重視，筆者所調(diào)查的工作犬全部沒有采取過預(yù)防措施。而該病如果已有大量成蟲感染，則預(yù)后不良，嚴(yán)重的死亡率可達(dá)50%。因此，筆者就四川省工作犬心絲蟲的感染率進(jìn)行了跟蹤調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 血樣采集 在四川省采集成都、德陽、綿陽、樂山、宜賓、阿壩六地共128只工作犬（包括警犬和護(hù)衛(wèi)犬）的血樣。犬種包括德國牧羊犬、拉布拉多犬、馬林諾斯犬、昆明犬、羅威納犬、史賓格犬、藏獒，年齡從8月齡到7歲半不等，在下午5點(diǎn)～9點(diǎn)之間進(jìn)行前肢靜脈采血。犬只具體狀況如表1所示。

表1 試驗(yàn)犬只來源及數(shù)量

1.1.2 試劑 血液稀釋液：從韓國Animal Genetics公司購入，批號 1102026。

ELISA心絲蟲快速檢測試劑盒（Anigen Rapid Heartworm Ag Test Kit）：批號 1102026，從韓國Animal Genetics公司購入。

1.1.3 試液 0.1%美藍(lán)染色液：精確稱取1g分析純美藍(lán)放入250mL容量瓶中，加入蒸餾水至刻度即得。用于犬心絲蟲微絲蚴的染色。

2%甲醛固定液：精確量取分析純甲醛5mL放入250mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度即得。用于犬微絲蚴的固定。

1.1.4 儀器 離心機(jī)：上海手術(shù)器械廠生產(chǎn)；顯微鏡：日本奧林巴斯公司生產(chǎn)；泡沫低溫箱：自備。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 ELISA快速檢測法 將快速檢測試劑盒以及已放入2滴抗凝劑的試管編號，并與即將采血的犬只相對應(yīng)。每只犬采集2mL前肢靜脈血放入試管內(nèi)混勻，馬上滴30μL（使用專用一次性滴管）左右全血在試劑盒檢測孔內(nèi)，再滴入專用稀釋液3滴（90μL），放置于桌面上，5～10min后觀察結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 ELISA試劑盒檢測犬心絲蟲的結(jié)果 只

1.2.2 改良Knott′s法 將靜脈采集的剩余血液放入低溫泡沫箱中保存，再返回實(shí)驗(yàn)室，取1mL血樣加入2%福爾馬林9mL充分混合，以2500r/min離心20min，棄上清液，將沉淀1滴與0.1%美藍(lán)1滴染色后加蓋玻片鏡檢，低倍鏡下發(fā)現(xiàn)微絲蚴，轉(zhuǎn)至高倍鏡下檢查。結(jié)果見表3。

表3 改良Knott′s法檢測犬心絲蟲的結(jié)果 只

2 結(jié)果與分析

通過對128頭工作犬的血樣用改良Knott′s法進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有7頭犬的微絲蚴檢測為陽性，而通過ELISA快速檢測試劑盒檢測到的陽性犬只有26只。ELISA快速檢測試劑盒的敏感度為96%,準(zhǔn)確率為100%；而Knott′s法的準(zhǔn)確率為100%，但敏感度很低，以ELISA檢測的陽性數(shù)量計(jì)，其敏感度僅為28.04%，可能與血液采集時(shí)間有很大的相關(guān)性。

通過分析得知，犬年齡在5歲以上的感染率相對較高，達(dá)53.85%，2～5歲犬次之，感染率為23.33%，8月齡～2歲犬感染率最低，為9.09%。成都地區(qū)的感染率為20.75%，其中2～5歲犬感染率為22.22%，5歲以上犬感染率為40.00%；樂山地區(qū)的感染率為20.00%，其中2～5歲犬感染率為0%，5歲以上犬感染率為100%；德陽地區(qū)的感染率為18.75%，其中2～5歲犬感染率為25.00%，5歲以上犬感染率為50.00%；綿陽地區(qū)的感染率為21.88%，其中2～5歲犬感染率為28.57%，5歲以上犬感染率為66.67%；宜賓地區(qū)的感染率為20.00%，其中2～5歲犬感染率為33.33%，5歲以上犬感染率為50.00%；阿壩地區(qū)的感染率為0。

3 結(jié)論與討論

從試驗(yàn)結(jié)果看，除阿壩州外其余地區(qū)的感染率沒有差異。阿壩州氣溫低而日照強(qiáng)烈，7月的平均氣溫為11～17℃，全年無霜期少于90d，該地區(qū)基本不適合傳播媒介的生存，因此其感染率為0屬于正常，與該病的流行病學(xué)特點(diǎn)相符合。

該試驗(yàn)結(jié)果與楊鋒在簡陽地區(qū)的試驗(yàn)結(jié)果（感染率為80%）和饒忠秀在重慶壁山的試驗(yàn)結(jié)果（感染率為61.12%）相差比較大，分析其原因主要有：

（1）ELISA快速檢測試劑盒是通過雌性成蟲制作抗原進(jìn)行檢測的，如果犬只僅單獨(dú)感染雄性成蟲，則其檢測結(jié)果為陰性。

（2）其他兩次試驗(yàn)檢測的都是農(nóng)村家犬，其生活環(huán)境相對比較惡劣，蚊蟲較多，感染的機(jī)率較大。而本次試驗(yàn)的試驗(yàn)動物全部為警犬和護(hù)衛(wèi)犬，所有犬只均有專門的犬舍，也有專門的訓(xùn)導(dǎo)員進(jìn)行護(hù)理，衛(wèi)生狀況非常好，因此其感染幾率相對較低。

（3）其他兩次試驗(yàn)均沒有進(jìn)行犬只年齡的劃分，只是進(jìn)行籠統(tǒng)計(jì)算；而本次試驗(yàn)的犬只均有年齡檔案，嚴(yán)格進(jìn)行了年齡劃分，因而5歲以上的犬只與文獻(xiàn)報(bào)道的兩次試驗(yàn)結(jié)果相對接近。

四川西面是高原，氣溫低而日照強(qiáng)烈，7月的平均氣溫為11～17℃，全年無霜期少于90d，該地區(qū)基本不適合傳播媒介的生存。攀西地區(qū)1月氣溫8～13℃，7月平均氣溫22～26℃，無霜期達(dá) 250～280 d，年降水量1 000mm，該地區(qū)氣溫適宜，但濕度偏小。四川盆地屬于亞熱帶濕潤季風(fēng)氣候，比同緯度的長江中下游偏高2～4℃，具有冬暖、春早、夏熱、濕度大、云霧多、日照少、霜雪少、晝夜溫差小等特點(diǎn)，1月平均氣溫3～8℃，7月平均氣溫 25～39℃，全年無霜期 280～340 d，年降水量800～1200mm；西部峨眉、雅安一帶受地形影響，雨量豐富，年降水量達(dá)1 800 mm，這個(gè)區(qū)域是非常適合傳播媒介生存的地方，其代表區(qū)域是成都。成都市年平均氣溫16.2℃，年極端最高氣溫37.3℃，年極端最低氣溫為-5.9℃，最熱時(shí)間出現(xiàn)在7～8月，月平均氣溫為25.4℃，最冷出現(xiàn)在1月，穩(wěn)定通過20℃的初終日期為5月下旬，通過10℃的初終日期為3月中旬到下旬。這種氣候條件下，傳播媒介從4月就開始出現(xiàn)，到10月中旬左右才會消失。從氣象資料和文獻(xiàn)報(bào)道并綜合此次試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，四川盆地確實(shí)是犬心絲蟲病的流行區(qū)域。1990年以前，四川盆地內(nèi)的犬只與盆地外的流動幾乎沒有，1992年以后流動雖然增大，但也只局限在中等以上城市。四川盆地內(nèi)農(nóng)村家犬之所以有如此高的感染率，其外來因素基本可以排除，主要原因還是在于本地犬只相互感染。

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