姚 蕾，鐘淑霞，李珊山，宋 洋，郭靜微，謝曉蕾，艾 鶴

（吉林大學第一醫(yī)院皮膚科，吉林 長春130021）

自體黑素細胞移植治療不同臨床類型白癜風患者的療效評價

Evaluation on curative effect of autologous melanocyte transplantation in treatment of patients with different clinical types of vitiligo

姚 蕾，鐘淑霞，李珊山，宋 洋，郭靜微，謝曉蕾，艾 鶴

（吉林大學第一醫(yī)院皮膚科，吉林 長春130021）

目的：評估自體黑素細胞體外培養(yǎng)移植治療白癜風的療效，并探討不同臨床分型、不同移植部位和不同病程白癜風患者的療效差別，為該技術在臨床的應用和推廣提供參考。方法：選擇穩(wěn)定時間均≥6個月、對藥物和光療反應不佳的白癜風患者34例，其中散發(fā)型12例，局限型13例，節(jié)段型9例；面頸發(fā)病17例，四肢及軀干發(fā)病12例，肢端發(fā)病5例。34例患者均采用自體黑素細胞體外培養(yǎng)移植法治療，評價患者移植區(qū)復色面積比率及有無副作用 （疤痕形成、創(chuàng)面感染和原白斑擴大）發(fā)生。結果：34例患者痊愈17例 （50.00%），顯效10例 （79.41%），有效6例 （97.06%），無效1例 （2.94%）。散發(fā)型移植者療效較局限型和節(jié)段型差 （P＝0.008）；肢端移植者效果較面頸、軀干和四肢移植者差 （P＝0.025）；病程長短對療效無影響 （P＝1.000）。結論：自體黑素細胞體外培養(yǎng)移植治療白癜風效果良好，不同移植部位和臨床分型的白癜風患者臨床療效不同。

白癜風；黑素細胞；移植；療效

白癜風是皮膚科常見的疑難病，嚴重時可以導致毀容，對患者的身心危害較大。白癜風發(fā)病的關鍵環(huán)節(jié)是表皮黑素細胞缺失導致白斑形成。如果白斑處黑素細胞完全喪失，則采用傳統(tǒng)的藥物和物理治療方法難以復色，此時需要外科治療將自體黑素細胞移入白斑區(qū)域。外科療法主要包括自體表皮片移植、自體表皮黑素細胞懸液移植和自體黑素細胞體外培養(yǎng)移植等方法［1］。自體黑素細胞體外培養(yǎng)移植通過負壓發(fā)皰取皮法取少量正常表皮，在體外對黑素細胞進行分離培養(yǎng)，并擴增至足夠數(shù)量后移植于白斑區(qū)。由于僅需較少的表皮即可培養(yǎng)出大量自體黑素細胞，因此可以最大限度降低供區(qū)取表皮片的數(shù)量［2］。該法不受受皮區(qū)形狀和皮膚弧度的限制，術后復色均勻，具有見效快、療效高和療程短等特點。目前國外僅有少數(shù)研究［3－5］分析了不同臨床分型、部位和病程的白癜風患者應用自體黑素細胞移植療法療效的差別，但國內尚未見該方面的報道。本研究探討自體黑色素細胞移植治療不同臨床分型、不同部位和不同病程白癜風患者的療效差別，旨在為該技術在臨床的應用和推廣提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年10月—2011年2月在本科門診就診的白癜風患者34例。入選標準：①病情穩(wěn)定時間≥6個月；②對藥物和光療反應不佳；③無其他內科疾病。排除標準：①妊娠期及哺乳期；②瘢痕體質患者。34例患者中男性15例，女性19例；年齡5～48歲，平均年齡 （23.76±8.05）歲；病程：≤1年者15例，2～5年者9例，＞5年者10例；臨床類型：散發(fā)型者12例，局限型者13例，節(jié)段型者9例；面頸部17例，四肢及軀干12例，肢端5例。

1.2 主要試劑

F12培養(yǎng)液、0.25%胰蛋白酶和胎牛血清購自Gibco公司；EDTA、G－418、3－異丁基－1－甲基黃嘌呤 （3－isobuty－1－methylxanthine，IBMX） 和 堿 性成纖維細胞生長因子 （basic fibroblast growth factor，b－FGF）購自Sigma公司；黑素細胞培養(yǎng)使用 Hu16培養(yǎng)基［3］。

1.3 黑素細胞培養(yǎng)及移植方法

1.3.1 術前準備 詳細記錄患者信息，與患者或患者家屬進行治療前溝通，使其對整個治療過程有所了解后，簽知情同意書并拍照。該研究經本院倫理委員會討論同意。

1.3.2 黑素細胞的分離培養(yǎng) 采用凸凹型吸盤，75%酒精消毒供皮區(qū)，用BFY－IIIA皮膚分離儀在供皮區(qū)進行負壓吸引發(fā)皰，工作負壓為40～60kPa，40～60min后發(fā)皰完成，用碘伏和75%酒精消毒水皰區(qū)皮膚，用眼科剪沿皰壁邊緣剪下皰壁，于37℃、0.25%胰酶消化10min，立體顯微鏡下刮下表皮細胞，將細胞重懸于Hank’s液中，用過濾器過濾后低速離心5min，棄上清，置于含Hu16培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)3d，加入G－418（終濃度為100mg·L－1）以除去雜細胞，1周后即可得到高純度的黑素細胞 （圖1，見插頁四）。當黑素細胞生長至80%融合時傳代 （圖2，見插頁四）。每次傳代和移植時均計數(shù)黑素細胞、測定黑素含量并計算黑素細胞倍增時間［6］，以評估黑素細胞生長情況及其功能。移植前用0.25%胰酶－EDTA消化黑素細胞后分置2個離心管，其中4／5細胞用于移植，1／5細胞繼續(xù)傳代。計數(shù)用于移植的黑素細胞，離心后棄上清，加入F12培養(yǎng)液制成黑素細胞懸液備用。

1.3.3 白斑區(qū)去表皮 白斑區(qū)用5%利多卡因乳膏局麻60min后，常規(guī)消毒，采用超脈沖CO2激光進行磨削，磨削后即刻用無菌生理鹽水棉簽擦拭去除表皮。將制備好的黑素細胞懸液均勻鋪種于移植區(qū)創(chuàng)面，細胞數(shù)量控制在 （6～10）×104cm－2［2］。鋪種后用油紗覆蓋，油紗上面覆蓋培養(yǎng)液浸濕的無菌紗布及干紗布。包扎完畢后患者靜臥至少1h。

1.4 療效評價方法

每次移植前和移植結束后6個月復診，由同一工作人員于同一地點用同一數(shù)碼相機進行拍照，記錄治療前后白斑面積，評價移植區(qū)復色面積比率和有無副作用發(fā)生。副作用包括疤痕形成、創(chuàng)面感染和原白斑擴大。療效評價標準［7］：痊愈，移植區(qū)復色面積為90%～100%；顯效，復色面積達50%～89%；有效，復色面積達20%～49%；無效，白斑區(qū)復色面積＜20%。有效率＝ （痊愈例數(shù)＋顯效例數(shù)＋有效例數(shù)）／總例數(shù)×100%；顯效率＝ （痊愈例數(shù)＋顯效例數(shù)）／總例數(shù)×100%；痊愈率＝痊愈例數(shù)／總例數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。不同臨床分型、不同移植部位和不同病程患者移植后顯效率比較采用卡方檢驗，不滿足卡方檢驗條件時使用Fisher確切概率法。

2 結 果

移植面積為2～65cm2，平均移植面積為（16.66±14.98）cm2。34例患者痊愈17例，顯效10例，有效6例，無效1例，痊愈率為50%，顯效率為79.41%，有效率為97.06%。34例患者無治療副作用出現(xiàn)。不同臨床分型白癜風患者療效：12例散發(fā)型患者，痊愈2例，顯效4例，有效5例，無效1例，顯效率為50%；13例局限型患者，痊愈10例，顯效2例，有效1例，無效0例，顯效率為92.31%；9例節(jié)段型患者，痊愈5例，顯效4例，有效及無效均為0例，顯效率為100%。不同臨床分型白癜風患者療效差異具有統(tǒng)計學意義（P＝0.008）。不同移植部位患者療效：面頸部患者共17例，痊愈12例，顯效4例，有效1例，無效0例，顯效率為94.12%；四肢及軀干患者共12例，痊愈5例，顯效4例，有效2例，無效1例，顯效率為75.0%；肢端部位患者5例，痊愈0例，顯效2例，有效3例，無效0例，顯效率為40%。不同移植部位患者療效差異具有統(tǒng)計學意義（P＝0.025）。不同病程白癜風患者療效：≤1年者15例，痊愈9例，顯效3例，有效3例，無效0例，顯效率為80.0%；2～5年者9例，痊愈3例，顯效4例，有效2例，無效0例，顯效率為77.78%；＞5年者10例，痊愈5例，顯效3例，有效1例，無效1例，顯效率為80.0%。不同病程白癜風患者療效差異無統(tǒng)計學意義 （P＝1.000）。見表1～3。

表1 不同臨床分型白癜風患者自體黑素細胞培養(yǎng)移植療效的比較Tab.1 Comparison of the curative effects of autologous melanocyte transplantation in treatment of patients with different clinical types of vitiligo

表2 不同移植部位白癜風患者自體黑素細胞培養(yǎng)移植療效的比較Tab.2 Comparison of the curative effects of autologous melanocyte transplantation in treatment of patients with vitiligo at different transplantation locations

表3 不同病程白癜風患者自體黑素細胞培養(yǎng)移植療效比較Tab.3 Comparison of the curative effects of autologous melanocyte transplantation in treatment of patients with different disease durations of vitiligo

3 討 論

對于穩(wěn)定期白癜風，當非外科療法如藥物和光療效果不理想時，可選擇外科療法。自體黑素細胞體外培養(yǎng)可獲得足夠數(shù)量的黑素細胞，受皮與供皮的比例更大［8］，故適用于治療面積較大的頑固性穩(wěn)定期白癜風。本研究結果顯示：自體黑素細胞移植治療白癜風效果良好，移植有效率達97.06%，這與Hong等［4］的報道近似。本研究結果表明：白癜風臨床類型和白斑部位可影響自體黑素細胞移植的療效，其中局限型與節(jié)段型白癜風治療效果要好于散發(fā)型，與以往報道［4－5］一致。面、頸部的白斑治療效果最好，其次為軀干及四肢，肢端尤其是手指等活動度大的部位治療效果相對較差，但Olsson等［5］研究顯示：軀干及四肢效果好于面頸部，而膝部、肘部等效果最差；朱美財?shù)龋?］研究發(fā)現(xiàn)：下肢、軀干、面部白癜風治療效果較好，而頸部、眼瞼、嘴唇相對較差，但未進行統(tǒng)計學分析。本研究結果顯示：白癜風病程長短不影響自體黑素細胞移植的效果，而Olsson等［5］認為：穩(wěn)定期白癜風病程越長移植效果越差，其差異尚需加大樣本量和延長隨訪時間以進一步研究。

自體黑素細胞體外培養(yǎng)移植療法的技術關鍵在于體外培養(yǎng)的黑素細胞的質量和穩(wěn)定性。該法最早由Lerner等［10］于1987年首次報道，國內最早則由徐小珂等［11］于1996年報道，但二者培養(yǎng)液中均含強有絲分裂促進劑佛波酯，不排除有致癌的危險性［9］。朱美財?shù)龋?］研究中所用的 M2培養(yǎng)液為含重組bFGF的DMEM／F12，成分固定不易調整。而本研 究 與 Hong 等［4，7－8，12］研 究 均 使 用 Hu16 培 養(yǎng)液，其添加物質主要為bFGF、IBMX和胎牛血清，無致突變成分，且在培養(yǎng)過程中可根據(jù)黑素細胞的生長情況和產黑素能力調整培養(yǎng)液中成分用量，使體外培養(yǎng)的黑素細胞狀態(tài)達到最佳。徐小珂等［11］報道的方法為：一次取材可復色25cm2，對于白斑皮損面積大的患者則需多次取材。而使用Hu16培養(yǎng)液培養(yǎng)的黑素細胞可傳至10余代仍保持良好的增殖能力，每次移植時留取1／5細胞繼續(xù)傳代，該法具有一次取材、多次移植的優(yōu)勢，可減少患者多次取皮的痛苦。本研究結果顯示：自體黑素細胞體外培養(yǎng)移植治療白癜風技術具有見效快、復色均勻等優(yōu)勢，值得臨床推廣。

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R758.41

B

1671－587Ⅹ（2012）06－1187－04

2012－03－13

吉林省產業(yè)技術研究與開發(fā)專項項目資助課題 （3J110J403428）；吉林省科技發(fā)展計劃項目資助課題（20080740）

姚 蕾 （1983－），女，黑龍江省大慶市人，醫(yī)師，醫(yī)學碩士，主要從事白癜風的發(fā)病機理及治療的研究。

李珊山 （Tel：0431－88782615，E－mail：shansalee＠163.com）