劉慧玲，余永廷，曾糧斌，薛召東，朱愛國

(1，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所，長沙410205;2，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院，北京100081)

根腐病是苧麻生產(chǎn)上的主要病害之一，在我國各苧麻主產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生。上世紀(jì)80年代，陳洪福等對湖南沅江地區(qū)苧麻根腐病病蔸中的線蟲進(jìn)行了分離觀察，先后發(fā)現(xiàn)咖啡短體線蟲(Pratylenchus coffeae)和穿刺短體線蟲(P.penetran)，二者均能侵染苧麻，引發(fā)根腐?。?，2］。后來，程瑚瑞等對我國苧麻主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行了根腐病病原分離和觀察，發(fā)現(xiàn)咖啡短體線蟲是主要病原［3］。

近來，本研究小組對沅江地區(qū)苧麻根腐病病蔸中分離的一種線蟲，從形態(tài)特征和rDNA－ITS序列特征，將此線蟲鑒定為咖啡短體線蟲，證實(shí)了前人的研究結(jié)果。為了全面了解我國苧麻產(chǎn)區(qū)根腐病發(fā)生情況，以及能引起苧麻根腐病發(fā)生的植物病原線蟲種類，我們在我國苧麻主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行了根腐線蟲病發(fā)生情況調(diào)查，并采集了病蔸和病土，分離其中的線蟲，同時利用形態(tài)特征對病原線蟲進(jìn)行了鑒定。

1 材料和方法

1.1 樣品采集

2010年9月至2011年7月，分別在江西宜春、湖南張家界和沅江、湖北咸寧、重慶涪陵、四川達(dá)州等地苧麻主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行根腐調(diào)查。在苧麻園采集根腐病病蔸和根際周圍土壤，在根腐病嚴(yán)重的麻園采用5點(diǎn)采樣法，在20 cm深度每點(diǎn)采集病土500 g左右;用塑料袋包裝，并以地塊為單位(樣品集)做好標(biāo)記，帶回實(shí)驗室備用。

表1 樣品采集地點(diǎn)、苧麻品種及土壤類型Tab.1 Sample locations，ramie species and soil types

1.2 線蟲的分離、殺死和固定

病根中的線蟲，采用改良貝曼漏斗法分離［3］。病土中的線蟲，采用蔗糖浮選離心法分離［4］。采集的病土以田塊為單位，將五個點(diǎn)的土壤分別碾碎，挑去碎石和草根等雜物，分別稱量100 g，混合均勻，過60目篩，取篩下細(xì)土，稱量30 g，采用蔗糖浮選離心法分離線蟲，重復(fù)3次。剩余的土樣放在4℃冰箱保存。分離的線蟲，在體式顯微鏡下觀察，根據(jù)口針的有無，挑選植物寄生線蟲，用熱水浴(65℃，2～3 min)殺死線蟲，用FG固定液固定和保存。

1.3 線蟲的鑒定

將固定的線蟲制作成臨時玻片，在顯微鏡下觀察，根據(jù)線蟲的形態(tài)特征［4］進(jìn)行分類鑒定。

1.4 線蟲密度

本研究主要計數(shù)根圍土壤中的線蟲數(shù)量。每個樣品集取30 g鮮土，分離線蟲，顯微鏡下觀察計數(shù);而后換算成100 g鮮土中的線蟲數(shù)量。每個樣品集重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 苧麻根部寄生線蟲種類

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，各地苧麻主產(chǎn)區(qū)均有根腐線蟲病發(fā)生。從各地樣品中分離到的線蟲，經(jīng)觀察，根據(jù)有無口針，判斷是否為植物寄生線蟲;而后，挑取植物寄生線蟲，根據(jù)形態(tài)特征［4］，分別鑒定為P.coffeae(圖1a)、P.penetran(圖1b)，長針屬線蟲(Paratylenchus sp.)(圖1c)和絲尾屬線蟲(Filenchus sp.)(圖 1d)。

圖1 苧麻根際分離的四種寄生線蟲.a－咖啡短體線蟲，b－穿刺短體線蟲，c－長針屬線蟲，d－絲尾屬線蟲Fig.1 Four species of parasitic nematodes isolated from the rhizosphere of ramie.a－P.coffeae，

2.1 不同種類寄生線蟲的分布

4種線蟲在各地的分布，整理錄入表2，不難發(fā)現(xiàn)，大部分樣品中分離到了咖啡短體線蟲(20/22，90.9%)，絲尾墊刃線蟲分布次之，存在于在54.5%的樣品中，只有少部分樣品(4/22，18.2%)中分離到穿刺短體線蟲，長針屬的線蟲最少，只存在于13.6%的樣品中(3/22)。

表2 各地樣品中植物寄生線蟲種類Tab.2 Parasitic nematode species in the samples at different locations

2.3 土壤類型、種植年限與線蟲密度初步分析

研究發(fā)現(xiàn)，同一苧麻品種種植在相同的土壤類型中，隨著種植年限的增加，苧麻根際土壤中寄生線蟲數(shù)量增加(圖2)。同時，相同的苧麻品種種植在不同類型的土壤中，雖然年限相同，但根際土壤中寄生線蟲的密度不同(圖3)，不同土壤類型似乎影響線蟲的生長和繁殖。

圖2 不同種植年限對寄生線蟲密度的影響Fig.2 Effect of the planting years on parasitic nematode densities

圖3 不同土壤類型對寄生線蟲密度的影響Fig.3 Effect of the soil types on parasitic nematode densities

3 討論

本研究通過對我國不同苧麻產(chǎn)區(qū)根部寄生線蟲研究發(fā)現(xiàn)，寄生于苧麻根部的病原線蟲主要有4種，分別為短體屬的咖啡短體線蟲和穿刺短體線蟲，1種絲尾屬線蟲和1種長針屬線蟲。其中，咖啡短體線蟲是比較普通存在于苧麻根際的寄生線蟲，這一結(jié)果與以往的研究報道類似［3］。長針屬線蟲和絲尾屬線蟲能夠寄生大豆、玉米，以及多種園藝、花卉植物;前者是一類營外寄生的植物線蟲，主要分布在我國的北方地區(qū)［6－10］。這兩種屬的線蟲能夠寄生于苧麻根部，尚屬于首次報道。至于寄生于苧麻的這兩個屬的線蟲是什么種，尚需要通過分子生物學(xué)手段進(jìn)一步來鑒定。

本研究中樣品采集地集中在我國中南部地區(qū)，氣候差異較小，且多集中在苧麻二麻生長期間采集，可以忽略季節(jié)對根腐線蟲生長繁殖的影響。研究發(fā)現(xiàn)相同的苧麻品種，隨著種植年限的增加，根部寄生線蟲數(shù)量增加，符合病害發(fā)展規(guī)律。潘鳳娟等研究發(fā)現(xiàn)，不同土壤類型中，大豆根際寄生線蟲種類不同，肥沃的土壤中，寄生線蟲種類較多［7］。本研究發(fā)現(xiàn)，不同的土壤類型，苧麻根際寄生線蟲數(shù)量也不同。苧麻種植于山地黃棕壤，根際寄生線蟲較多，似乎較適合寄生線蟲的生長及繁殖。

致謝:在本研究實(shí)施過程中，國家麻類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系咸寧苧麻試驗站、涪陵苧麻試驗站、達(dá)州苧麻試驗站和宜春苧麻試驗站團(tuán)隊成員協(xié)助我們采集了樣品，在此一并表示感謝!

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［5］毛小芳，李輝信，陳小云，等.土壤線蟲三種分離方法效率比較［J］.生態(tài)學(xué)雜志.2004，23(3):149－151.

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