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        模擬風(fēng)洞噪聲對(duì)豚鼠聽(tīng)功能及內(nèi)耳細(xì)胞凋亡的影響*

        2012-12-04 02:31:28王方園吳瑋王鴻南韓浩倫劉剛李保衛(wèi)屈昌北孟令照薄少軍丁瑞英孫建芝
        關(guān)鍵詞:豚鼠風(fēng)洞內(nèi)耳

        王方園 吳瑋 王鴻南 韓浩倫 劉剛 李保衛(wèi)屈昌北 孟令照 薄少軍 丁瑞英 孫建芝

        1 解放軍第306醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科(北京 100101);2 中國(guó)航天員科研訓(xùn)練中心

        風(fēng)洞是研究氣體流動(dòng)及其與模型的相互作用,以了解實(shí)際飛行器或其他物體的空氣動(dòng)力學(xué)特性的一種空氣動(dòng)力實(shí)驗(yàn)方法,目前廣泛應(yīng)用于我國(guó)航天事業(yè)的研究中。風(fēng)洞試驗(yàn)過(guò)程中存在各種有害因素,如噪聲、密閉環(huán)境、有害氣體等,其中噪聲是最常見(jiàn)的危害因素之一。風(fēng)洞噪聲的特點(diǎn)是既有高頻噪聲又有低頻噪聲,既有脈沖噪聲又有持續(xù)噪聲,其作業(yè)場(chǎng)所的噪聲強(qiáng)度在一定試驗(yàn)條件下均可超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)允許的水平。目前關(guān)于噪聲性聾的研究已取得一定的進(jìn)展,但尚沒(méi)有進(jìn)一步關(guān)于風(fēng)洞噪聲危害的研究。為此,本研究對(duì)模擬風(fēng)洞噪聲環(huán)境下豚鼠聽(tīng)功能及其內(nèi)耳毛細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中凋亡標(biāo)志物Caspase-3表達(dá)的變化進(jìn)行了觀察,以了解模擬風(fēng)洞噪聲對(duì)豚鼠聽(tīng)功能及內(nèi)耳細(xì)胞凋亡的影響。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康白色紅目豚鼠30只(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),雌雄不限,體重300~350g,耳廓反應(yīng)靈敏,鼓膜標(biāo)志清晰,無(wú)強(qiáng)噪聲暴露及耳毒性藥物使用史。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為2組:對(duì)照組6只(12耳)常規(guī)飼養(yǎng);實(shí)驗(yàn)組24只(48耳),因在ABR閾值測(cè)試麻醉過(guò)程中意外死亡6只,故余下18只(36耳)分為實(shí)驗(yàn)組一、實(shí)驗(yàn)組二、實(shí)驗(yàn)組三,每組6只(12耳),分別于噪聲暴露3天(Explore 3,E3)、7天(Explore 7,E7)及噪聲暴露后7天(Recovery 7,R7)處死取材。

        1.2 噪聲暴露方法 實(shí)驗(yàn)組18只豚鼠分別放置于方形網(wǎng)狀不銹鋼籠內(nèi),緊密排列在中國(guó)航天員訓(xùn)練中心聲學(xué)實(shí)驗(yàn)室隔聲室中,給予模擬風(fēng)洞噪聲。模擬噪聲系統(tǒng)由數(shù)字音頻信號(hào)處理器產(chǎn)生模擬風(fēng)洞噪聲信號(hào),經(jīng)功率放大器傳到揚(yáng)聲器,揚(yáng)聲器放置于豚鼠籠周圍。噪聲強(qiáng)度用BK2250手持式分析儀測(cè)量,為98.0±2dB(A),測(cè)試聲場(chǎng)豚鼠籠四角及中心各點(diǎn)聲強(qiáng)未見(jiàn)明顯差異,每日豚鼠處于模擬噪聲環(huán)境中8小時(shí),每小時(shí)持續(xù)暴露30分鐘,間斷30分鐘。實(shí)驗(yàn)組一6只(12耳)動(dòng)物連續(xù)噪聲暴露3天;實(shí)驗(yàn)組二6只(12耳)動(dòng)物連續(xù)噪聲暴露7天;實(shí)驗(yàn)組三6只(12耳)動(dòng)物連續(xù)噪聲暴露7天,暴露后常規(guī)飼養(yǎng)環(huán)境下恢復(fù)7天。

        1.3 聽(tīng)性腦干反應(yīng)(ABR)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)前所有動(dòng)物進(jìn)行聽(tīng)性腦干反應(yīng)(ABR)測(cè)試,再分別于噪聲暴露1天(E1)、3天(E3)對(duì)實(shí)驗(yàn)組18只(36耳)豚鼠進(jìn)行聽(tīng)性腦干反應(yīng)測(cè)試,噪聲暴露3天檢測(cè)結(jié)束后即刻處死實(shí)驗(yàn)組一6只動(dòng)物,取12只聽(tīng)泡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。于噪聲暴露7天(E7)對(duì)實(shí)驗(yàn)組二、實(shí)驗(yàn)組三各6只動(dòng)物(共24耳)進(jìn)行聽(tīng)性腦干反應(yīng)檢測(cè),檢測(cè)結(jié)束后即刻處死實(shí)驗(yàn)組二6只動(dòng)物,取12只聽(tīng)泡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。于噪聲暴露后3天(R3)、7天(R7)對(duì)實(shí)驗(yàn)組三6只動(dòng)物(12耳)進(jìn)行聽(tīng)性腦干反應(yīng)檢測(cè),暴露后7天(R7)檢測(cè)結(jié)束后即刻處死實(shí)驗(yàn)組三6只動(dòng)物,取12只聽(tīng)泡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。ABR檢測(cè)時(shí),所有豚鼠以1.5% 戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔注射麻醉后應(yīng)用聽(tīng)性腦干反應(yīng)儀(MEDSEN丹麥)在聲電屏蔽的測(cè)聽(tīng)室內(nèi)完成檢測(cè),記錄電極置于外耳道口后上緣皮下,參考電極置于顱頂,接地電極置于鼻尖,刺激強(qiáng)度0~97dB nHL,步距5dB,交替極性濾波短聲,刺激速率21.1次/秒,疊加次數(shù)1 024次,濾波帶寬100~3 000Hz,以剛好能引出可重復(fù)波Ⅲ的最小刺激強(qiáng)度為反應(yīng)閾。

        1.4 細(xì)胞凋亡標(biāo)志物Caspase-3免疫組織化學(xué)染色觀察

        對(duì)照組在噪聲暴露前、實(shí)驗(yàn)組豚鼠分別于噪聲暴露3天(E3)、7天(E7)及暴露后7天(R7)時(shí)經(jīng)1.5%戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔麻醉,迅速打開(kāi)胸腔,經(jīng)左心室主動(dòng)脈插管,快速注入300ml生理鹽水沖洗后,4℃4%多聚甲醛500ml灌注固定,斷頭取出雙側(cè)顳骨,以4%多聚甲醛作耳蝸內(nèi)灌流固定24h。EDTA脫鈣1周,30%蔗糖脫水2天,OCT包埋30分鐘,沿蝸軸水平冰凍連續(xù)切片,片厚8μm。采用Caspase-3抗體(Sigma美國(guó)),參照免疫組織化學(xué)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,Caspase-3的表達(dá)情況由2名以上病理醫(yī)師根據(jù)Caspace-3顯色的深淺雙盲判別。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理,實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)ABR反應(yīng)閾比較采用方差分析。

        2 結(jié)果

        2.1 各組豚鼠ABR反應(yīng)閾(表1) 實(shí)驗(yàn)前對(duì)照組(21.98±5.98dB SPL)和實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物(22.50±5.98dB SPL)ABR反應(yīng)閾無(wú)明顯差異。實(shí)驗(yàn)組模擬風(fēng)洞噪聲暴露后各時(shí)間點(diǎn)ABR反應(yīng)閾:噪聲暴露1、3、7天的ABR反應(yīng)閾較噪聲暴露前明顯增高(P<0.01),且暴露時(shí)間越長(zhǎng)增高越明顯。噪聲暴露后3天,ABR反應(yīng)閾較噪聲暴露7天有降低(P<0.05),表明豚鼠聽(tīng)功能有一定恢復(fù),噪聲暴露后7天ABR閾值與實(shí)驗(yàn)前及暴露后3天相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),說(shuō)明豚鼠噪聲暴露后7天聽(tīng)功能較噪聲暴露后3天進(jìn)一步恢復(fù),但與噪聲暴露前相比,聽(tīng)功能未能完全恢復(fù)。

        表1 各組豚鼠各時(shí)間點(diǎn)ABR閾值(dB SPL,±s)

        表1 各組豚鼠各時(shí)間點(diǎn)ABR閾值(dB SPL,±s)

        注:*與實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前比較,P<0.01;△與噪聲暴露7天比較,P<0.05;#與噪聲暴露后3天比較,P<0.01

        組別 動(dòng)物耳數(shù)(耳) ABR 閾值對(duì)照組12 21.98±5.98實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前 36 22.50±5.98噪聲暴露1天 36 35.73±8.11*噪聲暴露3天 36 43.91±6.32*噪聲暴露7天 24 53.18±6.28*噪聲暴露后3天 24 46.40±11.59△噪聲暴露后7天 12 35.38±11.63#

        2.2 Caspase-3免疫組化染色結(jié)果(圖1) 實(shí)驗(yàn)組豚鼠內(nèi)耳螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及毛細(xì)胞的凋亡標(biāo)志物Caspase-3表達(dá)較對(duì)照組明顯增高,且于噪聲暴露7天最高,暴露后7天豚鼠內(nèi)耳Caspase-3的表達(dá)較前明顯減少。

        圖1 實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)間點(diǎn)及對(duì)照組內(nèi)耳Corti器和螺旋神經(jīng)節(jié)Caspase-3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(×80)

        3 討論

        研究[1]表明噪聲最主要的危害是損害人類的聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng),可造成永久性聽(tīng)力損失,風(fēng)洞噪聲作為一種特殊的噪聲類型,亦可能對(duì)其內(nèi)作業(yè)人員的聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)造成嚴(yán)重影響。本試驗(yàn)?zāi)M某風(fēng)洞試驗(yàn)室作業(yè)人員聽(tīng)力損傷最嚴(yán)重作業(yè)點(diǎn)的噪聲強(qiáng)度、性質(zhì)及持續(xù)時(shí)間、累計(jì)劑量等,觀察此噪聲對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物聽(tīng)功能的影響,結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組豚鼠模擬風(fēng)洞噪聲暴露1、3、7天的ABR反應(yīng)閾較噪聲暴露前均明顯增高,并呈現(xiàn)隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)反應(yīng)閾逐漸增高的趨勢(shì)。噪聲暴露后3、7天豚鼠ABR反應(yīng)閾逐漸下降,但噪聲暴露后7天其反應(yīng)閾與噪聲暴露前相比仍有10 dB的升高,說(shuō)明模擬風(fēng)洞噪聲損傷急性期可產(chǎn)生暫時(shí)性閾移,這部分聽(tīng)力損失可在噪聲暴露停止后逐步恢復(fù),而隨著噪聲暴露量逐漸累積,可在暫時(shí)性閾移的基礎(chǔ)上產(chǎn)生永久性閾移,后者則很難恢復(fù)。

        噪聲性聽(tīng)力損失與內(nèi)耳毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡有密切關(guān)系。研究表明[2~4],Caspase-3可能與細(xì)胞凋亡密切相關(guān),其可通過(guò)細(xì)胞外途徑(或稱細(xì)胞表面死亡受體途徑)和細(xì)胞內(nèi)途徑(或稱線粒體引發(fā)途徑)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞外途徑中,死亡信號(hào)的傳導(dǎo)依賴于死亡配體與受體的結(jié)合,形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合物,隨后Caspase-8被激活,它通過(guò)裂解促凋亡蛋白Bid(proapoptosis protein Bid)使線粒體釋放細(xì)胞色素C,或直接作用于Caspase-3及其他下游的Caspase。在細(xì)胞內(nèi)途徑中,細(xì)胞內(nèi)的死亡信號(hào),如DNA損傷、毒素和ATP耗竭等均可誘發(fā)線粒體釋放細(xì)胞色素C。細(xì)胞色素C、凋亡蛋白酶活化因子(apoptotic protease activating factor 1,Apaf-1)、dATP和Caspase-9酶原結(jié)合形成調(diào)亡復(fù)合體,Caspase-9被釋放并激活,接著下游的Caspase-3、7等被激活降解底物使細(xì)胞凋亡[5~7]。本研究采用免疫組織化學(xué)染色方法觀察模擬風(fēng)洞噪聲暴露對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)耳Caspase-3表達(dá)的影響,結(jié)果顯示,噪聲暴露過(guò)程中,豚鼠內(nèi)耳螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及毛細(xì)胞Caspase-3的表達(dá)明顯增高,且于噪聲暴露7天最高,噪聲暴露停止后豚鼠內(nèi)耳Caspase-3的表達(dá)逐漸降低,說(shuō)明模擬風(fēng)洞噪聲環(huán)境可導(dǎo)致內(nèi)耳毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡。在模擬風(fēng)洞噪聲急性損傷中,其凋亡程度與噪聲暴露的累積量相關(guān),噪聲暴露后,細(xì)胞凋亡減少但短期內(nèi)并不能完全恢復(fù)正常。

        目前,關(guān)于噪聲性聽(tīng)力損傷的研究一直是大家關(guān)注和研究的重點(diǎn)之一,近兩年,關(guān)于風(fēng)洞噪聲環(huán)境的危害也有了一定進(jìn)展。本研究發(fā)現(xiàn),模擬風(fēng)洞噪聲環(huán)境對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物聽(tīng)功能可造成損傷,但其損傷的具體進(jìn)程和機(jī)制如何,以及此類噪聲環(huán)境的安全噪聲暴露量,仍需要在以后的實(shí)驗(yàn)中繼續(xù)探索。

        1 曲雁,李云,丁大連,等.噪聲性耳聾的研究進(jìn)展[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,30:860.

        2 鄔莎,王愛(ài)梅.Caspase家族與內(nèi)耳細(xì)胞凋亡[J].國(guó)際耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2007,6:317.

        3 許麗娟,龔樹(shù)生,汪吉寶,等.內(nèi)耳免疫反應(yīng)中細(xì)胞凋亡及Caspase-3動(dòng)態(tài)表達(dá)的研究[J].臨床耳鼻咽喉科雜志,2005,19:890.

        4 馮浩,尹時(shí)華.內(nèi)耳細(xì)胞凋亡途徑[J].國(guó)際耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2009,6:318.

        5 Poter AG,Janicke RU.Emerging roles of caspase-3in apoptosis[J].Cell Death and Differentiation,1999,6:99.

        6 Chien SY,Wu YC,Chung JG,et al.Berberine induced apoptosis via promoting the expression of Caspase-8,-9and-3,apoptosis-inducing factor and endonuclease Gin SCC-4 human tongue squamous carcinoma cancer Cells[J].Anticancer Research,2009,29:4 063.

        7 Sun X,Wu Y,Chen B,et al.Regulator of alcineurin 1(RCAN1)facilitates neuronal apoptosis through Caspase-3 activation[J].The Journal of Biological Chemistry,2011,286:9 049.

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