夏明亮 劉 婕 齊德生 張妮婭 香紅星

(1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 飼料與飼料生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室，湖北武漢 430070；2.武漢市多寶微生物技術(shù)有限公司，湖北武漢 430312)

天然礦物在畜牧業(yè)中已經(jīng)有廣泛的應(yīng)用。與天然礦物相比，改性礦物所占用的配方空間更小，而且能夠吸附多種霉菌毒素，對重金屬元素吸附量也更大，控制腹瀉和促生長作用也好于天然礦物添加劑，所以，近年來關(guān)于改性礦物添加劑應(yīng)用于畜牧業(yè)的研究也越來越多。

本試驗(yàn)以肉仔雞為試驗(yàn)動物,探討日糧中添加蒙脫石、銅改性蒙脫石（Cu-MMT）和雙季銨鹽改性蒙脫石（DODMAB-MMT）對肉仔雞生產(chǎn)性能、礦物元素沉積和腸道微生物的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

雙十八烷基二甲基溴化銨（純度≥99%，廈門先端科技有限公司）；五水硫酸銅（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑有限公司）；蒙脫石（黃石大冶市保安鎮(zhèn)風(fēng)華膨潤土廠）；DODMAB-MMT按照張葵花等的方法進(jìn)行改性處理，季銨鹽含量為25.04%；Cu-MMT按照Guo等的方法進(jìn)行改性處理；使用原子吸收分光光度計(jì)測定上清液中Cu2+含量，差量法計(jì)算Cu-MMT中Cu2+含量為3.24%。

1.2 試驗(yàn)動物及日糧

科寶500型肉仔雞，購于宜昌正大畜牧有限公司武漢分公司。基礎(chǔ)日糧的配制參考NRC（1994）肉雞營養(yǎng)需要量，其組成及營養(yǎng)水平見表1，各試驗(yàn)組日糧組成見表2。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

表2 各試驗(yàn)組日糧組成

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

選取210羽7日齡健康、體重相近的科寶500型肉仔雞，隨機(jī)分為7組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6羽雞。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，其余處理組按要求飼喂試驗(yàn)日糧，試驗(yàn)肉雞采用地面分欄平養(yǎng)。預(yù)試期7 d，試驗(yàn)期21 d(即7～28日齡)，7日齡點(diǎn)眼接種新城疫弱毒活疫苗。預(yù)試期間所有肉仔雞飼喂基礎(chǔ)日糧。7日齡挑選體重相近的健康肉仔雞進(jìn)行分組，并開始飼喂試驗(yàn)日糧。整個(gè)試驗(yàn)期，所有雞只自由采食、飲水，試驗(yàn)當(dāng)天以及每周以重復(fù)為單位絕食（自由飲水）12 h后稱重，同時(shí)在飲水中添加電解多維以降低稱重應(yīng)激；試驗(yàn)期間每天以重復(fù)為單位詳細(xì)記錄采食量，計(jì)算7～28日齡的平均日采食量、平均日增重及料肉比。

1.4 樣品的采集及處理

28日齡所有試驗(yàn)雞絕食(自由飲水)12 h稱重，然后每重復(fù)取1羽體重接近該重復(fù)平均體重的肉仔雞，頸動脈放血處死，同時(shí)采血至已經(jīng)加入抗凝劑的離心管中用于測定相關(guān)指標(biāo)。

將雞解剖后，剝離左側(cè)胸肌和腿肌，剝離左側(cè)脛骨。將肝臟、腎臟、脾臟取出，剝離脂肪組織后稱重，放入-20℃保存，用于測定相關(guān)指標(biāo)。取出左側(cè)盲腸，用脫脂棉線結(jié)扎，將小腸中的食糜擠壓至回盲結(jié)合部附近，兩端用棉線結(jié)扎，-20℃保存，用于測定相關(guān)指標(biāo)。

1.5 指標(biāo)的測定

1.5.1 生長性能的測定

以重復(fù)為單位每天記錄采食量，7、14、21、28日齡早晨空腹稱重，計(jì)算平均日增重、平均日采食量和料肉比（平均日采食量/平均日增重）。

1.5.2 屠宰性能的測定

第4周（第4周屠宰，以測定蒙脫石對肉雞的短期影響）和試驗(yàn)結(jié)束后,每個(gè)重復(fù)取1只雞處死，屠宰,取樣，測活重、屠體重（去血、去毛）、全凈膛重、半凈膛重及組織器官重量指數(shù)。

1.5.3 微量元素和鈣、磷指標(biāo)的測定

分別稱取一定數(shù)量肝臟、腎臟、脾臟、胸肌、腿肌樣品，65℃烘干后回潮稱重，置于馬弗爐中，250℃炭化至無煙后，600℃灼燒3 h,冷卻后用加入10 ml 1∶3鹽酸和0.3 ml硝酸煮沸溶解，定容至50 ml容量瓶，用原子吸收分光光度計(jì)測定其中的微量元素鐵、鋅的含量。將脛骨于65℃烘干后回潮稱重，采用上述方法測定其中微量元素鐵、鋅的含量，用EDTA-二鈉絡(luò)合法測定其中鈣含量，比色法測定其中磷含量。微量元素含量和鈣、磷含量以風(fēng)干物質(zhì)為基礎(chǔ)。

將采集的血液進(jìn)行濕法消化：先用硝酸和高氯酸進(jìn)行消煮，冷卻后轉(zhuǎn)移到容量瓶中定容，再用原子吸收分光光度計(jì)測定其中的微量元素鐵、鋅和鈣濃度，以比色法測定其中磷含量。微量元素含量和鈣、磷含量以血液體積（ml）為基礎(chǔ)進(jìn)行計(jì)算。

1.5.4 腸道微生物指標(biāo)的測定

總厭氧菌計(jì)數(shù)用Wilkins Chalgren瓊脂，總需氧菌計(jì)數(shù)用Brain Heart Infusion瓊脂，乳酸桿菌計(jì)數(shù)用MRS瓊脂，大腸桿菌計(jì)數(shù)用MacConkay瓊脂。采用平板涂布方法進(jìn)行盲腸和小腸內(nèi)容物細(xì)菌計(jì)數(shù)。無菌條件下，稱取盲腸或小腸內(nèi)容物0.5 g左右進(jìn)行10倍梯度稀釋，在適宜稀釋度取100 μl涂布于瓊脂平板，涂布均勻后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。大腸桿菌和總需氧菌需氧培養(yǎng)24 h活菌計(jì)數(shù)，乳酸桿菌和總厭氧菌厭氧培養(yǎng)48 h活菌計(jì)數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

以SAS(6.12)統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析,采用Duncan's法多重比較,以P＜0.05為差異顯著水平,試驗(yàn)結(jié)果全部以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（M±SD）表示。

2 結(jié)果

2.1 對肉仔雞生長性能的影響（見表3）

表3 不同處理組肉仔雞生長性能（n=30）

由表3可知，各組采食量之間沒有顯著性差異(P＞0.05)。與對照組相比，處理4組平均日增重降低了11.59%（P＜0.05），其余各組雖然也有降低的趨勢，但差異不顯著 (P＞0.05)。處理3組料肉比最低，僅為1.64，處理4組料肉比最高，達(dá)到1.75，二者之間差異顯著（P＜0.05），其余各組料肉比介于處理3組和處理4組之間，且相互之間沒有顯著性差異(P＞0.05)。

2.2 對肉仔雞屠宰性能的影響（見表4）

表4 不同處理組肉仔雞屠宰性能（%）（n=5）

不同處理對28日齡肉仔雞屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、胸肌率和腿肌率均無顯著影響(P＞0.05)。

2.3 對肉仔雞組織器官和血液相應(yīng)元素水平的影響

2.3.1 對肉仔雞肝臟和脾臟中微量元素含量的影響（見表5）

表5 不同處理組肝臟和脾臟中鋅和鐵含量（μg/g）（n=5）

不同處理對肝臟中鋅的含量有影響。和對照組相比,處理4組、6組均能夠顯著提高肝臟中鋅的濃度,分別提高了311.34%和259.27%(P＜0.05)。相反的是，處理1組和處理2組有降低肝臟中鋅濃度的趨勢(P＞0.05)。不同處理對肝臟中的鐵的濃度和脾臟中的鋅和鐵的濃度無顯著性影響。

2.3.2 對肉仔雞腎臟中微量元素含量的影響（見表6）

表6 不同處理組腎臟中微量元素含量（μg/g）

結(jié)果顯示，各處理組腎臟中鋅、鐵含量均無顯著性差異(P＞0.05)。

2.3.3 對肉仔雞胸肌和腿肌中鋅的影響（見表7）

表7 不同處理組胸肌和腿肌中鋅含量（μg/g）

和對照組相比，各個(gè)處理組中胸肌鋅含量均有降低的趨勢，且隨著蒙脫石或改性蒙脫石用量的增加，胸肌中鋅含量降低幅度增大，但各組之間差異不顯著(P＞0.05)。不同處理組之間腿肌中鋅含量無差異。

2.3.4 對肉仔雞脛骨中微量元素和鈣、磷含量的影響（見表8）

表8 各組脛骨中微量元素及鈣、磷含量

各處理組之間脛骨鈣含量并未出現(xiàn)差異(P＞0.05)。與對照組相比，處理4組脛骨鋅含量顯著降低了34.2%（P＜0.05），其余各組與對照組之間無顯著性差異(P＞0.05)。處理 4 組鐵含量降低了 26.34%(P＜0.05)，處理2、3、5、6組也有降低脛骨鐵含量的趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)。與對照組相比，處理4組脛骨磷含量降低了17.66%(P＜0.05)；處理6組脛骨磷含量也降低了 5.7%，但差異不顯著(P＞0.05)。

2.3.5 對肉仔雞血液中微量元素和鈣、磷濃度的影響（見表9）

表9 各組血液中微量元素及鈣、磷含量（μg/ml）

不同處理組之間鋅、鈣、磷水平都沒有顯著性差異(P＞0.05)。和對照組相比，在日糧中添加蒙脫石或改性蒙脫石產(chǎn)品，有提高血液中鐵含量的趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)。

2.4 對肉仔雞盲腸和小腸細(xì)菌計(jì)數(shù)的影響（見表10、表11）

表10 各組肉仔雞盲腸內(nèi)容物微生物含量[log10(cfu/g內(nèi)容物)]

表11 各組肉仔雞小腸內(nèi)容物微生物含量[log10(cfu/g內(nèi)容物)]

各個(gè)處理組之間，盲腸和小腸內(nèi)容物的總需氧菌、總厭氧菌、乳酸桿菌以及大腸桿菌濃度均無顯著性差異(P＞0.05)。

3 討論

3.1 肉仔雞日糧添加蒙脫石對生長性能的影響

本試驗(yàn)中，肉仔雞日糧中添加0.2%和0.5%蒙脫石（處理1組、處理2組），其平均日采食量、平均日增重和料肉比與對照組相比均無顯著性差異(P＞0.05)。

大量研究表明，日糧中添加適量Cu-MMT能夠改善動物生長性能。楊榮芳等在仔豬和肥育豬日糧中添加Cu-MMT，能夠提高平均日增重，降低料肉比。楊榮芳等認(rèn)為，Cu-MMT能夠改善動物生長性能可能的原因?yàn)椋孩貱u-MMT能夠吸附腸道有害細(xì)菌，使得機(jī)體消化道內(nèi)環(huán)境得到改善；②Cu-MMT可以改善小腸的形態(tài)結(jié)構(gòu)，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收；③Cu-MMT能夠刺激小腸黏膜產(chǎn)生與促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收的相關(guān)酶的分泌。Xia等在雄性肉仔雞日糧中分別添加0.15%蒙脫石和0.15%Cu-MMT，發(fā)現(xiàn)添加Cu-MMT能夠增加肉仔雞的平均日增重。本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)日糧中Cu-MMT添加量達(dá)到0.5%時(shí)，與對照組相比較，肉仔雞料肉比升高，平均日增重顯著下降(P＜0.05)，表明肉仔雞前期日糧中添加0.2%Cu-MMT是比較適宜的，這與馬玉龍等、Xia等學(xué)者的推薦添加量也比較接近。而當(dāng)肉仔雞日糧Cu-MMT添加量達(dá)到0.5%時(shí)，對生長性能會產(chǎn)生不利影響。在肉仔雞日糧中添加0.2%～0.5%DODMAB-MMT，對肉仔雞料肉比無影響。

3.2 肉仔雞日糧中添加蒙脫石對動物礦物元素沉積的影響

在動物日糧中添加蒙脫石時(shí)，由于蒙脫石層間具有大量可交換陽離子，所以理論上可能會在動物體內(nèi)和其他動物體所需要的陽離子發(fā)生交換吸附，從而可能會對動物體微量元素和鈣、磷吸收等產(chǎn)生一定影響。為了考察日糧中添加蒙脫石或者改性蒙脫石產(chǎn)品是否會對肉仔雞的微量元素和鈣、磷吸收產(chǎn)生影響，本試驗(yàn)檢測了相關(guān)組織器官中的微量元素沉積、脛骨微量元素和鈣、磷沉積以及肉仔雞血液中微量元素和鈣、磷水平。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加蒙脫石或改性蒙脫石對肉仔雞腎臟、胸肌、脾臟和腿肌鋅濃度無影響，但是日糧中添加0.5%Cu-MMT或0.2%～0.5%季銨鹽改性蒙脫石，會顯著增高肝臟中鋅的水平(P＜0.05)。相反的是，日糧中添加0.5%Cu-MMT顯著降低脛骨鋅含量(P＜0.05)，添加 0.2%Cu-MMT 或 0.2%～0.5%季銨鹽改性蒙脫石，也有降低脛骨鋅的趨勢(P＞0.05)。日糧中添加0.2%～0.5%Cu-MMT以及季銨鹽改性蒙脫石，都有降低胸肌中鋅含量的趨勢（P＞0.05）。齊德生在AFB1污染的日糧中添加0.5%改性蒙脫石，對脛骨鋅沉積無影響，可能是因?yàn)楦男悦擅撌饕虯FB1結(jié)合占據(jù)了其結(jié)合位點(diǎn)。所以，在日糧中添加0.5%改性蒙脫石時(shí)，需要適當(dāng)考慮增加日糧中鋅的含量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加0.5%Cu-MMT，降低了脛骨鐵含量，日糧中添加0.5%蒙脫石、0.2%Cu-MMT或0.2%～0.5%DODMAB-MMT，均有降低脛骨鐵含量的趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)。

鈣、磷是體內(nèi)含量最多的礦物質(zhì)元素，國內(nèi)外大量試驗(yàn)都通過血液鈣、磷水平和脛骨鈣、磷水平的變化來評價(jià)家禽機(jī)體的鈣、磷營養(yǎng)狀況。本試驗(yàn)結(jié)果表明，肉雞日糧中添加蒙脫石或改性蒙脫石之后，血液鈣、磷水平并未發(fā)生顯著變化。脛骨鈣水平也無變化，但是添加0.5%Cu-MMT，顯著降低了脛骨磷濃度(P＜0.05)，日糧中添加0.5%季銨鹽改性蒙脫石，也有降低脛骨磷濃度的趨勢(P＞0.05)。有研究表明，低聚合羥基鐵離子-蒙脫石復(fù)合體對土壤中的磷也有很好的吸附效果。所以，可能是由于蒙脫石在體內(nèi)會吸附磷，從而導(dǎo)致脛骨磷濃度下降。為了保證脛骨能夠沉積足夠磷，在日糧中添加0.5%銅改性或季銨鹽改性蒙脫石時(shí)需要增加日糧中磷水平。

3.3 肉仔雞日糧中添加蒙脫石對小腸和盲腸微生物的影響

本研究體外試驗(yàn)表明，Cu-MMT和DODMABMMT對大腸桿菌（E.coli）和豬鏈球菌（S.suis）有良好的抗菌效果，這與眾多研究者的結(jié)果一致。大腸桿菌是動物腸道的正常菌群，某些大腸桿菌可能會引起腹瀉及其他多種炎癥。乳酸桿菌能夠拮抗致病菌，而且能黏附于腸道細(xì)胞上，從而保護(hù)動物腸道。腸道總需氧菌和總厭氧菌的數(shù)量從一定程度上反映了腸道的健康狀況，總需氧菌適當(dāng)下降、總厭氧菌適當(dāng)升高有利于動物的腸道健康。馬玉龍等在肉仔雞日糧中分別添加1%和2%Cu-MMT，發(fā)現(xiàn)都能使21日齡肉仔雞小腸和盲腸大腸桿菌的數(shù)量顯著減少(P＜0.05)，對總需氧菌、總厭氧菌和乳酸桿菌數(shù)量沒有影響，對42日齡肉仔雞小腸和盲腸總需氧菌、總厭氧菌、大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量沒有影響。Xia等報(bào)道，肉仔雞日糧中添加0.15%蒙脫石，有降低盲腸大腸桿菌數(shù)量的趨勢(P＞0.05)，添加0.15%Cu-MMT可以顯著降低盲腸大腸桿菌數(shù)量（P＜0.05）。Xia等報(bào)道，斷奶仔豬日糧中添加0.15%Cu-MMT會顯著降低小腸中大腸桿菌和梭菌數(shù)量（P＜0.05），而添加0.15%蒙脫石則不能起到降低腸道有害細(xì)菌數(shù)量的目的。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在肉仔雞日糧中添加蒙脫石或改性蒙脫石，對小腸和盲腸中的總需氧菌、總厭氧菌、大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量都沒有影響。本試驗(yàn)與前人的研究結(jié)果產(chǎn)生差異的原因是：①飼養(yǎng)環(huán)境不同導(dǎo)致動物的健康狀況有所不同；②蒙脫石及改性蒙脫石的添加量不同。

4 小結(jié)

肉仔雞日糧中添加Cu-MMT或DODMAB-MMT時(shí)，對腸道微生物不會造成影響，對動物有一定的促生長作用。但是體內(nèi)微量元素的沉積會受到一定的影響，對脛骨中磷的沉積能產(chǎn)生較大的影響，所以在飼料中添加Cu-MMT或DODMAB-MMT時(shí)要注意適當(dāng)補(bǔ)充微量元素和磷。

（參考文獻(xiàn)34篇，刊略，需者可函索）