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        莓葉委陵菜醇提物急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

        2012-12-03 08:01:38閔運(yùn)江陳澍潭
        皖西學(xué)院學(xué)報(bào) 2012年5期
        關(guān)鍵詞:委陵菜三萜類黃酮類

        閔運(yùn)江,陳澍潭

        (1.皖西學(xué)院 生物與制藥工程學(xué)院,安徽 六安237012;2.安徽省植物生物技術(shù)實(shí)訓(xùn)中心,安徽 六安237012)

        莓葉委陵菜(Potentilla fragarioides L.),為薔薇科(Rosaceae)委陵菜屬(Potentilla)多年生草本植物[1-2],別名雉子筵、毛猴子、菜飄子、滿山紅等。其根極多;莖直立或傾斜,簇生叢狀,莖葉有長柔毛;基生葉為成叢生狀,奇數(shù)羽狀復(fù)葉,葉柄有開展的疏長柔毛,小葉5~9枚,上部小葉較下部的大。頂生傘房狀聚傘花序,花多,黃色;瘦果小,近腎形。常生長于草地、溝邊、灌叢及疏林下。

        莓葉委陵菜主產(chǎn)江蘇、浙江、江西、山東及安徽等省。其植株中的生物活性成分含量豐富,其中總黃酮含量,顯著高于已被廣泛研究的銀杏葉中黃酮含量。據(jù)初步研究,安徽產(chǎn)委陵菜屬植物各種類的全草都含黃酮類、三萜類、有機(jī)酸等[3],均可藥用,已有報(bào)道的委陵菜(Potentilla chinensis Ser.)、三葉委陵菜(Potentilla freyniana Bornm.)等三萜類成分含量較高,有清熱解毒、涼血止血等功能[4-5]。黃酮類、三萜類等化合物具有較強(qiáng)生物活性,能防治血管硬化和降低心肌耗氧量等;也是天然抗氧化劑,能增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗衰老、抗癌防癌等,在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用[6-10]。有研究表明,三萜類有顯著抗病毒活性[11-12]。此外,莓葉委陵菜因其花色鮮黃而艷麗,繁殖力強(qiáng)而在城市園林綠化中常被用作地被植物。而對(duì)于莓葉委陵菜的乙醇提取物急性毒性研究尚未見報(bào)道。本研究即是用新制備的莓葉委陵菜乙醇提取物給實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃,觀察其急性毒性反應(yīng),從而為莓葉委陵菜的藥用開發(fā)利用提供初步的安全性參考數(shù)據(jù)。

        1 材料、方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        試驗(yàn)所用小鼠為南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的昆明種小鼠,許可證號(hào):SCXK(蘇)2002-0031,雌雄各占50%,體重20±2g。正式試驗(yàn)前先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

        1.2 儀器、試劑

        TU-1201紫外-可見分光光度計(jì),HH—4恒溫水浴鍋,40目標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩,RE-52D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,101AS-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱,超聲波破碎儀,加熱回流裝置;乙醇,乙醚,等;試劑均為AR級(jí)。

        1.3 莓葉委陵菜乙醇提取物的制備

        1.3.1 莓葉委陵菜的處理

        新鮮莓葉委陵菜根采于六安市小華山荒地林緣,新鮮材料先經(jīng)105℃殺青15min,70℃烘至近干,剪成2~3mm小段,再用103℃烘干。干樣品磨成粉末,過40目篩后的粉末于103℃烘至恒重,干燥器中冷卻,備用。

        1.3.2 脫脂

        Soxhlet提取法,45℃下無水乙醚脫脂約20h,待充分除去樣品中脂類和脂溶性色素后取出樣品濾紙包,吹干乙醚,103℃烘干,備用。

        1.3.3 浸提

        脫脂后的材料,置于三角燒瓶中,搗碎并加入80%乙醇(V/V),80℃水浴中回流浸提10次,每次浸提2h,第一次浸提固液比為1∶5(g∶ml),其后各次浸提的固液比為1∶3,最后一次浸提的乙醇浸提液幾乎為無色,表明已浸提充分。合并10次浸提液于分液漏斗中,加適量石油醚,充分震蕩,靜置,棄去石油醚層,以進(jìn)行二次脫脂,收集脫脂處理后的含粗黃酮和三萜類物質(zhì)的提取液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮,至一定體積后取出,移于燒杯內(nèi)。

        1.3.4 制備乙醇提取物

        將上述燒杯中的浸提液,在90℃水浴中加熱濃縮,至注射器能抽動(dòng)的最大濃度,即為實(shí)驗(yàn)用莓葉委陵菜乙醇提取物。換算該乙醇提取物,每ml提取物相當(dāng)于3.6g新鮮莓葉委陵菜原料。依據(jù)文獻(xiàn)方法[13],測定提取物中黃酮類和三萜類的含量,提取物中含三萜類和黃酮類總量為36.0mg/ml。

        1.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

        依文獻(xiàn)方法[14-15],選取體重20±2g的小鼠20只,隨機(jī)分為2組,每組雌雄各半,分別為給藥組和空白對(duì)照組。給藥組小鼠分別在頭、背、尾部用黑色記號(hào)筆標(biāo)注,記錄為1~10號(hào)。灌胃前禁食不禁水16 h,按每kg小鼠體重給予莓葉委陵菜乙醇提取物20 ml劑量灌胃;灌胃后,連續(xù)觀察小鼠7d,記錄其活動(dòng)、飲食、毛發(fā)、大小便和死亡情況等,解剖觀察死亡小鼠的心、肺、肝、腎、脾等主要器官的組織變化;未死亡的小鼠,實(shí)驗(yàn)第8d稱其體重后處死,解剖觀察其心、肝、脾、肺、腎等主要器官的組織變化。

        2 結(jié)果

        2.1 莓葉委陵菜乙醇提取物對(duì)小鼠體征的影響

        小鼠給予莓葉委陵菜乙醇提取物21.50g/kg灌胃后10min內(nèi),與對(duì)照組小鼠比較,均表現(xiàn)為活動(dòng)減少,精神不佳;10min后,小鼠活動(dòng)恢復(fù)正常,應(yīng)為灌胃刺激的影響所致;連續(xù)觀察7d,存活的受試小鼠的飲食、毛色、活動(dòng)及大小便均正常,眼、鼻、口腔未見異常分泌物,無不良癥狀出現(xiàn)。

        2.2 給藥前后小鼠體重的變化

        各組小鼠的體重及其變化情況見表1。

        由表1可見,給藥組小鼠體重平均增重6.6g,而空白對(duì)照組小白鼠的體重增重7.1g,考慮到灌胃影響,尤其是灌胃初期對(duì)其食欲的影響,可認(rèn)為藥物對(duì)其體重增重?zé)o顯著影響。

        表1 莓葉委陵菜醇提物對(duì)試驗(yàn)小鼠體重的影響

        2.3 小鼠死亡狀況

        灌胃后7d,給藥組小鼠有一只在給藥后1min內(nèi)死亡,經(jīng)解剖后發(fā)現(xiàn)是由于灌胃時(shí)注射器針頭插進(jìn)了胸腔里,導(dǎo)致胸腔破裂等機(jī)械性致死,屬于操作不當(dāng)致死,其余試驗(yàn)小鼠均正常,未出現(xiàn)給藥后死亡的情況。

        2.4 對(duì)小鼠心、肝、肺、腎、脾等臟器的影響

        處死所有試驗(yàn)后的小鼠,解剖各組實(shí)驗(yàn)小鼠心、肺、肝、腎、胃、脾等主要臟器,均未見異常病變。

        由以上試驗(yàn)可知,莓葉委陵菜醇提物21.50g/kg灌胃小鼠,對(duì)小鼠均無影響,表明莓葉委陵菜乙醇提取物對(duì)小鼠的LD50大于21.50g/kg。

        3 討論

        目前,國內(nèi)外對(duì)委陵菜屬植物的研究,大多是針對(duì)其性狀、產(chǎn)地分布、種屬分類及栽培技術(shù)等方面,國外有其抗病毒活性的研究。對(duì)莓葉委陵菜醇提物的急性毒性研究,是為其藥用、食用時(shí)對(duì)人體是否有毒副作用的基本要求之一。根據(jù)保健食品毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法,本研究將小白鼠分為2組,每組10只,雌雄各半,分為給藥組和空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果,只有1只由于操作不當(dāng)致其死亡,其余小鼠灌胃后的活動(dòng)、飲食、糞便、毛發(fā)和精神狀態(tài)等方面,均無異常表現(xiàn),未見任何急性中毒癥狀或藥物致死現(xiàn)象,表明試驗(yàn)小鼠在灌胃莓葉委陵菜乙醇提取物20ml/kg,即720mg/kg的情況下,未出現(xiàn)急性中毒癥狀。因此,小鼠對(duì)受試物的LD50大于21.50g/kg,表明莓葉委陵菜乙醇提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠無毒副作用[11-12]。

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