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        川芎嗪聯(lián)合丹參酮ⅡA對缺血再灌注大鼠肺損傷的保護作用研究

        2012-12-03 03:35:30韓敏珍冉群釵貴陽醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院貴陽556000
        中國藥房 2012年23期
        關(guān)鍵詞:劑量模型

        韓敏珍,冉群釵(貴陽醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院,貴陽 556000)

        體外循環(huán)心臟外科手術(shù)、肺移植、心肺聯(lián)合移植手術(shù)在臨床上已成為常規(guī)手術(shù),但肺缺血再灌注損傷是術(shù)后最常見的并發(fā)癥和導(dǎo)致死亡(流行病學調(diào)查顯示其病死率達35%~40%)的主要原因之一[1~3]。川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)原名芎藭,民間常用其治療跌撲腫痛、頭痛等證。其性味辛、溫、香、燥,乃血中之氣藥,具有辛散、解郁、通達、止痛等功效。丹參(Salvia miltiorrhiza Bge.)又名赤參、紫丹參、紅根等,民間常用其治療月經(jīng)不調(diào)、熱痹疼痛,心煩不眠、心絞痛等證。其性味苦、微寒,具有活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛、涼血消癰、清心除煩、養(yǎng)血安神等功效[4]。目前對于川芎和丹參聯(lián)合治療肺缺血再灌注損傷方面的研究少有報道。為此,筆者將川芎有效成分川芎嗪與丹參有效成分丹參酮ⅡA對肺缺血再灌注損傷模型大鼠的保護作用進行研究,以期為肺缺血再灌注損傷的臨床用藥提供理論依據(jù)。

        1 儀器與材料

        1.1 儀器

        BH-1200型電子天平(上海英展機電企業(yè)有限公司);DZF型真空干燥箱(上海華連醫(yī)療器械有限公司);UV3200型紫外分光光度計(上海美普達儀器有限公司);MX51型顯微鏡(日本Olympus公司);AJ5805型微量注射泵(上海安潔電子設(shè)備有限公司);1-14K型高速離心機(德國Sigma公司)。

        1.2 試藥

        鹽酸川芎嗪(珠海遠程醫(yī)藥化工有限公司,批號:20110317,含量:>99%);丹參酮ⅡA(武漢大華偉業(yè)醫(yī)藥化工有限公司,批號:20110109,含量:90%);醋酸地塞米松(DEX,上海撫生實業(yè)有限公司,批號:20101105);維庫溴銨(上海工碩生物技術(shù)有限公司);丙二醛(MDA)、髓過氧化物酶(MPO)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

        1.3 動物

        清潔級SD大鼠70只,♀♂兼用,體重(220±20)g,由重慶醫(yī)科大學實驗動物中心提供(動物使用合格證號:SCXK(渝)2002001)。

        2 方法

        2.1 模型的制備

        參考Eppinger方法[5],以維庫溴銨0.6 mg·kg-1·h-1經(jīng)微量注射泵持續(xù)輸注維持麻醉。大鼠右側(cè)臥位,經(jīng)左側(cè)第五肋間進胸,離斷左下肺韌帶,游離左肺門,靜脈注射50 u肝素5 min后,用無創(chuàng)血管夾夾閉左肺門(包括左主支氣管與左肺動、靜脈),少量冰鹽水沖洗肺表面,縫線閉合胸腔。阻斷45 min后松開血管夾,形成再灌注。假手術(shù)組的大鼠僅做游離左肺門,并不進行夾閉。

        2.2 分組與給藥

        70只大鼠均分為7組,即空白對照(等容生理鹽水)、假手術(shù)(等容生理鹽水)、模型(等容生理鹽水)、DEX(5 mg·kg-1)和川芎嗪+丹參酮ⅡA高、中、低劑量(40+12、20+6、10+3 mg·kg-1)組。ig相應(yīng)藥物,每天1次,于缺血前3 d進行,連續(xù)3 d。

        2.3 指標的檢測

        2.3.1 MDA含量、MPO活性的檢測 于再灌注24 h后,動脈放血處死大鼠,取大鼠血漿按試劑盒說明書檢測MDA含量;留取部分左肺下葉組織凍存,按試劑盒說明書檢測肺組織MPO含量。

        2.3.2 濕重/干重比值(W/D)的檢測 取肺吸干表面水分后稱重,為濕重(W);再置于80℃真空干燥箱干燥48 h至恒重后稱重,為干重(D)。計算W/D。

        2.3.3 肺通透指數(shù)的檢測 于再灌注24 h后,局麻狀態(tài)下將纖維支氣管鏡插入左肺舌段的支氣管,將其端口插入支氣管分支開口,注入37℃的無菌生理鹽水,每次30~50 mL,總量200 mL,以-15 kpa負壓吸出,收集于容器。取大鼠全血,于4 ℃、3000 r·min-1離心10 min,取上清液。采用考馬斯亮藍染色法(Bradford法)測定血清總蛋白含量和支氣管灌洗液(BALF)蛋白含量,按下列公式計算肺通透指數(shù):肺通透指數(shù)(%)=BALF蛋白含量/血清蛋白含量×100%。

        2.4 統(tǒng)計學方法

        3 結(jié)果

        3.1 MDA含量、MPO活性的測定結(jié)果

        缺血再灌注24 h后,與空白對照組比較,模型組MDA含量顯著增加(P<0.01),MPO活性顯著增強(P<0.01)。與模型組比較,川芎嗪+丹參酮ⅡA高、中劑量組MDA含量顯著減少(P<0.01或P<0.05),MPO活性顯著減弱(P<0.01或P<0.05);川芎嗪+丹參酮ⅡA低劑量組MDA含量有所減少,MPO活性有所減弱,但無顯著性差異(P>0.05)。MDA含量、MPO活性的測定結(jié)果見表1。

        3.2 W/D、肺通透指數(shù)的測定結(jié)果

        缺血再灌注24 h后,與空白對照組比較,模型組W/D、肺通透指數(shù)顯著增加(P<0.01)。與模型組比較,川芎嗪+丹參酮ⅡA高、中劑量組W/D、肺通透指數(shù)顯著減少(P<0.01或P<0.05);川芎嗪+丹參酮ⅡA低劑量組W/D、肺通透指數(shù)有所減少,但無顯著性差異(P>0.05)。W/D、肺通透指數(shù)的測定結(jié)果見表2。

        表1 MDA含量、MPO活性的測定結(jié)果(±s,n=10)Tab 1 Determination of MDA content and MPO activity(±s,n=10)

        表1 MDA含量、MPO活性的測定結(jié)果(±s,n=10)Tab 1 Determination of MDA content and MPO activity(±s,n=10)

        與空白對照組比較:*P<0.01;與模型組比較:#P<0.05,##P<0.01vs.blank control group:*P<0.01;vs.model group:#P<0.05,##P<0.01

        組別空白對照組假手術(shù)組模型組DEX組川芎嗪+丹參酮ⅡA高劑量組川芎嗪+丹參酮ⅡA中劑量組川芎嗪+丹參酮ⅡA低劑量組劑量/mg·kg-1---540±1220±610±3 MDA/mmol·mg-16.89±0.376.72±0.269.31±0.30*7.06±0.29##7.34±0.31##7.92±0.24#8.87±0.35 MPO/IU·g-11.13±0.091.19±0.071.64±0.12*1.20±0.08##1.29±0.12##1.38±0.14#1.46±0.11

        表2 W/D、肺通透指數(shù)的測定結(jié)果(±s,n=10)Tab 2 Determination of W/D and lung permeability index(±s,n=10)

        表2 W/D、肺通透指數(shù)的測定結(jié)果(±s,n=10)Tab 2 Determination of W/D and lung permeability index(±s,n=10)

        與空白對照組比較:*P<0.01;與模型組比較:#P<0.05,##P<0.01vs.blank control group:*P<0.01;vs.model group:#P<0.05,##P<0.01

        組別空白對照組假手術(shù)組模型組DEX組川芎嗪+丹參酮ⅡA高劑量組川芎嗪+丹參酮ⅡA中劑量組川芎嗪+丹參酮ⅡA低劑量組- - - 540±1220±610±34.15±0.164.17±0.145.73±0.09*4.24±0.11##4.45±0.08##4.87±0.13#5.19±0.110.69±0.110.74±0.092.84±0.09*0.85±0.12##1.24±0.17##1.89±0.14#2.42±0.08劑量/mg·kg-1W/D肺通透指數(shù)

        4 討論

        肺缺血再灌注后機體供氧突然增加,產(chǎn)生大量過氧化產(chǎn)物,中性粒細胞(PMN)大量生成,激活與釋放多種炎性介質(zhì),引起微血管損傷[6]。MDA是脂質(zhì)過氧化過程中形成的代謝產(chǎn)物,其含量高低不僅反映了體內(nèi)氧化程度,并且被視為判斷氧自由基產(chǎn)生和組織損傷的主要標志之一[7]。PMN中存在MPO,每個細胞所含該酶的量約為細胞干重的5%,通過分析該酶活性可間接測定PMN的數(shù)量,反映PMN的異常情況,也間接反映組織損傷水平。有報道[8],肺經(jīng)缺血再灌注后,PMN的激活與黏附可引起微血管通透性增高,細胞間質(zhì)水腫,肺含水量增多,是患者呼吸功能下降的原因之一。W/D表示組織水腫形成情況,間接反映毛細血管的通透性。肺通透指數(shù)能更加直觀地反映肺的通透性。

        本研究表明,模型組較空白對照組大鼠血漿MDA含量顯著增加(P<0.01),肺勻漿MPO活性顯著增強(P<0.01),W/D、肺通透指數(shù)顯著增加(P<0.01),表明肺缺血再灌注模型大鼠復(fù)制成功。川芎嗪+丹參酮ⅡA高、中劑量組較模型組大鼠血漿MDA含量顯著減少(P<0.05或P<0.01),肺勻漿MPO活性顯著減弱(P<0.05或P<0.01),W/D、肺通透指數(shù)顯著減小(P<0.05或P<0.01);川芎嗪+丹參酮ⅡA低劑量組各項指標有改善趨勢但無顯著性差異,表明川芎嗪+丹參酮ⅡA聯(lián)合用藥對肺缺血再灌注損傷大鼠有保護作用。

        綜上所述,川芎嗪+丹參酮ⅡA聯(lián)合用藥可減少過氧化物MDA的生成,減弱MPO活力,從而起到減少PMN數(shù)量的作用,并能降低W/D和肺通透指數(shù)以增加肺與毛細血管的通透性,從而在臨床對肺缺血再灌注損傷的用藥方面提供實驗支持。

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