張苗苗，戴夢紅，黃玲利，王玉蓮，袁宗輝

(華中農業(yè)大學動物科技－動物醫(yī)學院，國家獸藥殘留基準實驗室，武漢 430070)

抗菌藥在畜禽養(yǎng)殖業(yè)大量無節(jié)制地濫用，尤其是長期低劑量使用引起的抗菌藥耐藥性問題，越來越引起國際上的廣泛關注。世界動物衛(wèi)生組織(World Organization for Animal Health，OIE)，又稱國際獸疫局(Office International des Epizooties)是1924年成立的一個國際組織，負責制定國際動物衛(wèi)生法規(guī)，制定各種動物疫病的診斷、預防和控制方法，為全球動物衛(wèi)生工作制定并提供標準化和規(guī)范化的技術資料。本文詳細介紹OIE制定的抗菌藥耐藥性國際標準，即5個指南，包括“協(xié)調抗菌藥耐藥性監(jiān)督和檢測程序指南”、“畜牧業(yè)抗菌藥消耗量監(jiān)測指南”、“獸用抗菌藥慎用指南”、“抗菌藥敏感性檢測的實驗室方法指南”、“動物源抗菌藥耐藥性對公共健康潛在影響的風險分析方法指南”。希望為我國獸藥使用和管理提供一定的借鑒，為政策制定者提供一定的參考。

1 協(xié)調抗菌藥耐藥性監(jiān)督和檢測程序指南［1］

1.1 目的意義 考察抗菌藥耐藥性的趨勢，發(fā)現(xiàn)新的耐藥機制，為人類和動物健康相關的風險分析提供必要的資料，為動物和公共衛(wèi)生政策的制定提供基礎，為處方用藥和合理使用抗菌藥提供信息和參考。

1.2 建立抗菌藥耐藥性監(jiān)測系統(tǒng)

1.2.1 要求 在食物鏈中的各個環(huán)節(jié)(加工、包裝和零售)收集資料，定期對動物食品、環(huán)境和人類進行耐藥性監(jiān)測和耐藥流行率監(jiān)測。

1.2.2 采樣 ①一般采用統(tǒng)計學基礎進行采樣，確保樣品具有代表性、采樣方法的合理性。采樣時應考慮樣本大小，樣本來源(動物、食品、動物飼料)，動物種類，同種動物的動物群體(不同的年齡組、生產類型)，動物群體的細分，動物的健康狀況(健康、疾病)，隨機抽樣調查，樣本(糞便、屠體、加工過的食物)等;②樣本量大小要合適，既要能夠監(jiān)測到現(xiàn)存的耐藥性，又要避免不必要的浪費。采樣應該遵循標準化操作規(guī)程。

1.2.3 樣本來源 樣本來源很廣泛，主要包括動物樣本(牛、育肥豬、肉雞、蛋雞及其他家禽、養(yǎng)殖魚類等)，食品和動物飼料(包括進口飼料)，還有花卉和蔬菜(表1)。

表1 耐藥性監(jiān)測的樣本來源、樣本類型和監(jiān)測目的

1.2.4 樣本采集 家畜應該收集糞樣(牛和豬的糞便樣本至少5 g)，家禽應收集全部的盲腸內容物。屠宰場采集的屠體樣本能夠提供一些關于屠宰過程中的衛(wèi)生、肉的污染水平方面的信息，食品到達消費者前的流行情況可以通過零售樣本獲得。用于屠宰后食物鏈中耐藥性監(jiān)測的樣本由食品加工微生物監(jiān)測和HAPPC(危害分析和關鍵控制點)系統(tǒng)提供。

1.2.5 細菌分離 ①動物病原體(表2):關于動物細菌性病原體資料一般從獸醫(yī)診斷實驗室的臨床病例中獲得;②人畜共通菌:包括沙門氏菌、彎曲桿菌和出血性大腸桿菌(EHEC)。沙門氏菌一般從牛、豬、肉雞和其他家禽中分離獲得，最好能在屠宰場獲得，也可從特定的國家實驗室獲得。細菌的分離和鑒定應該按照國際上認可的程序進行。彎曲桿菌敏感試驗推薦使用瓊脂或肉湯微量稀釋法;③共生菌:包括大腸桿菌和腸球菌。這些細菌被作為耐藥基因的貯存庫，使耐藥菌和耐藥基因在動物和人之間轉移。一般從屠宰場的健康動物獲得。

表2 耐藥性監(jiān)測的動物細菌性病原菌

1.2.6 耐藥菌的貯藏 耐藥菌至少要貯藏到監(jiān)測報告完成，最好能夠永久地保存。

1.2.7 監(jiān)測的抗菌藥種類 一般來說人醫(yī)和獸醫(yī)臨床上重要的抗菌藥都應該進行監(jiān)測，但是也受到各個國家經濟條件的限制。

1.2.8 資料記錄和保存 抗菌敏感性資料應該進行定量報告。

1.2.9 結果的報告、保存和解釋 ①考慮建立數據庫;②注意原始資料的保存;③用電腦操作實現(xiàn)不同系統(tǒng)間的轉換;④資料記錄至少應包括采樣程序、采樣日期、動物種屬/群體、樣本類型、采樣目的、動物或群體地域、動物年齡;⑤實驗室資料應包括實驗室鑒定、分離日期、報告日期、細菌種類、血清型、噬菌體型、抗菌藥敏感性結果/耐藥表型;⑥分離的耐藥菌的比例和界定的臨界點;⑦根據臨界點把菌株分為敏感性、中間敏感性和耐藥性。

1.2.10 基準實驗室和年度報告 國家應該指定一個國家基準中心負責協(xié)調耐藥性監(jiān)測相關的工作，負責收集資料，起草年度報告。國家基準中心應該有權使用原始數據完成實驗室間的校對工作，有權獲得實驗結果和監(jiān)測系統(tǒng)結構的信息、選擇實驗室方法的信息。

2 畜牧業(yè)抗菌藥消耗量監(jiān)測指南［2］

2.1 目的意義 為風險評估和制定計劃提供數據和參考，分析和解釋耐藥性監(jiān)測數據，可以對慎用抗菌藥和干預措施的有效性進行評估，并指導抗菌藥處方的改變;評價隨著時間的推移抗菌藥使用趨勢和對抗菌藥耐藥性產生的作用。

2.2 使用量監(jiān)測系統(tǒng)

2.2.1 抗菌藥來源資料 ① 基本來源:各個國家數據來源不同，通常包括海關、進出口數據、制造業(yè)數據和制造業(yè)銷售數據;②直接的來源:批發(fā)商、零售商、藥劑師、獸醫(yī)人員、飼料加工廠;③最終使用者(獸醫(yī)人員和食品動物生產者):當基本來源和直接來源不能獲得信息，一些更精確的、當地專門的信息需要從最終用戶那里獲得。收集資料時應考慮季節(jié)性、疾病狀況、種屬影響、農業(yè)系統(tǒng)、劑量率和療程等。

2.2.2 資料分類 ①抗菌藥使用資料的要求:必須收集每年的食品動物用抗菌藥活性成分的量。收集資料時應該考慮每年某種特定的抗菌藥使用的活性成分的絕對千克數;某種特定的抗菌藥治療和促生長用的活性成分的千克數;不同動物種屬抗菌藥治療和促生長使用的細分;不同的給藥途徑(飼料、飲水、注射、口服、乳房內、子宮內和表面給藥)對資料進行細分;按不同的季節(jié)和地域進行進一步細分;進行資料分析，必要時要用電腦軟件進行分析。②抗菌藥種類:抗菌藥的命名法應該和國際標準一致;根據抗菌活性機制和抗菌藥耐藥性及相關效價，決定要監(jiān)測的抗菌藥種類。③種屬和生產系統(tǒng):國家對抗菌藥的使用應該進行登記，包括動物種屬(牛、山羊、綿羊、豬、禽、馬和魚)、疾病類型等。這將有助于鑒定可能出現(xiàn)的非授權使用量。2.2.3 其他重要的信息 將家畜進行分類和畜產品分類，將有助于進行風險分析，有助于在國內和國際層面上和人類抗菌藥使用進行比較，比如各類食品動物的總數和每年的食品生產量。

3 獸用抗菌藥慎用指南［3］

3.1 目的意義 該指南用于指導獸用抗菌藥合理和謹慎使用，旨在預防和降低動物耐藥菌的選擇，維持抗菌藥的有效性和確保動物的合理用藥;符合道德責任和經濟需要，保護動物健康;盡可能地預防、降低耐藥菌(耐藥基因)在動物種群的轉移，保護人類健康;抑制和降低耐藥菌或耐藥基因在動物和人類的轉移;維持抗菌藥在人醫(yī)的有效性;預防動物源食品的污染，預防藥物殘留超過最高殘留限量(MRL)。

3.2 調控當局的責任 ①國家調控當局負責按照《陸生動物法規(guī)》中要求的條款，批準其上市使用，應該加速新抗菌藥的市場審批程序。在主要依靠進口獸藥產品(Veterinary Medicinal Products，VMPs)的國家應該對進口VMPs的有效性、出口產品和生產廠家的可靠性進行考察;②負責抗菌藥質量控制和管理，應確保抗菌藥活性成分的分析規(guī)范和批準的條款一致，在有效期內確保抗菌藥的質量和穩(wěn)定性，確保在飼料和飲水中的穩(wěn)定性，生產中應確?？咕幍馁|量和純度;③臨床前試驗應確立抗菌藥的適用癥和給藥方案，臨床試驗應該對其有效性進行確證;④應對抗菌藥潛在耐藥性選擇進行評估，應考慮給定劑量給藥后動物腸道內活性成分的濃度，人類暴露于耐藥菌的途徑和水平，在同類抗菌藥和不同類抗菌藥的交叉耐藥程度，已經出現(xiàn)的人類健康相關病原體的耐藥水平等因素;⑤確立每日允許攝入量、最大殘留限量和休藥期，確立每種抗菌藥的產品特征概要(包括有效成分和種類、藥理性質、任何潛在的副作用、靶動物種類、年齡、適應癥、目標有機體、劑量給藥途徑、休藥期、使用禁忌、貯存期限、注意事項、過期產品處理時注意事項、潛在耐藥性選擇和使用條件);⑥上市后抗菌耐藥性監(jiān)測，包括一般的流行病學監(jiān)測和專門的耐藥性監(jiān)測;⑦相關當局應該確保所有用于動物的抗菌藥通過批準的分配系統(tǒng)才能供應，通過獸醫(yī)人員或其他授權人員處方給藥，在獸醫(yī)人員和其他授權人員的監(jiān)督下給藥，相關當局還應該制定有效的方法來處理不用的或過期的VMPs;⑧所有的抗菌藥廣告都應該遵循《廣告標準法規(guī)》，相關當局要確?？咕a品的廣告和市場上批準使用的一致，尤其是產品特征概要，要符合各國國家立法;⑨對調控當局、制藥公司、獸醫(yī)院校、研究所、獸醫(yī)專業(yè)組織和養(yǎng)殖人員等進行相關的培訓;⑩相關當局應該鼓勵研究工作。

3.3 獸藥工業(yè)的責任 ①獸藥工業(yè)應該提供國家調控當局要求的獸用抗菌藥市場審批的所有資料，確保這些資料的可靠性，應實施藥物警戒性系統(tǒng)，對細菌敏感性和耐藥性進行專門的監(jiān)測;②獸用抗菌藥只有官方的批準才能銷售，只有通過批準的銷售系統(tǒng)供應，制藥工業(yè)應該為出口產品提供品質保證書;③抗菌產品的廣告應和市場上批準使用的一致;④參與培訓和研究工作。

3.4 批發(fā)商和零售商的責任 ①零售商只能是獸醫(yī)人員或其他授權人員，所有抗菌藥都應貼上標簽;②零售人員應該了解合理使用抗菌藥指南，并保持詳細的記錄，包括銷售日期、處方醫(yī)師、使用者姓名、產品名、批號、銷售量;③應該參與培訓。

3.5 獸醫(yī)人員的責任 ①獸醫(yī)人員應對動物進行正確的臨床檢查，根據需要開處方藥;②根據獸醫(yī)人員的臨床經驗，病原體的活性，合理的給藥途徑，抗菌藥在感染位點的活性，抗菌藥耐藥性相關的流行病史來選擇抗菌藥。一種抗菌藥治療失敗或疾病復發(fā)后，應該根據診斷結果選擇第二種抗菌藥，采用聯(lián)合用藥來提高療效;③合理使用選好的抗菌藥，應嚴格按照治療方案、劑量、給藥間隔、治療療程、休藥期給藥。標簽外用應該在允許的條件下使用，并和國家規(guī)定一致;④保持記錄，包括產品名、給藥量、藥物休藥期、抗菌藥敏感性資料、動物給藥后的反應、治療后的副作用;⑤所有由獸醫(yī)人員提供的抗菌藥都應該貼有標簽;⑥獸醫(yī)人員應該參與到培訓計劃中來。

3.6 食品動物生產者的責任 ①食品動物生產者應該和獸醫(yī)人員共同起草健康計劃(飼養(yǎng)場衛(wèi)生計劃、乳腺炎控制計劃、體內外寄生蟲控制計劃和疫苗方案);②抗菌藥用于動物群體時，應按標簽說明或在獸醫(yī)的監(jiān)督下給藥;③對患病動物進行隔離，對于死亡動物要按照管理部門的規(guī)定進行迅速處理;④抗菌藥要按照標簽說明書貯藏;⑤注意人們和患病動物的接觸和環(huán)境衛(wèi)生;⑥要在有效期內使用，對于一些過剩的抗菌藥要安全處理;⑦保持所有的實驗室細菌學記錄和敏感性記錄;⑧所有藥物的使用都要保留記錄，包括產品和批號、處方醫(yī)師、給藥日期、給藥動物、臨床治療狀態(tài)、劑量、休藥期、實驗室試驗結果、治療效果;⑨負責再發(fā)性疾病。

4 抗菌藥敏感性檢測的實驗室方法［4］

4.1 目的意義 OIE和WHO認識到耐藥菌的蔓延已成為一個危害全球動物和人類健康的嚴重問題，因此當抗菌藥被用于治療時，有必要進行抗菌藥敏感試驗(Antimicrobial Susceptibility Testing，AST)。AST有助于新藥的研究，是有效治療程序的一個重要部分，也是慎用抗菌藥的一部分。為了使各成員國的流行病學監(jiān)測和抗菌藥耐藥性監(jiān)測的資料具有可比性，有必要進行抗菌敏感性實驗的協(xié)調和標準化。

4.2 抗菌藥敏感性試驗

4.2.1 敏感性試驗要求 ①在所有的實驗室都要采用標準的AST方法;②所有的AST方法都應該得出可重復的數據;③所有的資料都應該定量報告;④建立國家或地區(qū)的指定實驗室來協(xié)調AST方法，進行質量控制;⑤微生物實驗室應該在內部質量控制系統(tǒng)內開展他們的工作;⑥實驗室應該質量合格，能夠參與到外部熟練測驗系統(tǒng);⑦有專門的實驗室質量控制菌株或參考菌株。

4.2.2 抗菌藥敏感性試驗方法要求 送檢樣品細菌必須在純的培養(yǎng)基中分離，應采用標準化的細菌鑒定程序;為了做進一步分析，一些重要的細菌菌株和樣本應該冷凍干燥或 －70℃ ～－80℃低溫保存。

4.2.3 抗菌敏感性試驗方法的選擇應基于下面的因素 易操作性、靈活性、自動化和半自動化的適應性、花費、重現(xiàn)性、可靠性、精確度等。

4.2.4 試驗方法 一般包括圓盤擴散法、肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法。圓盤擴散法是將抗菌藥物吸收到特定的紙片中，然后置于已接種待測定菌的固體培養(yǎng)基上，抗菌藥物通過向培養(yǎng)基內的擴散，抑制敏感細菌的生長，從而出現(xiàn)抑菌環(huán)(帶)?？梢愿鶕志h(huán)的大小，判斷細菌對藥物的敏感度。稀釋法可用于定量測試抗菌藥對某一細菌的體外活性，分為肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法。

4.2.5 抗菌藥敏感性試驗指南 包括美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)、英國抗菌化學治療學會(BSAC)、瑞典抗生素參照組(SIR)、日本化學治療學會(JSC)等。

4.2.6 結果的可比性 不同的監(jiān)測系統(tǒng)獲得的結果要進行定量的報告，包括使用方法、質量控制、抗菌藥濃度范圍、使用的說明標準等。

4.2.7 質量控制和質量保證 要進行監(jiān)督和檢測AST操作程序的精密度，AST操作程序的準確度，實驗室工作人員和試劑的質量性能;要遵守標準化的技術，對培養(yǎng)基和試劑進行質量控制;要保持紀錄，包括試劑的批號、材料和試劑的有效期;質量控制參照菌應經常被檢測;參照菌應該被分類和進行抗菌藥敏感性表現(xiàn)型鑒定，也應該包括耐藥范圍和敏感范圍;抗菌藥敏感性實驗室都要使用質量控制參照株;參照株應該在指定的中央或地區(qū)實驗室貯藏;每天都要檢測質量控制菌株。

4.2.8 外部熟練測試 國家應指定一些實驗室負責參與抗菌藥敏感性檢測/監(jiān)測試驗室的質量控制系統(tǒng)的監(jiān)督，負責給參與抗菌藥敏感性檢測/監(jiān)測試驗室提供參照株，還應該建立一個中心數據庫。

5 動物源抗菌藥耐藥性對公共健康潛在影響的風險分析方法指南［5］

5.1 目的意義 動物源細菌耐藥性風險分析指南旨在為成員國提供一個透明的、客觀的、科學的、可防御的方法，對動物使用抗菌藥產生耐藥性對人類和動物健康產生的風險進行評估和管理。

5.2 風險分析(Terrestrial Animal Health Code，Section 1.3.1) 風險分析包括對人類健康的風險分析和對動物健康的風險分析。風險分析包括危害鑒定、風險評估、風險管理和風險交流四個部分。其中危害是指動物用抗菌藥產生的耐藥因子，可以感染人類和動物，引起治療失敗，還可以在不同種屬進行轉移。風險評估主要考察動物用抗菌藥產生耐藥菌或耐藥基因的可能性(釋放評估);人類暴露于耐藥菌或耐藥基因的程度(暴露評估);暴露對人類或動物健康造成的后果(后果評估)，最后進行綜合的風險估計，整個風險評估過程中各利益相關者都要進行必要的風險交流(圖1)。

圖1 抗菌藥耐藥性風險分析的組成部分

2000年6月15日到9月15日經過國際咨詢會討論，這五個指南最終在2000年11月被采納。在2003年5月，第71屆OIE全體大會期間，指南1、2、3分別被納入《陸生動物衛(wèi)生法典》(Terrestrial Animal Health Code，Appendix 3.9.1，3.9.2，3.9.3)，指南4被納入《陸生動物診斷試驗與疫苗手冊》(Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals，Chapter 1.1.10)［6］，第5 個指南在2004年第72屆OIE全體會議中被采納，納入到《陸生動物衛(wèi)生法典》第3.9.4 條款［7］。在2005 年5月的第73屆OIE國際會議中按照專家組的建議，對OIE抗菌藥耐藥性標準《陸生動物衛(wèi)生法典》第3.9.3條款和第3.9.4條款進行了進一步的修訂和完善，這些指南現(xiàn)均已成為國際標準，在WTO/SPS(動植物衛(wèi)生檢疫措施協(xié)議)里使用。

6 小結

控制抗菌藥耐藥性是一項復雜的系統(tǒng)工程，需要獸藥工業(yè)、飼料生產商、獸醫(yī)人員、畜禽飼養(yǎng)者、立法者和消費者等全方位密切合作。OIE這五個指南對抗菌藥耐藥性的發(fā)展和控制起到舉足輕重的作用?！皡f(xié)調抗菌藥耐藥性監(jiān)督和檢測程序指南”主要是為了考察抗菌藥耐藥性的發(fā)展趨勢，為政策的制定提供基礎，為合理使用抗菌藥提供參考?？咕幍南牧亢湍退幮缘漠a生一定程度上呈正相關，“畜牧業(yè)抗菌藥消耗量監(jiān)測指南”為抗菌藥消耗量的監(jiān)測提供了很好的依據和參考。“獸用抗菌藥慎用指南”用于指導獸用抗菌藥的正確合理使用，最大程度地減少耐藥性的產生。“抗菌藥敏感性檢測的實驗室方法指南”對檢測方法進行標準化，有利于臨床上選用敏感有效的抗菌藥。“動物源抗菌藥耐藥性對公共健康潛在影響的風險分析方法指南”，是為了對動物使用抗菌藥產生耐藥性對人類和動物健康產生的風險進行評估和管理。

近年來，獸醫(yī)領域抗菌藥耐藥性問題已經引起了我國的重視，但還沒有制定合理的政策和采取切實有效的措施，也沒有相關的標準方法和指南，我國對獸藥的管理還不完善，基層濫用抗菌藥現(xiàn)象很普遍。因此，各相關行業(yè)管理部門應該參照國際上的標準，根據我國的具體情況，盡快制定并實施良好的調控和管理措施，從而降低獸用抗菌藥耐藥性的產生和蔓延，保護動物和人類健康。

［1］ World Organization for Animal Health(OIE)(2006).－Terrestrial Animal Health Code.15th Edition，2006 appendix 3.9.1.

［2］ World Organization for Animal Health(OIE)(2006).－Terrestrial Animal Health Code.15th Edition，2006 appendix 3.9.2.

［3］ World Organization for Animal Health(OIE)(2006).－Terrestrial Animal Health Code.15th Edition，2006 appendix 3.9.3.

［4］ World Organization for Animal Health(OIE)(2006).－Terrestrial Animal Health Code.15th Edition，2006 appendix 3.9.4.

［5］ World Organization for Animal Health(OIE)(2004).－Manual of Diagnostic tests and Vaccines for Terrestrial Animals，5th Edition，2004 Chapter 1.1.10.

［6］ World Organization for Animal Health(OIE)(2003).－ International Standards on Antimicrobial Resistance.OIE，12 rue de Prony，75017 Paris，F(xiàn)rance.

［7］ World Organization for Animal Health(OIE)(2004).－ Final Report.72nd General Session Paris，23 －28 May 2004，56.