燕憲濤 路新國(guó) 章海風(fēng) 丁連翠 吳志嵩

枸杞、菊花是中醫(yī)眼科的常用藥，同時(shí)又屬于衛(wèi)生部公布的“藥食兼用”物品。本研究通過(guò)觀察枸杞菊花散不同劑量對(duì)老年SD大鼠視網(wǎng)膜各層細(xì)胞的影響，探討其保護(hù)視功能的可能機(jī)制，為藥膳的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

清潔級(jí)健康無(wú)眼疾SD雄性大鼠50只，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，合格證號(hào)：SCXK（蘇）2007-0001。 其中 2～3月齡大鼠 10只，體重 180～300g，為青年空白對(duì)照組。18～20月齡大鼠40只，體重320～600 g，隨機(jī)分為老年空白對(duì)照組，枸杞菊花散低、中、高劑量組，每組10只。

1.2 藥物制備

寧夏枸杞子、杭白菊購(gòu)于揚(yáng)州市大德生藥房，藥材來(lái)源、質(zhì)量經(jīng)專家鑒定合格。寧夏枸杞子、杭白菊除雜后干燥，按1∶1的質(zhì)量比用中藥粉碎機(jī)粉碎混勻，制成枸杞菊花散。最后用煮開(kāi)的蒸餾水調(diào)整至所需濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 主要試劑與儀器

LEⅠCA RM2245 切片機(jī)（徠卡公司）；電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；OLYMPUS JAPAN 207153顯微鏡；甲醛（AR）（上海蘇燃化學(xué)試劑有限公司，批號(hào) 201103）。

1.4 方法

1.4.1 分組給藥：枸杞菊花散低、中、高劑量組予枸杞菊花散水煎液灌胃，給藥劑量分別為1 g/kg、2 g/kg、4 g/kg（生藥/大鼠體質(zhì)量），于每天上午 8∶30～9∶30灌胃1次?？瞻讓?duì)照組灌胃等量的生理鹽水，其余時(shí)間自由飲水進(jìn)食。所有動(dòng)物連續(xù)灌胃35 d后全部處死取材。

1.4.2 標(biāo)本采集與處理：末次給藥后禁食不禁水12 h，頸椎脫臼法處死后，迅速摘取左眼球，分組標(biāo)記放入福爾馬林液中固定24 h，常規(guī)脫水、透明，60℃石蠟液浸蠟，垂直包埋，石蠟切片機(jī)連續(xù)切片，厚度4 μm，行常規(guī)HE染色。

1.4.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)：HE染色病理切片置于光學(xué)顯微下觀察視網(wǎng)膜組織各層細(xì)胞，400倍放大照相，每張切片選5個(gè)不同視野計(jì)數(shù)，取平均值。

1.5 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 病理切片

青年空白對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜10層結(jié)構(gòu)清晰可辨，各層排布致密整齊，同層細(xì)胞大小一致、密度均勻。與青年空白對(duì)照組相比，老年空白對(duì)照組和老年低劑量組大鼠視網(wǎng)膜外核層及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的細(xì)胞數(shù)目有不同程度的減少，排列也較松散；而老年中、高劑量組與青年空白對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)排布及細(xì)胞密度等方面均無(wú)明顯差異（圖1）。

2.2 視網(wǎng)膜細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

各組間內(nèi)核層細(xì)胞數(shù)目接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表1）。

與青年空白對(duì)照組比較：（1）神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層：枸杞菊花散低劑量組細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯降低（P＜0.01），中、高劑量組略降低（P＞0.05）。 （2）外核層：低、高劑量組細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯降低（P＜0.01），中劑量組略降低（P＞0.05）（表1）。

與老年空白對(duì)照組比較：（1）神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層：枸杞菊花散低劑量組細(xì)胞計(jì)數(shù)略升高（P＞0.05），中、高劑量組明顯升高（P＜0.01）。 （2）外核層：低劑量組細(xì)胞計(jì)數(shù)略升高（P＞0.05），中、高劑量組明顯升高（P＜0.01）（表1）。

表1 各組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層和外核層細(xì)胞計(jì)數(shù)（±s，樣本數(shù)=8）

表1 各組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層和外核層細(xì)胞計(jì)數(shù)（±s，樣本數(shù)=8）

注：1.對(duì)比組間凡標(biāo)有相同字母者，P＞0.05；2.無(wú)相同字母而有相鄰字母者，P＜0.05；3.字母既不相同也不相鄰者，P＜0.01。

組別細(xì)胞計(jì)數(shù)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層 內(nèi)核層 外核層青年空白對(duì)照組 8.375±1.486 8c 35.975±1.761 3a 84.813±3.998 7f老年空白對(duì)照組 4.250±0.639 2a 35.775±1.082 0a 69.275±4.578 1a枸杞菊花散低劑量組 5.025±0.391 9a 34.625±2.374 7a 73.250±5.263 1ab枸杞菊花散中劑量組 8.175±0.788 8c 36.200±2.800 0a 80.550±4.084 5df枸杞菊花散高劑量組 8.000±1.136 4c 34.550±3.598 0a 78.575±4.375 8cd

3 討論

老年性視功能衰退是一種衰老現(xiàn)象，中醫(yī)認(rèn)為與年老肝陰衰減有關(guān)。如《素問(wèn)·陰陽(yáng)應(yīng)象大論》謂：“年四十而陰氣自半也，起居衰矣。年五十，體重，耳目不聰明矣”；《靈樞·天年》云：“五十歲，肝氣始衰，肝葉始薄，膽汁始減，目始不明”。國(guó)外有研究表明，隨年齡增長(zhǎng)，視野光敏感度逐漸下降，視網(wǎng)膜電圖振幅下降，暗適應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)〔1-2〕。國(guó)內(nèi)盧艷等觀察增齡大鼠視網(wǎng)膜變化時(shí)發(fā)現(xiàn)，大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞數(shù)目及外核層細(xì)胞數(shù)目均隨年齡增長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)〔3〕。提示老年性視功能衰退伴隨有視網(wǎng)膜各層細(xì)胞的變化。

枸杞子和菊花均為具有明目作用的中藥，二者合用具有清熱解毒，益精明目的功效。其中枸杞子甘、平，歸肝、腎經(jīng)，其主要成分枸杞多糖，具有免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、降血脂、降血糖、護(hù)肝、抗疲勞、抗腫瘤、降血壓等作用〔4〕。 菊花辛、甘、苦，微寒，歸肺、肝經(jīng)。菊花含多種揮發(fā)油，多糖菊苷、腺嘌呤、膽堿、黃酮、水蘇堿、維生素A、維生素B1、維生素E、氨基酸及刺槐素等〔5〕，具有保護(hù)心血管、抗病毒、抗衰老、抗炎、抗腫瘤作用等〔6〕。我們將其組方為枸杞菊花散，觀察其對(duì)大鼠視網(wǎng)膜各層細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示，枸杞菊花散高、中劑量大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、外核層細(xì)胞數(shù)目明顯高于老年空白對(duì)照組（P＜0.01）。其中老年中劑量組與青年空白對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜各層細(xì)胞數(shù)目相差無(wú)幾（P＞0.05）。可見(jiàn)中藥枸杞菊花散可以延緩大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及外核層細(xì)胞衰減，從而具有延緩老年性視力衰退的作用。選擇最佳的計(jì)量與配比是我們下一步研究的一個(gè)方向。

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