左艷麗 趙 靜 白 娟

（1.銅陵市西聯(lián)鄉(xiāng)衛(wèi)生院，安徽 銅陵244100；2.肥西精神病醫(yī)院，安徽 合肥 231202；3.安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，安徽 合肥 230061）

蒼辛滴鼻液是中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范中收載的制劑，是由蒼耳子、辛夷花、白芷等中藥和鹽酸麻黃堿及苯甲酸鈉組成的中西藥復(fù)方制劑。臨床用于治療副鼻竇炎等癥。原標(biāo)準(zhǔn)僅有制法，沒(méi)有質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，為有效地控制該制劑的質(zhì)量，依據(jù)其化學(xué)成分及其性質(zhì)和相關(guān)文獻(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)制定了其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)方中蒼耳子、鹽酸麻黃堿進(jìn)行了薄層色譜鑒別，采用HPLC法測(cè)定其鹽酸麻黃堿的含量，并對(duì)其含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究。

1．儀器、試藥與樣品

Waters600型高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；UV 996型紫外檢測(cè)器（美國(guó)）；AD-2型百萬(wàn)分之一電子天平（美國(guó)PE公司）；BP210S型萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)賽多利斯）；高效硅膠G高效薄層板（煙臺(tái)化工研究所）；鹽酸麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)1214—200001，供含量測(cè)定用）；蒼耳子對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)121168—200503）；蒼辛滴鼻液（批號(hào)：101205，101211，101218）和陰性制劑均由安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑中心提供；乙腈（色譜純）；水（重蒸水）；其它試劑均為分析純。

2．方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

（1）蒼耳子[1]的鑒別 分別取本品、陰性制劑各50ml，用水飽和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次30ml，棄去洗液，正丁醇液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品和陰性對(duì)照溶液。另取蒼耳子對(duì)照藥材2g，加甲醇25ml，加熱回流20分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml,作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇—醋酸乙酯—水（4:1:5）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置氨蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的褐色斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 蒼耳子鑒別薄層色譜圖

（2）鹽酸麻黃堿的鑒別 分別取本品、陰性制劑各10ml，加濃氨0.5ml，用三氯甲烷提取2次，每次10ml，合并提取液揮干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，作為供試品和陰性對(duì)照溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇-濃氨（20：5：0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的紅色斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾（見(jiàn)圖2）。

圖2 鹽酸麻黃堿鑒別薄層色譜圖

2.2 鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Shim-PackCLC ODS柱（150×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙睛-0.1%磷酸溶液（10：90）；柱溫：25℃；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：207nm；進(jìn)樣量20μL；理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于于3000；分離度應(yīng)大于1.5。

（2）對(duì)照品溶液的制備 取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。

（3）供試品溶液的制備 取本品，搖勻，精密吸取2.0ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

（4）陰性對(duì)照溶液的制備 取缺鹽酸麻黃堿的缺味陰性制劑，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法處理，即得。

（5）專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各20μL，注入液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果鹽酸麻黃堿與其它成分均能很好地分離，供試品中鹽酸麻黃堿保留時(shí)間與對(duì)照品一致，陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 蒼辛滴鼻液HPLC 色譜圖

（6）線(xiàn)性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液（0.1813mg/ml）2.0、4.0、6.0、8.0ml分別置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20μl，依次注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定，以鹽酸麻黃堿的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算，得線(xiàn)性回歸方程為：Y=45076X+145856（r=0.9996，n=5）。結(jié)果表明：鹽酸麻黃堿濃度在36.26μg/ml～181.30μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

（7）精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，結(jié)果RSD為1.23%，表明本法精密度良好。

（8）重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品6份，分別按上述方法制備、測(cè)定鹽酸麻黃堿含量，結(jié)果RSD為1.06%，表明本法重現(xiàn)性良好。

（9）穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別間隔0，2，4，6，8h后依法測(cè)定，結(jié)果鹽酸麻黃堿峰面積RSD為1.54%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

（10）回收率試驗(yàn) 精密量取鹽酸麻黃堿含量為4.995mg/mL的供試品1.0mL，共6份，置100ml量瓶中，分別精密加入2.0550mg/mL的鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液2.0mL、2.0mL、3.0mL、3.0mL、4.0mL、4.0mL，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明加樣回收率較好，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

（11）樣品測(cè)定 取三批樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下制備樣品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2

表2 樣品測(cè)定結(jié)果（n=3）

3．討論

3.1通過(guò)薄層鑒別研究，蒼耳子、鹽酸麻黃堿的鑒別不僅專(zhuān)屬性強(qiáng)且重現(xiàn)性好，可作為蒼辛滴鼻液制劑的定性指標(biāo)，同時(shí)對(duì)方中的辛夷和白芷進(jìn)行了定性研究,由于干擾大且專(zhuān)屬性差而未予采用。

3.2采用HPLC法測(cè)定鹽酸麻黃堿的含量,關(guān)于鹽酸麻黃堿的HPLC含量測(cè)定方法，文獻(xiàn)報(bào)道很多[1,2]，大多采用210nm作為測(cè)定波長(zhǎng)，本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)鹽酸麻黃堿的紫外掃描發(fā)現(xiàn)鹽酸麻黃堿的最大吸收波長(zhǎng)在207nm處，且此處干擾小，因此選定為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.3蒼辛滴鼻液為臨床常用制劑，用于治療副鼻竇炎等癥，療效顯著，但一直以來(lái)未建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，從而難以保證其臨床療效，本研究建立的TLC和HPLC法專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可用于蒼辛滴鼻液的質(zhì)量控制，使之安全、有效。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[Z].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.111.

[2]宋志釗，陳昭. 高效液相法測(cè)定滴通鼻炎水中鹽酸麻黃堿的含量[J].廣西醫(yī)學(xué)，2008，30（4）：548-549.

[3]周征，魏京京.HPLC 法測(cè)定小兒化痰止咳沖劑中鹽酸麻黃堿的含量[J].藥物分析雜志，2006，26（1）：132-133.