尹震花，王 微，顧海鵬，康文藝

河南大學(xué)中藥研究所，開封475004

HS-SPME-GC-MS分析蒟醬葉揮發(fā)性成分

尹震花，王 微，顧海鵬，康文藝*

河南大學(xué)中藥研究所，開封475004

首次采用頂空固相微萃取和氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(HS-SPME-GCMS)，結(jié)合保留指數(shù)法，用峰面積歸一化法測(cè)定蒟醬葉中揮發(fā)性成分及相對(duì)百分含量。結(jié)果表明，從蒟醬葉中鑒別出27個(gè)化學(xué)成分，占峰面積的97.53%，化合物結(jié)構(gòu)類型包括醛、酸、酯、酚、烯烴、芳香烴和(環(huán))烷烴。2-甲氧基-5-甲基苯甲醛(42.89%)、胡椒酚醋酸酯(12.49%)、異丁香酚(13.42%)、4-烯丙基-1，2-二乙酰氧基苯(9.47%)、胡椒酚(2.89%)、γ-畢橙茄烯(2.74%)、丁香酚(2.66%)和乙酸異丁香酚酯(2.06%)是蒟醬葉的主要揮發(fā)性成分。

蒟醬;揮發(fā)性成分;固相微萃取;氣相色譜-質(zhì)譜

蒟醬葉為胡椒科植物蒟醬(Piper betle L.)的葉，異名婆葉、蒟葉、櫓葉、青荖葉、青蒟葉，主產(chǎn)于廣東、廣西等地。具有疏風(fēng)散寒、行氣化痰、解毒消腫、燥濕止癢之功效［1］。蒟醬葉含酚性物80.8%及非酚性物17.2%，其酚性物主要為胡椒酚、蔞葉酚以及烯丙基兒茶酚。藥理研究發(fā)現(xiàn)蒟醬葉具有抗菌［2，3］、抗氧化［4］、抗真菌［5］、抗誘變、毒性［6］、免疫驅(qū)蟲［7］和血管舒張［8］等作用。此外，具有擬膽堿和鈣通道拮抗成分［9］。有文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)不同產(chǎn)地的蒟醬葉用水蒸氣蒸餾的方法提取揮發(fā)油，進(jìn)行GC-MS分析，其主要揮發(fā)性成分不同［6］，而未見采用頂空固相微萃取提取蒟醬葉揮發(fā)性的報(bào)道，本文首次采用頂空固相微萃取提取蒟醬葉揮發(fā)性成分，氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)分析，結(jié)合保留指數(shù)法，測(cè)定產(chǎn)于海南蒟醬葉的揮發(fā)性成分，為蒟醬葉的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與儀器

蒟醬葉于2010年10月采集于海南省，由河南大學(xué)中藥研究所李昌勤副教授鑒定為胡椒科植物蒟醬(Piper betle L.)的葉，標(biāo)本存于河南大學(xué)中藥研究所。

美國安捷倫公司GC 6890NGC/5975 MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀;美國Supelco公司手動(dòng)固相微萃取(SPME)裝置;萃取頭為65 μm聚二甲基硅氧烷(PDMS-DVB);C6-C26正構(gòu)烷烴(Alfa Aesar)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 SPME取樣

使用前先將SPME的萃取纖維頭在氣相色譜的進(jìn)樣口老化10 min，老化溫度為250℃，載氣體積流量為1.0 mL/min。取蒟醬葉0.7 g，置于5 mL的樣品瓶中，蓋上蓋子，插入65 μm PDMS-DVB萃取纖維頭，于50℃下頂空取樣30 min后，取出后立即插入色譜儀進(jìn)樣口(溫度250℃)脫附1 min。

2.2 GC-MS分析條件

2.2.1 氣相色譜條件

HP-5 MS石英彈性毛細(xì)管柱(0.25 μm×30.0 m×250 μm)，載氣為高純氦氣(99.999%)，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣口溫度250℃;色譜柱初始溫度50℃(保持2.0 min)，以4℃/min升溫至120℃(保持2 min)，最后以6℃/min升溫至230℃(保持5 min)。分流進(jìn)樣，分流比為10∶1。

2.2.2 質(zhì)譜條件

電離方式:EI源，電離能量70 eV;離子源溫度為230℃;四極桿溫度150℃;傳輸線溫度為280℃;電子倍增器電壓1588 V。質(zhì)量掃描范圍m/z 30～400，譜圖檢索:采用RTLPEST3.L和NIST05.L進(jìn)行檢索。

2.3 保留指數(shù)測(cè)定

按照文獻(xiàn)［10］進(jìn)行KI(Kovats保留指數(shù))計(jì)算。

3 結(jié)果與討論

通過GC-MS分析，從蒟醬葉中分離鑒定出27個(gè)化學(xué)成分，占總揮發(fā)性成分的97.53%。結(jié)果列于表1。

24 Docosane二十二烷 C22H46 0.16 99 2195 25 Tricosane二十三烷 C23H48 0.21 97 2294.2 26 Tetracosane二十四烷 C24H50 0.13 99 2394.4 27 Pentacosane二十五烷 C25H52 0.13 97 2492.1總含量Total(%) 97.53

由表1可知，化合物結(jié)構(gòu)類型包括醛、酸、酯、酚、烯烴、芳香烴和(環(huán))烷烴等。蒟醬葉中主要揮發(fā)性成分:2-甲氧基-5-甲基苯甲醛(42.89%)、胡椒酚醋酸酯(12.49%)、異丁香酚(13.42%)、4-烯丙基-1，2-二乙酰氧基苯(9.47%)、胡椒酚(2.89%)、γ-畢橙茄烯(2.74%)、丁香酚(2.66%)和乙酸異丁香酚酯(2.06%)。而對(duì)產(chǎn)于斯里蘭卡的蒟醬葉用水蒸氣蒸餾的方法提取揮發(fā)油，進(jìn)行GC-MS分析，從中鑒定出47個(gè)化學(xué)成分，黃樟腦(52.7%)、烯丙基焦性兒茶酚二乙酸酯(15.4%)、丁香酚(6.4%)和乙酸丁香酚酯(5.8%)是其主要成分，不同產(chǎn)地的蒟醬葉揮發(fā)成分在種類和含量均有差別，文獻(xiàn)［6］報(bào)道，提取方法相同，蒟醬葉的揮發(fā)性成分與產(chǎn)地有關(guān)。由于提取方法不同，與產(chǎn)于斯里蘭卡的蒟醬葉揮發(fā)性成分有區(qū)別，因此，對(duì)同一產(chǎn)地的蒟醬葉提取方法對(duì)揮發(fā)性成分的影響有待進(jìn)一步研究。

《中國植物志》記載，蒟醬葉經(jīng)蒸餾而得的芳香油，主要成分為香荊芥酚、丁香油酚、胡椒酚、烯丙基兒茶酚、對(duì)聚傘花素、丁香烯、1，8-桉油素、丁香油酚甲醚、蔞葉酚乙酸酯、烯丙基兒茶酚二乙酸酯烯和蓽澄茄烯。而本文經(jīng)頂空固相微萃取的揮發(fā)油中，沒有出現(xiàn)烯丙基兒茶酚、對(duì)聚傘花素、蔞葉酚乙酸酯和烯丙基兒茶酚二乙酸酯烯，但是含有兒茶酚類成分，如:4-烯丙基-1，2-二乙酰氧基苯。兩種提取方法得到的揮發(fā)油化學(xué)成分有很大的區(qū)別，這可能與蒟醬葉采集的時(shí)間，提取方法等有關(guān)系，但是其主要成分較相似。

蒟醬葉中含有丁香酚(1.15%)，邱電等［11］報(bào)道丁香酚具有麻醉、驅(qū)蚊和促進(jìn)透皮吸收等作用。此外，丁香酚還有抗氧化、抗菌和真菌等作用。丁香酚可能是蒟醬葉的的抗氧化、抗菌和真菌的有效成分之一。

1 Chinese herbal(中華本草).The state administration of traditional Chinese medicine‘Chinese herbal’editorial committee(國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì)).Shanghai Scientific and Technical Publishers，1999，8:426.

2 Liang H(梁輝)，Yin Y(尹燕)，Yang QL(楊青睞)，et al.Antioxidant activity and antibacterial effect of Piper betle L.leaf extract in vitro.Yunnan J Tradit Chin Med Mater Med (云南中醫(yī)中藥雜志)，2011，32(5):57-59.

3 Nalina T，Rahim ZHA.The crude aqueous extract of Piper betle L.and its antibacterial effect towards streptococcus mutans.Am J Biochem Biotechnol，2007，3:10-15.

4 Dasgupta N，De B.Antioxidant activity of Piper betle L.leaf extract in vitro.Food Chem，2004，88:219-224.

5 Ali I，Khan FG，Suri KA，et al.In vitro antifungal activity of hydroxychavicol isolated from Piper betle L..Ann Clin Microbiol Antimicrob，2010，9:1-9.

6 Mohottalage S，Tabacchi R，Guerin PM.Components from Sri Lankan Piper betle L.leaf oil and their analogues showing toxicity against the housefly Musca domestica.Flavour Frangr J，2007，222:130-138.

7 Singh M，Shakya S，Soni VK，et al.The n-hexane and chloroform fractions of Piper betle L.trigger different arms of immune responses in BALB/c mice and exhibit antifilarial activity against human lymphatic filarid Brugia malayi.Int Immunopharmacol，2009，9(6):79-84.

8 Runnie I，Salleh MN，Mohamed S，et al.Vasorelaxation induced by common edible tropical plant extracts in isolated rat aorta and mesenteric vascular bed.J Ethnopharmacol，2004，92:311-316.

9 Dai WJ(戴偉娟).The cholinergic components and calcium channel antagonist from Piper betle L..Foreign Med，J Plant Med(國外醫(yī)藥.植物藥分冊(cè))，2001，16:165-166.

10 Kang WY，Ji ZQ，Wang JM.Composition of the essential oil of Adiantum flabellulatum.Chem Nat Compd，2009，45:575.

11 Qiu D(邱電)，Zhang KH(張魁華)，F(xiàn)ang BH(方炳虎).The pharmacological action of eugenol.Prog Vet Med(動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展)，2007，28:101-103.

Volatile Constituents from leaves of Piper betle L by Head-space Solid Micro-extraction Coupled with GC-MS

YIN Zhen-hua，WANG Wei，GU Hai-peng，KANG Wen-yi*
Institute of Chinese Materia Medica，Henan University，Kaifeng 475004，China

To study the volatile constituents from leaves of Piper betle L.，the volatiles were analyzed by head-space solid micro-extraction，coupled with GC-MS and Kovats indices for the first time.A quantitative analysis in percent was performed by peak area normalization measurements.The results showed that 27 compounds were identified from the leaves，accounting for 97.53%of the total essential constituents.The structure types of volatiles compounds included aldehyde，acids，esters，phenols，alkenes，aromatic hydrocarbons，and alkanes.2-Methoxy-5-methylbenzaldehyde(42.89%)，4-(2-propenyl)-phenol acetate(12.49%)，2-methoxy-4-(1-propenyl)-phenol(13.42%)，4-allyl-1，2-diace-toxybenzene (9.47%)，4-(2-propenyl)-phenol(2.89%)，γ-cadinene(2.74%)，eugenol(2.66%)and 2-methoxy-4-(1-propenyl)-phenol acetate(2.06%)were the main volatile constituents.

Piper betle L.;volatile constituents;SPME;GC-MS

1001-6880(2012)10-1402-03

2011-11-21 接受日期:2011-12-30

河南省科技廳重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(112102310310)

*通訊作者 Tel:86-378-3880680;E-mail:kangweny@hotmail.com

Q946.91;R248

A