孫曉盈，謝 風，金 玲，王 海

（吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長春130033）

目前已有研究表明5脂氧合酶激活蛋白（ALOX5AP）基因SG13Sll4A／T的遺傳變異性與中國人群缺血性卒中有顯著相關(guān)性，但與心肌梗死（AMI）和急性冠脈綜合征（ACS）的易感性尚不明確。

1 對象與方法

1.1 實驗對象

2006年10月－2007年8月吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院住院的AMI患者72例，男39例，平均年齡58歲；女33例，平均年齡62歲。診斷符合WHO心肌梗死的診斷標準。同時對照組冠心病78例，男43例，平均年齡61歲，女35例，平均年齡63歲。診斷符合WHO冠心病的診斷標準，部分經(jīng)冠狀動脈造影證實。

1.2 方法

1.2.1 EDTA抗凝血提取白細胞進行基因檢測；另取枸櫞酸鈉抗凝血檢測血漿Fbg，并對血清進行其它相關(guān)指標檢測。

1.2.2 外周血基因組DNA提取，PCR擴增DNA引物設(shè)計：

上游：F：5′－GTGTTCAGGAAGGGAGTTTC TGT－3′；

下游：R：5′－GTCTATGGTTGCAACATTGAGATTA－3′。

1.2.3 Ase I限制性內(nèi)切酶酶切PCR一RFLP內(nèi)切酶在線軟件分析，并行1%瓊脂糖凝膠電泳。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用統(tǒng)計軟件SPSS11.5分析，其中兩組（心肌梗死組與對照組）Fbgβ455G／A基因頻率及等位基因頻率分布進行χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布圖

圖1中顯示從左向右第一條帶是maker帶；第二和第四條帶為正?；騎／T型；第三條帶為異常突變雜合子T／A型；第四條帶為未經(jīng)酶切的ALOX5AP基因SG13S114位點，SNP為限制性內(nèi)切酶Hse I公司為驗證是否酶切有效而固定設(shè)置的酶切位點位于分子量989處。

2.2 心肌梗死組與冠心病組患者外周血基因組ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布 見表1。

2.3 心肌梗死組與冠心病組ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布與血漿纖維蛋白原濃度的關(guān)系 心肌梗死組與冠心病組A／A、T／A基因型血漿纖維蛋白原濃度均明顯高于T／T基因型，而且存在明顯正相關(guān)（P＜0.005），且心肌梗死組血漿纖維蛋白原濃度明顯高于冠心病組。見表2。

圖1 ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布

表1 心肌梗死組與冠心病組患者外周血基因組ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布［n，%］

表2 心肌梗死組與冠心病組Fbgβ455多態(tài)性分布與血漿纖維蛋白原濃度的關(guān)系

2.4 心肌梗死組與冠心病組ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布與血漿高敏CRP濃度的關(guān)系

心肌梗死組與冠心病組中血漿高敏CRP與ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布有顯著相關(guān)性（P＜0.05），且心肌梗死患者血漿高敏CRP濃度明顯高于對照組（P＜0.005）。見表3。

3 討論

ALOXSAP是LTs合成及5LO催化作用所必須的蛋白質(zhì)，也是通過5LO通路促進AS的發(fā)生、發(fā)展的重要激活蛋白［1］。有種假說認為：各種刺激誘導(dǎo)動脈血管壁中泡沫細胞，巨噬細胞、樹突狀細胞，并使細胞內(nèi)cPLA2活性激活，經(jīng)5LO途徑生成LTs。現(xiàn)知LTs受體可由平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞，巨噬細胞、T細胞及肥大細胞表達［2－3］。所以始動于動脈血管壁炎癥的5LO蛋白形成通路是動脈硬化形成的主要發(fā)病機制之一。LTs分別以分旁泌或自分泌方式與這些促進炎癥發(fā)展的細胞中LTs受體結(jié)合并發(fā)揮作用，例如促進白血胞參與內(nèi)皮細胞的黏附、白細胞的趨化作用、促進平滑肌增生及血栓形成等，進而促進冠脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。本研究結(jié)果顯示心肌梗死組與冠心病組患者外周血基因組ALOX5AP基因SG13S114位點多態(tài)性分布T／T，T／A，A／A 具有顯著性差異（P＜0.05），而且SG13S114A／A頻率與心肌梗死的發(fā)生有顯著正相關(guān)。本研究中在ALOX5AP基因SG13S114A／A的AMI患者中，血漿FBg及hs－CRP水平顯著高于對照組，而ALOX5AP基因SG13S114A／A多態(tài)位點與中國人群MI有顯著相關(guān)性。這可能表明ALOX5AP基因的異常遺傳表型參與了心肌梗死的發(fā)生和發(fā)展以及梗死后心室重構(gòu)的整個過程。

表3 心肌梗死組與冠心病組Fbgβ455多態(tài)性分布與血漿高敏CRP濃度的關(guān)系

［1］Lotzera K，F(xiàn)ullk CD，Habenicht AJR.The liP oxygenase Pathway inarterial wall Biology and atheroselerosis［J］.Biochimieaet Bio Psiea Aeta，2005，1736：30.

［2］HanssonGK.I unemee hanismsin atheroselerosis［J］.Arterioseler Thromb Vase Biol，2001，21：187.

［3］StoenRA，JaeobsonBS.Modulation of cell substrate adhesion by a raehidonie acid liPoxygenase regulates cells Preading and ERKI／inducible cyclo oxygenase regulate seemigrationin N3T3fibroblasts［J］.Mol Biol Cell，2001，12：1937.