俞向前，萬世平，顧武軍，楊曉峰，劉耀芳，朱建國，王衛(wèi)國，葉承榮

(1.上海市浦東新區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201202;2.上海市南匯長橋豬場，上海 201314;3.上海交通大學(xué)，上海 200240;4.上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，上海 201201)

在現(xiàn)行生豬養(yǎng)殖模式下，仔豬的斷奶向低齡化發(fā)展，斷奶應(yīng)激產(chǎn)生的各種問題越來越突出，斷奶仔豬的飼養(yǎng)管理、環(huán)境控制、疾病預(yù)防與控制成為整個(gè)生豬養(yǎng)殖過程中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。當(dāng)前，斷奶仔豬主要采用抗生素類藥物及化學(xué)藥物進(jìn)行疾病的預(yù)防與控制，然而其日益暴露的不同程度的藥物殘留危害促使人們轉(zhuǎn)而求助于毒副作用小、無殘留且不易誘生耐藥性的中藥制劑。復(fù)方中藥制劑富含多種活性成分，兼有藥物和營養(yǎng)雙重作用，具有提高仔豬采食量、促進(jìn)生長、增強(qiáng)免疫、降低腹瀉率、促進(jìn)消化器官發(fā)育、提高酶活性及改善動(dòng)物產(chǎn)品品質(zhì)的作用[1-2]。本試驗(yàn)根據(jù)斷奶仔豬的飼養(yǎng)管理、環(huán)境控制、疾病預(yù)防與控制的實(shí)際需要，以益氣健脾、滋補(bǔ)肝腎、消積殺蟲為組方原則，將黨參、茯苓、山藥、黃芪、蓮子、薏仁等21味中藥，經(jīng)提純加工后再按一定比例添加到斷奶仔豬的基礎(chǔ)日糧中，研究復(fù)方中藥制劑對斷奶仔豬免疫機(jī)能及抗寄生蟲感染的影響，為中藥制劑在斷奶仔豬生產(chǎn)中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 復(fù)方中藥添加劑 中藥添加劑其組分和重量份數(shù)為:黨參60份、茯芩60份、山藥60份、黃芪60份、蓮子20份、炒薏仁20份、蒼術(shù)20份、陳皮20份、何首烏60份、莬絲子20份、女貞子20份、旱蓮草20份、桔梗10份、焦神曲60份、白扁豆15份、貫眾20份、炒檳榔20份、南瓜子40份、蒲公英60份、馬齒莧60份、甘草12份等。各單味中藥均購自上海人和堂醫(yī)藥公司，粉碎研磨后按照基礎(chǔ)日糧的1.5%混勻添加，按療程服用，連續(xù)飼喂1周，停3 d，再服，30 d為1個(gè)療程。

1.1.2 主要試劑 血清免疫球蛋白試劑(批號:[2008]3402801)為德靈公司進(jìn)口原裝試劑;肝素鈉、RMPI-1640培養(yǎng)液、96孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板、Hank’s液、PHA、MTT、DMSO 溶液購自上海前塵生物技術(shù)有限公司。豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒(ELISA)(批號:20110622)、豬瘟病毒抗體檢測試劑盒(ELISA)(批號:20110623)均系龍巖蚨瑞生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)在浦東新場養(yǎng)豬場進(jìn)行，起止時(shí)間為2011年4-6月。試驗(yàn)動(dòng)物為同一保育舍的健康斷乳仔豬，出生日齡差不超過4 d，平均為30～35日齡，初始體重相近，組間差異不顯著。將試驗(yàn)豬隨機(jī)分成2組，對照組30頭，飼喂基礎(chǔ)日糧;試驗(yàn)組30頭，飼喂基礎(chǔ)日糧+1.5%中藥添加劑。疫苗注射時(shí)間:試驗(yàn)前一周注射藍(lán)耳病疫苗，試驗(yàn)前一周豬瘟一免，試驗(yàn)1周后豬瘟疫苗二免，5周后豬瘟疫苗三免，兩組注射疫苗條件完全一致。豬舍、飼養(yǎng)條件、衛(wèi)生環(huán)境、飼料品質(zhì)及其他飼養(yǎng)管理等均相同，自由采食和飲水。

1.2.2 血液樣品處理 分別在用藥1個(gè)療程和2個(gè)療程后，清晨空腹，從兩組活體前腔靜脈采血，每組隨機(jī)15頭。每頭豬無菌采集10 mL血液，分裝在3個(gè)離心管中，其中2管靜置1 h后，3000 r/min離心，取上清保存?zhèn)溆茫?管(加1%肝素鈉抗凝)立即送實(shí)驗(yàn)室測定。

1.2.3 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的測定 采用比色法(MTT法)檢測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能，具體操作方法參照文獻(xiàn)[3]進(jìn)行。按下列公式計(jì)算淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率:淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率(%)=(試驗(yàn)組OD值一對照組OD值)/對照組OD值×100%。

1.2.4 豬瘟及藍(lán)耳病抗體水平的測定 取用藥1個(gè)療程和2個(gè)療程后制備的血清，分別用豬瘟抗體ELISA檢測方法測定豬瘟抗體水平以及藍(lán)耳病抗體ELISA檢測方法測定藍(lán)耳病抗體水平。具體檢測方法按試劑盒說明書進(jìn)行。用酶標(biāo)儀在450 nm波長處讀取吸光值(OD)，根據(jù)檢測試劑盒說明書，樣品OD值≥0.5，且其OD值與陰性對照OD值比值超過2倍者，為合格。

1.2.5 中藥添加劑對豬腸道寄生蟲蟲卵的抑制試驗(yàn) 用藥1個(gè)療程和2個(gè)療程后，試驗(yàn)組與對照組各采集5份新鮮糞便，每份取10 g置于50 mL小燒杯中，加入10 mL PBS，待糞便泡松軟后用玻璃棒充分?jǐn)囁閿噭?，利用尼龍篩收集蟲卵并將蟲卵收集于干凈的小燒杯中，在顯微鏡下進(jìn)行寄生蟲蟲卵計(jì)數(shù)。按以下公式計(jì)算減卵率(EPG為平均每克糞便中所荷蟲卵數(shù)):

1.2.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPASS 17.0對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 中藥添加劑對斷奶仔豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，2個(gè)療程后，試驗(yàn)組比對照組的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著提高(P＜0.05)。結(jié)果表明，中藥添加劑可顯著改善斷奶仔豬的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，能顯著提高機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。

2.2 中藥添加劑對豬瘟抗體水平的影響 由表1可見，試驗(yàn)前對照組和試驗(yàn)組兩組豬的豬瘟抗體合格率差異不顯著(P＞0.05);1個(gè)療程后，試驗(yàn)組合格率與對照組差異不顯著(P＞0.05);2個(gè)療程后，試驗(yàn)組合格率比對照組提高了17%，差異顯著(P＜0.05)。

表1 中藥添加劑對豬瘟抗體水平的影響

2.3 中藥添加劑對豬藍(lán)耳病抗體水平的影響 由表2可見，試驗(yàn)前對照組和試驗(yàn)組兩組豬藍(lán)耳病抗體合格率無差異(P＞0.05)，抗體水平基本一致;1個(gè)療程后，試驗(yàn)組合格率比對照組提高了3%(P＞0.05);2個(gè)療程后，試驗(yàn)組合格率比對照組提高了19%，差異顯著(P＜0.05)。

表2 中藥添加劑對豬藍(lán)耳病抗體水平的影響

2.4 中藥添加劑對豬腸道寄生蟲蟲卵的抑制效果由表3可知，用藥1個(gè)療程后，試驗(yàn)組的減卵率為1%，與對照組結(jié)果進(jìn)行方差分析，差異不顯著(P＞0.05);用藥2個(gè)療程后，試驗(yàn)組的減卵率為47%，與對照組結(jié)果進(jìn)行方差分析，差異顯著(P＜0.05)。

表3 中藥添加劑對豬腸道寄生蟲蟲卵的影響

3 討論

淋巴細(xì)胞與機(jī)體的免疫有極密切的關(guān)系，可分為T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，B細(xì)胞可轉(zhuǎn)變?yōu)闈{細(xì)胞，抗體主要是由漿細(xì)胞合成并分泌到血漿中的。T細(xì)胞本身雖不直接產(chǎn)生抗體，但它可與B細(xì)胞合作產(chǎn)生抗體。T細(xì)胞是進(jìn)行細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要功能細(xì)胞，是衡量淋巴細(xì)胞在外來因子刺激下增殖程度的一個(gè)重要指標(biāo)。T細(xì)胞在接觸抗原前是靜止的，一旦受到抗原刺激，即會(huì)產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。T淋巴細(xì)胞是體內(nèi)主要的免疫活性細(xì)胞，在胸腺中發(fā)育成熟以后經(jīng)血液、淋巴循環(huán)運(yùn)行定居于外周免疫器官，發(fā)揮免疫細(xì)胞的功能，以PHA作為促分裂因子來檢測淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能，其轉(zhuǎn)化率的高低常作為衡量機(jī)體免疫水平的指標(biāo)，T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和白細(xì)胞吞噬率越高，意味著淋巴細(xì)胞在外來因子的刺激下增殖反應(yīng)越強(qiáng)，機(jī)體的細(xì)胞免疫能力越強(qiáng)[4-5]。本試驗(yàn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的測定結(jié)果顯示中藥添加劑使用2個(gè)療程后，可顯著改善斷奶仔豬的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率(P＜0.05)，能顯著提高機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。

馬玉芳等[6]在基礎(chǔ)日糧中添加2種不同精制的中藥飼料添加劑，發(fā)現(xiàn)中藥添加劑能改善斷奶仔豬生長性能，并能促進(jìn)免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)、補(bǔ)體(C3、C4)和白細(xì)胞介素-2的生成，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[7]。本試驗(yàn)免疫力影響結(jié)果顯示1個(gè)療程后，試驗(yàn)組的豬瘟和藍(lán)耳病抗體檢測合格率比對照組均提高了3%(P＞0.05)，2個(gè)療程后試驗(yàn)組合格率比對照組分別提高了17%(P＜0.05)和19%(P＜0.05)，充分說明本中藥添加劑能提高斷奶仔豬免疫力。

中藥不僅可以直接通過其藥理作用對腸道內(nèi)寄生蟲產(chǎn)生作用，抑制病原寄生蟲的發(fā)育，還可通過其綜合作用對寄生蟲產(chǎn)生驅(qū)蟲效果，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，產(chǎn)生非特異性免疫，增強(qiáng)其抗病能力，配以致瀉藥，排出蟲體，再配以健脾胃藥調(diào)理脾胃，從而達(dá)到消除病原及其對組織細(xì)胞的損傷，恢復(fù)機(jī)體的正常生理功能[8]。本試驗(yàn)中糞便蟲卵計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，用藥1個(gè)療程后試驗(yàn)組的減卵率為1%(P＞0.05)，用藥2個(gè)療程后試驗(yàn)組的減卵率為47%(P＜0.05)，說明本研究應(yīng)用的中草藥添加劑具有一定的抑制寄生蟲蟲卵的作用。

[1]陳 靜，樸鐘云，劉顯軍.關(guān)于我國中草藥飼料添加劑安全性的評價(jià)與建議[J].中國畜牧雜志，2011，47(16):1-5.

[2]楊希國，張秀英.中草藥對畜禽免疫藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國獸藥雜志，2003，37(9):51-54.

[3]樊春波，張又榮，吳建華，等.一種復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬免疫機(jī)能的影響[J].中國獸藥雜志，2010，44(3):24-27.

[4]殷 超，陳 亮，王 勇，等.復(fù)方中藥制劑對仔豬免疫機(jī)能及消化酶活性的影響[J].畜牧與獸醫(yī)，2010，42(11):56-59.

[5]何正義，李福寶，吳翠娟，等.中藥制劑對豬T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和白細(xì)胞吞噬率的影響[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，29(12):20-22.

[6]馬玉芳，劉建成，黃一帆，等.中藥飼料添加劑對仔豬生長性能和免疫功能的影響[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2003，32(4):496-499.

[7]張 鑫，王愛國，姜天團(tuán)，等.中草藥添加劑及不同飼料狀態(tài)對早期斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響[J].2010，46(23):60-63.

[8]張志遠(yuǎn)，汪德剛，韓 立.中藥抗動(dòng)物寄生蟲病的研究進(jìn)展[J].河南畜牧獸醫(yī)，2001，21(8):10-11.