陳 靜，沈克飛，任航行，高立芳，寧長(zhǎng)申

（1.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 渝中400015；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 牧醫(yī)工程學(xué)院，河南 鄭州450002）

隱孢子蟲?。–ryptosporidiosis）是由隱孢子蟲（Cryptosporidium）引起的一種呈世界性分布的機(jī)會(huì)致病性人獸共患原蟲病，主要臨床癥狀表現(xiàn)為腹瀉。資料顯示，歐美等多個(gè)國(guó)家相繼診斷出山羊隱孢子蟲感染［1］；我國(guó)貴州、河南等地均有山羊隱孢子蟲感染報(bào)道［2－3］；山羊羔感染隱孢子蟲后，輕者消瘦、阻礙生長(zhǎng)，重者引發(fā)腹瀉，甚至死亡，造成嚴(yán)重的直接和間接經(jīng)濟(jì)損失。El－Sherbini等報(bào)道，羊場(chǎng)飼養(yǎng)員隱孢子蟲陽性率明顯高于非飼養(yǎng)人員，表明羊?yàn)槿穗[孢子蟲感染的一個(gè)重要來源［4］。鑒于山羊隱孢子蟲重要的經(jīng)濟(jì)意義和公共衛(wèi)生意義，為了對(duì)重慶市種羊場(chǎng)山羊隱孢子蟲病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素做出科學(xué)評(píng)價(jià)，筆者于2011年8月～2012年3月調(diào)查了重慶市3個(gè)地區(qū)6個(gè)羊場(chǎng)隱孢子蟲的感染情況。調(diào)查報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 樣品來源與采集 2011年8月～2012年3月，先后在云陽、巫山、酉陽3個(gè)縣6個(gè)羊場(chǎng)，隨機(jī)經(jīng)直腸采取糞樣或采集山羊新鮮糞樣共301份（每個(gè)羊場(chǎng)抽樣檢測(cè)率大于10%），將糞樣分別裝入潔凈塑料袋，編號(hào)，并登記采樣時(shí)間、地點(diǎn)、年齡、品種、性別、病史、臨床癥狀及糞便狀況、免疫及用藥情況等，置于4℃冰箱待檢。

1.2 調(diào)查羊品種及年齡 本次調(diào)查的羊?yàn)槲咨胶谏窖颉⒉柹窖?、渝東白山羊、酉州烏羊、武漢烏骨羊、酉州黑山羊。本次采樣年齡為1月齡到3歲之間的公、母羊，以1～4月齡的羔羊?yàn)橹?、產(chǎn)后1月內(nèi)和懷孕2～5月左右的母羊、有腹瀉癥狀而體弱的成年羊及部分健康的成年公、母羊。

1.3 樣品檢查 飽和蔗糖溶液漂浮法：取被檢糞便3～5g，加蒸餾水30mL，攪拌均勻，用糞篩過濾，取濾液，于3 000r／min離心3min，傾去上層液，將沉淀物攪勻，加飽和蔗糖溶液30mL，攪拌均勻，以3 000r／min離心5min，然后用吊環(huán)與液面平行接觸以蘸取表面液膜，抖落于載玻片上，加蓋玻片，于400倍鏡檢。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn) 未見卵囊者記為陰性，鏡檢有隱孢子蟲卵囊者需判斷其感染強(qiáng)度。鏡檢時(shí)，50個(gè)視野可見5個(gè)以下隱孢子蟲卵囊記＋ ，5～10個(gè)卵囊記＋＋，11個(gè)卵囊以上記＋＋＋。

1.5 卵囊形態(tài)觀察及蟲種鑒定 以測(cè)微尺測(cè)量經(jīng)飽和蔗糖溶液漂浮法檢查到的隱孢子蟲卵囊100個(gè)左右，根據(jù)卵囊的長(zhǎng)短徑計(jì)算卵囊指數(shù)，再結(jié)合隱孢子蟲卵囊形態(tài)特征和以往文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行蟲種初步鑒定。

2 結(jié)果

2.1 隱孢子蟲感染情況 共檢測(cè)重慶市3個(gè)縣6個(gè)羊場(chǎng)糞樣301份，檢出隱孢子蟲卵囊陽性樣品16份，平均感染率為5.32%，3個(gè)羊場(chǎng)檢出隱孢子蟲卵囊，場(chǎng)感染率為50%，均在山峽庫區(qū)，結(jié)果見表1。

表1 重慶市6個(gè)種羊場(chǎng)的隱孢子蟲感染情況

2.2 不同年齡感染率及感染強(qiáng)度 本次檢查結(jié)果顯示，以2～3月齡羔羊、產(chǎn)后1月和懷孕2月左右母羊的感染率較高，分別為9.68%（9／93）、10.5%（2／19）和6.67%（1／15）。

經(jīng)測(cè)定山羊隱孢子蟲感染強(qiáng)度為每張玻片2～1 000↑個(gè)卵囊（1 000↑表示1 000以上），每張玻片200個(gè)視野；50%（8／16）為＋，卵囊數(shù)為2～10個(gè)／片；6.25%（1／16）＋＋，卵囊數(shù)為30個(gè)／片；43.8%（7／16）＋＋＋ ，卵囊數(shù)為50～1 000↑個(gè)／片。

2.3 卵囊形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 隱孢子蟲卵囊在400×光鏡下飽和蔗糖液中呈玫瑰紅色，短卵圓形或近圓形；囊壁光滑，薄而均勻，無微孔和極粒，周圍有亮綠色的折光帶；卵囊內(nèi)有彎曲的子孢子和殘?bào)w，大多囊內(nèi)的子孢子排列不規(guī)則，呈結(jié)構(gòu)不清的多態(tài)狀，殘?bào)w為著色較深的顆粒狀（見圖1）。所測(cè)100個(gè)卵囊平均大小為5.0μm×4.6μm［（4.4～5.6）μm×（4.1～5.0）μm］，卵囊形態(tài)指數(shù)為1.09（長(zhǎng)／寬），參考有關(guān)文獻(xiàn)［3，5］初步鑒定為微小隱孢子蟲（C.Parvum）。

圖1 飽和蔗糖溶液漂浮法檢測(cè)的隱孢子蟲卵囊400×

3 討論

筆者首次對(duì)重慶市3個(gè)養(yǎng)羊大縣具有代表性的種羊場(chǎng)隱孢子蟲感染情況進(jìn)行了初步調(diào)查。調(diào)查結(jié)果顯示，部分羊場(chǎng)存在隱孢子蟲感染，場(chǎng)感染率為50%，均為山峽庫區(qū)的兩個(gè)種羊場(chǎng)，且陽性樣品率差異較大。分析原因可能有：（1）感染存在一定的地域差異；（2）選取樣本的局限性，因每個(gè)羊場(chǎng)的規(guī)模和羊的年齡分布存在差異，根據(jù)所調(diào)查羊場(chǎng)的實(shí)際情況，重點(diǎn)采集1～4月齡的羔羊、圍產(chǎn)期前后的母羊、體況差的羊和拉稀的羊，故每個(gè)羊場(chǎng)不同階段羊采集樣品數(shù)量不一致；（3）品種間的差異，結(jié)果顯示，本次調(diào)查的6個(gè)品種中波爾山羊的感染率較高，云陽縣兩個(gè)波爾山羊種羊場(chǎng)均有隱孢子蟲感染，可能與波爾山羊是外來品種有關(guān)；（4）與飼養(yǎng)管理有密切關(guān)系，陽性率較高的羊場(chǎng)衛(wèi)生條件相對(duì)較差，缺乏科學(xué)的飼養(yǎng)管理，相對(duì)建場(chǎng)時(shí)間較長(zhǎng)7年，而酉陽的2個(gè)羊場(chǎng)建場(chǎng)時(shí)間較短，一個(gè)為1年，一個(gè)為4年，卵囊污染的機(jī)會(huì)和程度相對(duì)較低。

本次檢查結(jié)果顯示，以2～3月齡羔羊、產(chǎn)后1月和懷孕2月左右母羊的感染率較高，分別為9.68%、10.5%和6.67%，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道基本一致［3，6－7］，表明山羊隱孢子蟲感染存在年齡、體況等差異。其中產(chǎn)后1月和懷孕2月的母羊感染強(qiáng)度均較強(qiáng)，全部為＋＋＋，可能與孕產(chǎn)期前后羊免疫力下降有關(guān)。陽性樣品中均無明顯臨床癥狀，這與Causape A C.等［8］報(bào)道的30日齡以下的羔羊感染后易發(fā)生腹瀉，而30日齡以上的羔羊感染后則通常無癥狀相一致。

所抽檢的301份樣品，平均感染率為5.32%，而 Hermida等［9］報(bào)道成年山羊感染率7.7%，國(guó)內(nèi)吳位珩等［2］報(bào)道貴州部分地區(qū)山羊隱孢子蟲感染率為40%以上，崔彬等［3］報(bào)道河南部分地區(qū)山羊隱孢子蟲感染率為2.75%。可見重慶地區(qū)山羊隱孢子蟲感染率較低。

根據(jù)鏡檢結(jié)果，初步判斷陽性樣品所感染的隱孢子蟲為微小隱孢子蟲。據(jù)資料報(bào)道，感染山羊的隱孢子蟲種類有微小隱孢子蟲、人隱孢子蟲、豬隱孢子蟲、安氏隱孢子蟲、隱孢子蟲鹿基因型等。而感染羊的優(yōu)勢(shì)種或基因型是微小隱孢子蟲和隱孢子蟲鹿基因型［5］。本次調(diào)查僅從形態(tài)學(xué)上初步鑒定重慶羊場(chǎng)感染的是微小隱孢子蟲，有關(guān)病原特性有待進(jìn)一步用分子生物學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定。

［1］崔彬，菅復(fù)春，寧長(zhǎng)申，等.隱孢子蟲和羊隱孢子蟲病的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，2009，27（4）：353－355.

［2］吳位珩，徐洪忠，楊茂生，等.貴州省部分地區(qū)山羊隱孢子蟲病的調(diào)查分析［J］.中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲病，2001，9（3）：21－22.

［3］崔彬，王永立，菅復(fù)春，等.河南省山羊隱孢子蟲流行病學(xué)調(diào)查［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2008，44（9）：12－14.

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