徐秋良，朱寬佑，劉永祥，姜東鳳，程 偉

（鄭州牧業(yè)工程高等專科學(xué)校畜牧工程系，河南 鄭州450011）

缺乏降溫設(shè)施以及高密度飼養(yǎng)使中小型肉雞場(chǎng)在夏季高溫季節(jié)面臨熱應(yīng)激的危害。熱應(yīng)激不僅降低肉雞采食量、日增重和飼料轉(zhuǎn)化率［1］，甚至引起機(jī)體免疫抑制，使肉仔雞死亡率升高。研究表明，熱應(yīng)激損傷腔上囊、淋巴結(jié)等免疫器官［2］，降低血液中IgG水平和外源的抗體滴度［3］，并降低外周血T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率［4］。其主要原因是熱應(yīng)激使細(xì)胞線粒體活性氧自由基增加，導(dǎo)致氧化和抗氧化系統(tǒng)失衡，引起機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化，損傷蛋白質(zhì)、DNA和生物分子［5］。

實(shí)際生產(chǎn)中，維生素E的抗氧化作用和免疫增強(qiáng)作用已得到廣泛應(yīng)用［6－7］，但在熱應(yīng)激條件下的應(yīng)用研究報(bào)道不多。本試驗(yàn)在熱應(yīng)激下探討維生素E免疫增強(qiáng)效果及適宜添加劑量，為維生素E在夏季肉仔雞日糧添加量提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 從開(kāi)封正大有限公司購(gòu)進(jìn)AA肉仔雞400只，分成4個(gè)處理組，每組5個(gè)重復(fù)，每重復(fù)20只（公母各半）。對(duì)測(cè)定不同指標(biāo)的試驗(yàn)雞進(jìn)行標(biāo)記，避免個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。

1.2 試驗(yàn)日糧 按美國(guó)NRC（1994）肉雞營(yíng)養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制玉米－豆粕型基礎(chǔ)日糧，維生素E的添加量分別為20、50、100、150mg／kg，維生素 E為 Roche之dl－α－生育酚醋酸酯。

1.3 免疫程序及途徑 7日齡，北京華都公司新城疫Ⅳ系苗3頭份／只，滴鼻；14日齡，北京華都公司腔上囊弱毒苗3頭份／只，飲水；25日齡，北京華都公司新支二聯(lián)苗3頭份／只，飲水。

1.4 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)雞采用單層籠養(yǎng)，粉料投喂，自由飲水與采食。試驗(yàn)在夏季進(jìn)行，試驗(yàn)期雞舍平均溫度在30℃～35℃。

1.5 測(cè)定指標(biāo)

1.5.1 抗體效價(jià) 3、6日齡于大群中隨機(jī)挑選15只雞，心臟采血，離心分離血清，測(cè)定新城疫（ND）母源抗體。9日齡開(kāi)始到49日齡每組重復(fù)標(biāo)記10只雞，翅靜脈采血，血樣置于37℃溫箱1h，析出血清，4℃保存?zhèn)溆?。采用血清倍比稀釋法，紅細(xì)胞凝集抑制（HI）試驗(yàn)測(cè)定新城疫（ND）抗體效價(jià)，取血清稀釋倍數(shù)的log2作為統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)［8］。

1.5.2 淋巴細(xì)胞α－醋酸萘脂酶陽(yáng)性百分率 各重復(fù)標(biāo)記3只雞，于10、14、2 1、28、35、4 2、49日齡心臟采血1mL／只，加入 Hank＇s液1mL，輕輕滴加于離心管中的2mL淋巴細(xì)胞分層上（比重為1.007±0.001），以2 000r／min離心30min。洗滌后，加少量Hank′s液，搖勻，制片、固定、染色、復(fù)染、鏡檢。

1.5.3 免疫器官指數(shù) 胸腺、脾臟、腔上囊指數(shù)按以下公式計(jì)算：免疫器官指數(shù)＝（免疫器官重／宰前活重）×100%

1.6 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用SAS軟件對(duì)各處理數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較分析，Duncan′s法多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫器官指數(shù) 由表1可以看出，與20mg／kg組相比，50、100mg／kg日糧維生素E顯著提高肉仔雞49日齡脾臟、腔上囊指數(shù)和胸腺指數(shù)（P＜0.05），50、100mg／kg之間脾臟和腔上囊指數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。150mg／kg組49日齡脾臟、腔上囊及胸腺指數(shù)顯著高于其余處理組（P＜0.05）。日糧添加維生素E 150mg／kg有利于提高夏季高溫季節(jié)肉仔雞的免疫器官增重。

表1 肉仔雞免疫器官指數(shù)

2.2 抗體效價(jià) 3日齡檢測(cè)肉仔雞ND母源抗體水平為6.1，6日齡為5.2，由于各組ND抗體受母源抗體的影響，起始抗體效價(jià)不同，因此用抗體的提高程度，即各處理組不同日齡的抗體效價(jià)與9日齡的抗體效價(jià)差值表示。從表2中可以看出，與20 mg／kg組相比，日糧添加50mg／kg組維生素E在夏季高溫環(huán)境下對(duì)肉仔雞ND抗體水平?jīng)]有明顯的提升作用，僅在12日齡時(shí)高于20mg／kg組（P＜0.05）。與20mg／kg相比，日齡添加100mg／kg與150mg／kg維生素E明顯促進(jìn)肉仔雞ND抗體水平，其中，9、12、16、19、25、28、38、41、44日齡達(dá)到顯著水平（P＜0.05）。100mg／kg組與50mg／kg組在整個(gè)試驗(yàn)期間對(duì)ND抗體的影響差異不顯著，只有16、38日齡時(shí)100mg／kg組顯著高于50mg／kg組（P＜0.05）。與50mg／kg相比，日糧添加150 mg／kg維生素E提高肉仔雞16、25、38日齡和44日齡ND抗體水平（P＜0.05）。

表2 肉仔雞新城疫抗體效價(jià)（log2）

分析各處理組ND抗體變化規(guī)律可知，試驗(yàn)中維生素E添加量不影響高溫季節(jié)肉仔雞抗體總體變化規(guī)律，在12、25日齡時(shí)，20mg／kg組ND抗體效價(jià)明顯低于保護(hù)臨界值3log2，而50、100mg／kg組和150mg／kg組ND效價(jià)在試驗(yàn)全期均高于保護(hù)臨界值。

本試驗(yàn)表明，在高溫環(huán)境下日糧添加維生素E提高肉仔雞 ND抗體效價(jià)，50、100、150mg／kg添加量可降低肉仔雞感染新城疫的風(fēng)險(xiǎn)，添加量以150 mg／kg為宜。

2.3 淋巴細(xì)胞α－醋酸萘脂酶陽(yáng)性百分率 見(jiàn)表3，與20mg／kg組相比，50mg／kg添加量提高肉仔雞21、28日齡淋巴細(xì)胞陽(yáng)性百分率（P＜0.05）。在整個(gè)試驗(yàn)期，100、150mg／kg除14日齡外，淋巴細(xì)胞陽(yáng)性百分率均高于20mg／kg組；而100、150mg／kg組間在試驗(yàn)全期均差異不顯著（P＞0.05）。

表3 肉仔雞淋巴細(xì)胞α－醋酸萘脂陽(yáng)性百分率

因此，就淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率而言，在夏季高溫環(huán)境下，肉仔雞日糧添加100mg／kg維生素E較適宜。

3 討論

為提高研究結(jié)果的實(shí)用性，本試驗(yàn)沒(méi)有設(shè)置0 mg／kg日糧組，主要考慮到NRC（1994）標(biāo)準(zhǔn)、部分前人研究結(jié)果及實(shí)際生產(chǎn)中維生素E的用量。此外，對(duì)于夏季環(huán)境高溫，試驗(yàn)沒(méi)有采用人工溫控措施，也是為了模擬中小型養(yǎng)雞戶的生產(chǎn)實(shí)際。

夏季高溫時(shí)，可在雞舍內(nèi)安裝降溫系統(tǒng)緩解高溫對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)的影響，降低死亡率，因投資成本較高，降溫系統(tǒng)在中小型養(yǎng)雞戶中并不普遍。因此，使用添加劑緩解熱應(yīng)激，提高肉仔雞抗病力是目前我國(guó)中小型肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)夏季提高生產(chǎn)效益的有效途徑。

維生素E具有清除氧自由基，緩解細(xì)胞、組織的氧化損傷的功能，作為抗氧化劑和免疫增強(qiáng)劑，維生素E已經(jīng)在肉雞生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。但有關(guān)維生素E適宜的添加量方面的報(bào)道結(jié)果不盡相同。典型的肉仔雞日糧維生素E的添加量大致為20～30mg／kg［9］，陳艷君等［10］（2008）報(bào)道，肉仔雞日糧添加15IU／kg維生素E可獲得最佳生產(chǎn)性能和免疫力，但1 500IU／kg降低肉仔雞免疫力。Friedman等（1998）［11］在肉仔雞日糧中添加0、10、30、150 mg／kg的維生素E研究其對(duì)免疫機(jī)能的影響，結(jié)果表明，30、150mg／kg組抑制肉仔雞的免疫機(jī)能。劉鈾等（1999）［12］在肉仔 雞 日 糧 中 添 加 0、100、200 mg／kg及300mg／kg維生素E表明，隨著添加劑量的升高，30日齡肉仔雞淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和ND抗體效價(jià)顯著上升，高劑量增強(qiáng)肉仔雞的免疫機(jī)能。

本研究結(jié)果表明，日糧中添加50、100、150mg／kg維生素E，不同程度的提高肉仔雞的ND抗體效價(jià)和淋巴細(xì)胞陽(yáng)性百分率，綜合比較，150mg／kg效果較好，沒(méi)有出現(xiàn)免疫抑制作用，這可能緣于與適宜溫度相比，高溫產(chǎn)生的氧化應(yīng)激提高了維生素E的需要量。

腔上囊、脾臟和胸腺是肉仔雞的主要免疫器官，是免疫細(xì)胞分化產(chǎn)生的場(chǎng)所。維生素E能促進(jìn)脾臟細(xì)胞分裂、當(dāng)維生素E缺乏時(shí)家禽胸腺、腔上囊和脾臟發(fā)育受損［13］。研究表明，在熱應(yīng)激條件下，免疫器官的受損程度與氧自由基活性和丙二醛濃度高度相關(guān)，為高溫環(huán)境下造成的機(jī)體氧化應(yīng)激所致［14］。因此，為維持免疫器官的正常功能，夏季高溫時(shí)肉仔雞對(duì)維生素E的需要量增加。

本研究表明，與20mg／kg相比，50、100、150 mg／kg的維生素E添加量顯著提高免疫器官指數(shù)，150mg／kg組效果最好。因此，綜合肉仔雞的ND抗體效價(jià)、淋巴細(xì)胞陽(yáng)性百分率和免疫器官指數(shù)，在本試驗(yàn)條件下，夏季高溫時(shí)肉仔雞日糧維生素E適宜添加量為150mg／kg。

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