李 青 ,董兆稀, 趙冰清

( 1. 長沙市中心醫(yī)院藥劑科,中國 長沙 410007；2.中國人民大學外國語學院,中國 北京 100872；3.湖南師范大學醫(yī)學院,中國 長沙 410013)

白首烏(CynanchumauriculatumRoyle ex Wight)系蘿摩科(Asclepiadaceae)馬利筋亞科(Ascle-pioideae)鵝絨藤屬(Cynanchumlinn)植物,又名耳葉牛皮消、飛來鶴(《植物名實圖考》)、老牛凍(湖南,四川[1])．在我國資源豐富,山東、江蘇等地有人工栽培,其塊根藥用，具有補肝腎、強筋骨、益精血、健脾消食、解毒療瘡等功效[1-2]．白首烏總苷對預防動脈粥樣硬化斑塊形成有一定的作用[3-4]．研究表明,白首烏具有養(yǎng)血益肝、固腎益精、烏須黑發(fā)和延年益壽的功效[2,5]．現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)白首烏中含有多種有效成分,具有抗腫瘤、保肝護肝降血脂等多方面的藥理活性[6-8]．國外的研究也證實了這些藥理活性[9-10]．

本實驗所用白首烏采自岳麓山,經(jīng)湖南省藥檢所方石林教授鑒定為蘿摩科植物耳葉牛皮消(CynanchumauriculatumRoyle ex Wight)．

1 材料和試劑

1.1 實驗動物

昆明種雄性和雌性小鼠各半(120只,體重(20±2) g),湖南農(nóng)業(yè)大學動物飼養(yǎng)基地提供．

1.2 實驗試劑與設備

實驗所用試劑與設備的名稱、廠商及型號見表1．

表1 實驗所用試劑與設備的名稱、廠商及型號

1.3 實驗數(shù)據(jù)處理軟件

2 實驗方法

2.1 多糖的提取分離

2.1.1 前處理 取白首烏飲片,使用植物粉碎機將其粉碎,得到白色白首烏粉末．將所得白首烏粉末裝入圓底燒瓶,按料液體積比1∶3加入85%無水乙醇,90 ℃水浴加熱1 h,提取2次,過濾,將所得濾渣風干,得到黃色干粉．

2.1.2 提取 稱取適量上述白首烏黃色干粉,置于圓底燒瓶中,按料水質(zhì)量比1∶20加入蒸餾水,在100 ℃的熱水浴中冷凝回流浸提2 h．冷卻后使用離心機3 000 r/min離心10 min,將所得上清液合并．將上清液倒入圓底燒瓶,于90 ℃溫度下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮．濃縮所得試液加入3倍體積95%乙醇溶液,靜置1 h 后,使用離心機3 000 r/min離心10 min,棄去溶液,將沉淀抽濾．抽濾所得沉淀干燥后即得白首烏粗多糖．

2.2 藥理實驗

2.2.1 動物分組 120只小白鼠,分為三大組,高劑量組,劑量為150 μg/g；中劑量組,劑量為100 μg/g；低劑量組,劑量為50 μg/g．給藥方式為灌胃給藥．每一大組小白鼠40只,雌雄各半,體重(20±2) g．并將小白鼠隨機分為對照組和3個實驗組,每組10只,實驗組按劑量用生理鹽水稀釋,白首烏粗多糖按25 μL/g量給藥；對照組按等量生理鹽水灌胃．此4組連續(xù)灌胃8 d,于末次灌胃2 h后進行實驗．

2.2.2 負荷游泳實驗 小白鼠40只,雌雄各半,隨機均分4組,每組10只按高劑量組、中劑量組、低劑量組連續(xù)給小鼠灌胃8 d,實驗組按劑量用生理鹽水稀釋白首烏粗多糖,以25 μL/g灌胃,1次/d；對照組按等量生理鹽水灌胃．于完成灌胃的小白鼠尾部束一重物(約2 g)放入一水深20 cm,水溫(30±1) ℃的玻璃缸內(nèi),以小鼠體力耗竭(小鼠頭部沉入水中10 s不能浮出水面)為指標,記錄小鼠生存時間．

2.2.3 耐缺氧實驗 小白鼠40只,雌雄各半,隨機均分4組,每組10只按高劑量組、中劑量組、低劑量組連續(xù)給小鼠灌胃8 d.實驗組按劑量用生理鹽水稀釋白首烏粗多糖,以25 μL/g灌胃,1次/d；對照組按等量生理鹽水灌胃．將小鼠放入250 mL的廣口瓶內(nèi),每瓶1鼠,瓶內(nèi)裝有10 g無水氯化鈣,用凡士林涂抹瓶口,蓋嚴密封,立即記時,以呼吸停止(小鼠胸部不起伏)為指標,記錄小鼠存活時間．

2.2.4 耐高溫實驗 小白鼠40只,雌雄各半,隨機均分4組,每組10只按高劑量組、中劑量組、低劑量組連續(xù)給小鼠灌胃8 d.實驗組按劑量用生理鹽水稀釋白首烏粗多糖,以25 μL/g灌胃,1次/d；對照組按等量生理鹽水灌胃將小鼠放入50±1 ℃的恒溫箱中的玻璃缸內(nèi),以小鼠呼吸停止(小鼠胸部不起伏)為指標,記錄小鼠存活時間．

3 實驗結(jié)果

3.1 負荷游泳實驗

將實驗所得高中低劑量組與對照組數(shù)據(jù)進行比較,得出白首烏粗多糖對小白鼠負荷游泳能力的影響結(jié)果，見表2．

表2 小白鼠負荷游泳對比實驗結(jié)果

注:各實驗組與對照組比較*P<0.05,差異顯著；**P<0.01,差異極顯著．

由表2可看出,與對照組相比,實驗組小白鼠負荷游泳明顯表現(xiàn)活躍,且小白鼠負荷游泳時間隨粗多糖劑量增加而延長．高劑量組與對照組的差異達到極顯著水平,P<0.01；中劑量組與對照差異顯著,P<0.05；低劑量組與對照差異不顯著,P>0.05．實驗結(jié)果說明,3種劑量的白首烏粗多糖均有一定的抗疲勞作用,且中、高劑量組較對照組差異顯著．

3.2 耐缺氧實驗

將實驗所得高中低劑量組與對照組數(shù)據(jù)進行比較,得出白首烏粗多糖對小白鼠耐缺氧能力的影響結(jié)果，見表3．

表3 小白鼠耐缺氧對比實驗結(jié)果

注:各實驗組與對照組比較**P<0.01,差異極顯著．

由表3可以看出,實驗組小鼠耐缺氧存活時間長于對照組,且存活時間隨粗多糖劑量增加而延長；高劑量組與對照組之間差異極顯著,P<0.01,中、低劑量組與對照組間的差異均不顯著,P>0.05．實驗結(jié)果說明,白首烏粗多糖可提高小鼠對缺氧的耐受能力,其中高劑量組的存活時間較對照組差異極顯著(P<0.01)．

3.3 耐高溫實驗

將實驗所得高中低劑量組與對照組數(shù)據(jù)進行比較,得出白首烏粗多糖對小白鼠耐高溫能力的影響結(jié)果，見表4．

表4 小白鼠耐高溫對比實驗結(jié)果

注:各實驗組與對照組比較**P<0.01,差異極顯著．

由表4可知,實驗組小鼠耐高溫存活時間長于對照組,且存活時間隨粗多糖劑量增加而延長；中、高劑量組與對照組差異極顯著,P<0.01；低劑量組與對照差異不顯著,P>0.05．實驗結(jié)果說明,白首烏粗多糖可提高小鼠對高溫的耐受能力,且中、高劑量組的存活時間較對照組差異極顯著(P<0.01)．

4 結(jié)果與討論

白首烏多糖對小白鼠的實驗研究表明:白首烏多糖能明顯提高小白鼠耐力,延長耐缺氧、負荷游泳和耐高溫時間,且中劑量組、高劑量組與對照組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01),其作用與劑量大小有關.高、中、低3個劑量組中,存在劑量效應關系,以高劑量組效果最為明顯．結(jié)果表明,白首烏粗多糖具有抗疲勞、耐缺氧等作用,顯示其對延長小白鼠的壽命有著積極意義．今后的研究中,如果能進行增強小白鼠記憶能力等指標的藥理實驗研究,在白首烏多糖抗衰老作用研究中必將有新的發(fā)現(xiàn)．

參考文獻:

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