李培征，陸永躍，梁廣文，曾 玲

(華南農(nóng)業(yè)大學資源環(huán)境學院，廣州510642)

桔小實蠅Bactrocera dorsalis(Hendel)，又稱東方果實蠅 (oriental fruit fly)，屬雙翅目Diptera，實蠅科 Tetriphitidae，果實蠅屬 Bactrocera Macquart。原產(chǎn)于東南亞，當前已成為中國華南地區(qū)、東南亞、印度和美國夏威夷群島等國家和地區(qū)的重要果蔬害蟲 (和萬忠等，2002)。該蟲寄主范圍廣，能為害香蕉、柑橘、楊桃、番石榴、楊梅、枇杷、芒果、茄子和辣椒等46個科250多種水果和蔬菜。在我國華南、華中、西南和華東等地區(qū)造成巨大的經(jīng)濟損失。長期不科學的化學防治使其對多種類型殺蟲劑產(chǎn)生了抗藥性 (潘志萍等，2005;章玉蘋，2007;章玉蘋等，2008)，使田間防治難度加大。并且，隨著高毒殺蟲劑的禁用和桔小實蠅對常用藥劑的抗性在田間普遍發(fā)生，現(xiàn)在迫切需要尋找理想的防治桔小實蠅的藥劑品種，來替代被禁用的高毒藥劑以及替換或輪換已產(chǎn)生抗性的常用藥劑。多殺霉素是當前防治桔小實蠅效果較好、使用范圍最為廣泛的一種藥劑。針對桔小實蠅對多殺霉素抗性的現(xiàn)實遺傳力及抗藥性風險評估的研究，目前國內(nèi)外還沒有報道。

本研究采用的閾性狀分析方法 (Tabashnik，1992)，在室內(nèi)對桔小實蠅進行抗性選育，估算了桔小實蠅對多殺菌素的抗性現(xiàn)實遺傳力，評估了抗性風險，為該藥劑的合理使用及預防和延緩其抗性發(fā)展提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 供試昆蟲

桔小實蠅敏感品系 (Susceptible strain，簡稱SS):在室內(nèi)不接觸任何藥劑，已用人工飼料飼養(yǎng)74代。并多次測定其對藥劑的毒力，以確定其敏感性。飼養(yǎng)條件:溫度25～28℃，相對濕度60%，光周期16L∶8D。取同一批3～5 d齡的健康成蟲供試。

1.1.2 供試藥劑

95%多殺菌素原粉，惠州中迅農(nóng)藥有限公司提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 抗藥性測定方法

采用藥膜法測定抗藥性，將供試藥劑用丙酮配制成母液后稀釋成5個濃度。將5 mL稀釋的藥液加入250 mL的三角瓶中，轉(zhuǎn)動三角瓶使藥液在瓶壁上形成均勻的藥膜后，棄去藥液，待丙酮完全揮發(fā)后，引入羽化3～5 d的桔小實蠅成蟲，用紗布封住瓶口，倒置于25～28℃環(huán)境下。設(shè)丙酮處理作為空白對照，每處理3次重復，每重復10頭桔小實蠅成蟲。處理24 h后檢查死亡率。以觸動蟲體后30 s內(nèi)不見其活動視為死亡。以對照組死亡率小于10%視為有效試驗。

1.2.3 毒力計算方法

試驗數(shù)據(jù)用Excel軟件處理，以使用藥劑的濃度對數(shù)值 (Log－concentration值)為自變量，以對應的死亡率機率值 (Probit)為應變量，計算出毒力回歸方程 (Log concentration－probit line，簡稱LC－P line)、致死中濃度 (LC50)、95%置信區(qū)間 (95%confidence interval，簡稱95%CI)和相關(guān)系數(shù) (correlation index，簡稱r)等參數(shù)?？剐员稊?shù) (Resistant multiple，簡稱Rm)按下式計算，以敏感品系 (SS)為參照。

1.2.4 現(xiàn)實遺傳力的估算

利用Tabashnik等 (1992，1994)推薦的計算公式，計算現(xiàn)實遺傳力h2。計算公式:h2=R/S，其中S=i×δp;R=lg(抗性比)/n;i≈1.583－0.0193336 p+0.0000428 p2+3.65194/p(10≤P≤80);P=(1－平均校正死亡率) ×100;δp=1/平均坡度。其中，i為汰選強度;δp為表型標準差;S為選擇差，代表受選親本平均表現(xiàn)型值與整個親本群體的平均表現(xiàn)型值之差;R為選擇響應，代表受選親本的子代平均表現(xiàn)型值與整個親本群體平均表現(xiàn)型值之差;n為汰選次數(shù);h2為現(xiàn)實遺傳力。

1.2.5 抗性風險評估

根據(jù)現(xiàn)實遺傳力h2，可以預測汰選后抗性上升x倍所需代數(shù)G，G=lgx/(h2×S)。在不同選擇壓力下，即多殺霉素對桔小實蠅不同殺死率時，對抗性上升10倍所需的代數(shù)進行了預測，G=lg10/(h2×S)=1/(h2×S)。

2 結(jié)果與分析

2.1 桔小實蠅對多殺霉素的抗藥性增長動態(tài)

汰選結(jié)果表明，多殺霉素對桔小實蠅有較高的毒殺作用，LC50達0.60 mg/L。經(jīng)過16代選育，LC50從0.60mg/L增加到4.23 mg/L，桔小實蠅對多殺霉素抗性增加了7.05倍 (表1)，從圖1可以看出，抗性倍數(shù)的增加與汰選代數(shù)之間顯著符合線性回歸方程，分析得Rm=0.4066G+0.7439(R=0.9946，n=15，P＜0.01)，兩者相關(guān)性達到極顯著水平，亦即在較少的汰選代數(shù)時桔小實蠅對多殺霉素的抗藥性變化呈線性增長。

表1 桔小實蠅對多殺霉素的抗藥性汰選Table 1 Resistance selection of oriental fruit fly to Spinosad

圖1 桔小實蠅對多殺霉素的抗性倍數(shù)增長動態(tài)Fig.1 Dynamic of resistance of oriental fruit fly to Spinosad

2.2 桔小實蠅對多殺霉素抗性的現(xiàn)實遺傳力變化

從1～16代整個汰選培育過程桔小實蠅對多殺霉素抗性的現(xiàn)實遺傳力為0.1774(表2)。不同選育階段桔小實蠅對多殺霉素抗性的現(xiàn)實遺傳力不同，其中，F(xiàn)1～F6抗性上升了3.12倍，現(xiàn)實遺傳力為0.2695，F(xiàn)7～F11抗性上升了1.59倍，現(xiàn)實遺傳力為0.1882，F(xiàn)12至F16上升了1.23倍，現(xiàn)實遺傳力為0.0669。經(jīng)16代篩選，抗藥性僅達低抗水平。在平均存活率為43.93%時，桔小實蠅抗性上升10倍所需的代數(shù)G=lg10/(h2S)=1/(h2S)=18.87。

表2 桔小實蠅對多殺霉素的抗性現(xiàn)實遺傳力Table 2 Parameters of realized heritability of resistance to Spinosad in oriental fruit fly

3 結(jié)論與討論

昆蟲抗藥性發(fā)展的速度與藥劑的選擇壓密切相關(guān)，藥劑的選擇壓越高，抗性發(fā)展越快，這是因為用較大劑量藥劑處理昆蟲使種群中對藥劑較為敏感的個體迅速淘汰，存活下來的個體中體抗性基因頻率較高。室內(nèi)篩選時，選擇壓力通常控制在40% ～70%范圍內(nèi) (林祥文等，2001;賈變桃等，2007)。選擇壓過低，抗性發(fā)展速度慢，選擇壓過高，存活率低，抗性種群不容易建立。

使用數(shù)量遺傳學的原理和方法研究抗藥性遺傳力并進行抗藥性風險評估是當前昆蟲抗藥性研究和治理的主要內(nèi)容之一，國內(nèi)外關(guān)于這方面的報道較多，如Tabashnik(1992)估計了抗Bt的煙芽夜蛾、小菜蛾和馬鈴薯葉甲的現(xiàn)實遺傳力;林祥文等 (2001)估計了棉鈴蟲對辛硫磷的抗性現(xiàn)實遺傳力;Shi等 (2011)估計了家蠅對多殺霉素的現(xiàn)實遺傳力;Sial等 (2010)估計了棗鐮翅小卷蛾對氯蟲酰胺和乙基多殺菌素的現(xiàn)實遺傳力。

當前，桔小實蠅田間種群對多種殺蟲劑產(chǎn)生較高抗性 (潘志萍等，2005，2008;章玉蘋等，2007，2008)，但對多殺霉素總體處于敏感狀態(tài)(尚未發(fā)表)。該項研究是評估多殺菌素在田間推廣應用防治桔小實蠅效果的一個重要環(huán)節(jié)。本研究評估得到的結(jié)果為桔小實蠅對多殺菌素具有較低的抗性風險，并且由于該研究在室內(nèi)進行，環(huán)境相對穩(wěn)定，選育試驗估算的遺傳力可能比田間的實際值偏高，田間種群對多殺霉素的抗性發(fā)展可能更為緩慢。

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