王本琢 丁壯 郭光 孫勝元 （①吉林大學畜牧獸醫(yī)學院 吉林 長春 130062 山東無棣縣畜牧獸醫(yī)局）

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817種雞群非典型新城疫的綜合診斷

王本琢①②丁壯①*郭光②孫勝元②（①吉林大學畜牧獸醫(yī)學院 吉林 長春 130062 ②山東無棣縣畜牧獸醫(yī)局）

通過對兩個疑似患非典型新城疫的817肉雞種雞群進行了病理學、血清學及病原學綜合檢測。檢測結果表明：兩發(fā)病雞群的均表現(xiàn)有呼吸道癥狀、消化道癥狀及產(chǎn)蛋性能下降等非典型新城疫的基本癥狀；重癥病雞的胃腸道及呼吸道黏膜出血性卡他性炎癥，卵泡充血、出血，輸卵管萎縮等剖檢病變均符合新城疫的特征性剖檢病變；鏡檢均見病毒性腦炎、淋巴組織壞死等證病意義的新城疫組織病變；發(fā)病后HI抗體顯著升高，分離到新城疫病毒及免疫組織學檢測新城疫陽性，綜合診斷兩患病雞群為非典型新城疫。

817種雞 非典型新城疫 診斷

目前新城疫依然是影響我國家禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的最主要疫病之一，近年來由于免疫制度的不斷完善和疫苗質量的改進，免疫強度的不斷加大，新城疫的發(fā)生已逐漸呈現(xiàn)非典型化趨勢，尤其是產(chǎn)蛋雞群主要表現(xiàn)產(chǎn)蛋性能下降為特征的非典型新城疫，剖檢病變不明顯，臨床診斷比較困難。本研究對兩個用于“817”肉雜雞種蛋生產(chǎn)的患病商品代母群進行了病理學、血清學及病原學綜合檢測，以便做出確切診斷。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 發(fā)病雞群及病料采集 雞群A為30周齡產(chǎn)蛋高峰期(90%以上)用于生產(chǎn) “817”肉雜雞的海蘭褐商品蛋雞；雞群B為34周齡產(chǎn)蛋高峰期“817”肉雜雞種母雞。兩雞群隸屬于兩個雞場，分別于2011年3月、4月先后發(fā)病，發(fā)病情況基本相同，癥狀相似。發(fā)病初期雞群采事量下降，有輕度呼吸道癥狀，個別甩頭，有些雞排綠色稀糞，產(chǎn)蛋量每天下降5%~10%，蛋的形狀和質量稍有變化，顏色略淡，軟殼蛋、薄殼蛋增多。破蛋率升高，產(chǎn)蛋量下降了30%~40%，持續(xù)10幾天后開始恢復，恢復期有一定的死亡率，死淘率4%左右。取A、B雞群病死雞及癥狀明顯雞10余，發(fā)病后2周左右自發(fā)病雞群各采集血液40份，分離血清，低溫冰箱保存。

1.1.2 試驗材料 96孔“V"型血凝板(上海醫(yī)用分析儀器廠生產(chǎn))、8道可調(diào)移液器(德國生產(chǎn))、新城疫血凝抗原及標準陽性血清(購自中國獸藥監(jiān)察所)、SPF雞胚(購自山東省家禽研究所)、冰凍切片機(德國萊卡公司)、正置熒光顯微鏡(德國萊卡公司)、新城疫單抗(由山東農(nóng)業(yè)大學動科院臨床病理學實驗室劉思當老師惠贈)、FITC標記的兔抗雞IgG(購自博美科生物技術有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 病理剖檢及病理組織學檢查 取病死雞及癥狀明顯雞，按常規(guī)方法剖檢，觀察眼觀病變，取病雞腦、脾、腸道等組織器官，10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟切片、HE染色，光鏡下觀察。

1.2.2 雞胚接種 無菌取病雞脾、肺和腦新鮮病料。將病料置于消毒的勻漿器內(nèi)，研磨成乳劑，加入滅菌生理鹽水10倍稀釋成懸浮液，靜置或離心后取上清液，加入青霉素和鏈霉素各500IU/ml，置37℃溫箱作用30~ 60min。以上清液0.1ml接種于9~10日齡SPF雞胚尿囊腔，每胚0.2m1，每組樣品接種5枚雞胚。接種后的雞胚放在37℃溫箱內(nèi)繼續(xù)孵育，并每天檢查雞胚一次。石蠟封孔后37℃繼續(xù)孵化，棄去24h內(nèi)死亡的雞胚，以后每6h照蛋一次，并及時將死亡的雞胚置4℃冰箱冷藏。有明顯病變者取其胚液，檢測其HA滴度，若能凝集雞紅細胞，則進行HI試驗。

1.2.3 血凝試驗(HA)及血凝抑制試驗(HI) 按常規(guī)方法進行HA、HI試驗。

1.2.4 新城疫病毒間接免疫熒光檢測 將待檢測組織(病雞的脾、肺、肝)及陰性組織(健康對照雞的脾)冰凍切片后立刻放入冷丙酮中固定10min，取出后放入0.01mol/ LpH7.4的PBS液中，輕輕漂洗3~4次，5min/次，加新城疫抗體37℃孵育45min，用pH7.4的PBS液浸洗3次，5min/次，再在組織切片表面滴加FITC標記的兔抗雞IgG熒光抗體，繼續(xù)37℃孵育45min，用pH7.4的PBS液浸洗3次，5min/次，加甘油緩沖液，用蓋玻片封片鏡檢，觀察組織細胞特定區(qū)域內(nèi)是否有明亮的黃綠色或翠綠色熒光。

2 結果

2.1 病理學檢查

2.1.1 剖檢病變 剖檢病死雞，可見喉頭、氣管黏膜充血、黏液增多(圖1)；腺胃黏膜附有黏液，個別病死雞腺胃乳頭出血(圖2)。整個腸道發(fā)生卡他性炎癥，腸腔充滿黏液，十二指腸近末端、空腸中部(卵黃遺跡后)、回腸起始部、盲腸扁桃體可見局部黏膜(淋巴組織集中部位)腫脹、充血或出血(圖3，圖4)。直腸點狀、條紋狀出血，泄殖腔黏膜出血。輸卵管黏膜附有很多黏液(圖5)，卵泡充血、出血、液化或破裂(圖6)。后期死亡的病雞常表現(xiàn)卵黃性腹膜炎、輸卵管炎、心包炎、氣囊炎等繼發(fā)感染病變。

圖1 氣管黏膜充血、附有黏液

圖2 腺胃黏膜潰瘍、出血

圖3 十二指腸淋巴濾泡處腫脹

圖4 空腸淋巴濾泡處腫脹

圖5 輸卵管卡他性炎癥

圖6 卵泡充血、出血

2.1.2 組織病理學病變 腦膜充血、淋巴細胞浸潤，腦血管充血，血管周圍淋巴細胞袖套樣浸潤，神經(jīng)元變性、壞死，膠質細胞灶狀或彌漫性增生，并形成衛(wèi)星現(xiàn)象和噬神經(jīng)元現(xiàn)象，呈輕度病毒性腦炎病變。腸黏膜上皮細胞壞死、脫落，固有層充血、出血、水腫，淋巴濾泡內(nèi)淋巴細胞壞死、崩解。脾臟淋巴細胞廣泛性壞死、崩解。輸卵管黏膜上皮細胞變性、壞死，腺體上皮細胞變性、壞死。

2.2 血清學檢查

發(fā)病雞群A、B的HI試驗結果見表1、表2。2雞群發(fā)病后HI抗體效價均發(fā)生顯著升高，且離散度較大。

表1 發(fā)病雞群A新城疫抗體水平檢測結果

表2 發(fā)病雞群B新城疫抗體水平檢測結果

2.3 病毒分離鑒定

在病料接種后48-72h就發(fā)現(xiàn)有雞胚死亡，致死的雞胚，胚體全身充血、出血，以頭、翅和趾部尤為明顯。將死亡的雞胚的尿囊液收集，細菌檢查陰性，將雞胚尿囊液作紅細胞凝集試驗(HA)陽性，血凝價達8個滴度，與已知抗雞新城疫病毒的陽性血清進行血凝抑制試驗(HI)陽性，證明有新城疫病毒存在。

2.4 免疫組化檢測

在熒光顯微鏡下觀察，病雞的腎(圖7)、胰腺(圖8)和肝組織均見發(fā)翠綠色熒光的新城疫病毒感染細胞,陰性對照未見熒光(圖9)。

圖7 腎臟陽性

圖8 胰腺陽性

圖9 陰性對照

3 討論與結論

3.1 疾病診斷

兩發(fā)病群雞的臨床表現(xiàn)均有呼吸道癥狀、消化道癥狀及產(chǎn)蛋性能下降的非典型新城疫的基本癥狀；重癥病雞的胃腸道及呼吸道見出血性卡他性炎癥，卵泡充血、出血，輸卵管萎縮等剖檢病變，均符合新城疫的特征性剖檢病變；病毒性腦炎、淋巴組織壞死為具有證病意義的新城疫組織病變；發(fā)病后HI抗體檢測結果對新城疫的判定具有重要的證病意義；結合新城疫的病毒分離鑒定及免疫組學檢測的陽性結果，結合臨床癥狀、剖檢病變及實驗室檢測綜合判定兩“817”肉雞種母雞群所患疾病為非典型新城疫。

3.2 發(fā)病原因分析

3.2.1 病毒嚴重污染 “817”肉雜雞種母雞群養(yǎng)殖環(huán)境差，雞場被強毒新城疫病毒污染后，即使雞群有一定抗體水平，但難于抵抗強毒的侵襲而感染發(fā)病。

3.2.2 忽視局部免疫 新城疫免疫保護包括體液免疫和呼吸道局部黏膜免疫兩部分，兩者都要有足夠的免疫水平，才能有效防止新城疫的發(fā)生，其中呼吸道黏膜的局部免疫極為重要。但實踐中往往忽視呼吸道弱毒疫苗的免疫(滴眼、滴鼻、氣霧免疫)而偏重飲水免疫或滅活苗注射免疫，導致呼吸道黏膜抗體水平低而易通過呼吸道感染發(fā)病。

3.2.3 免疫抑制病干擾 若雞群早期發(fā)生過傳染性法氏囊病、網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞增殖病、白血病或傳染性貧血等免疫抑制性病毒性疾病，使免疫系統(tǒng)遭到嚴重破壞，產(chǎn)生免疫抑制。黃曲霉毒素中毒、球蟲病、慢性呼吸道病等一些慢性疾病，都可以使雞群免疫力下降，而導致免疫失敗。另外，使用毒力偏強的傳染傳染性法氏囊病疫苗，也可破壞機體的免疫功能，后期易發(fā)生非典型新城疫的發(fā)生。

3.2.4 其他因素 如雞體的營養(yǎng)狀態(tài)(如缺少某種營養(yǎng)成分)，開產(chǎn)、免疫接種、季節(jié)變換、天氣突然變化、高溫等應激誘發(fā)因素影響，免疫方法不合理(如飲水免疫的不均衡性)，飼養(yǎng)管理及衛(wèi)生狀況差等。受一種或多種因素的影響，雞體免疫力下降，群內(nèi)易感雞比例增高，新城疫強毒一旦入侵雞群，在雞群內(nèi)長期循環(huán)傳播，從而極易發(fā)生非典型的新城疫。

綜上所述，“817”肉雜雞產(chǎn)蛋種雞群發(fā)生非典型新城疫有病毒致病力強、污染重的因素，傳播途徑復雜、難以控制的因素，人工受精誘發(fā)，雞群抵抗力弱，應激因素多，其他病原感染等因素。所以，兩雞群的發(fā)病是眾多因素使然。只有采取綜合防制措施才能有效控制產(chǎn)蛋雞非典型新城疫的發(fā)生。

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（2012–09–19）

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