郝大林 石 宏 孔祥敏 (北華大學(xué)附屬醫(yī)院傳染科，吉林 吉林 132011)

病毒性肝炎肝細(xì)胞損傷及發(fā)生肝纖維化的病理機(jī)制十分復(fù)雜，細(xì)胞因子表達(dá)異常在其中的作用已受到眾多研究者的關(guān)注〔1〕。腫瘤壞死因子(TNF)-α在機(jī)體的炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。作為一種具有抗腫瘤、抗感染等多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，TNF-α可能參與了慢性肝病的病理發(fā)展過(guò)程〔2〕。瘦素(Leptin)是由肥胖基因編碼的一種蛋白質(zhì)產(chǎn)物，被發(fā)現(xiàn)與多種疾病密切相關(guān)。近年來(lái)研究資料顯示，肝病患者血清Leptin表達(dá)水平升高，可能與肝臟的炎癥、脂肪變、纖維化等可能有密切關(guān)系〔3〕。但TNF-α、Leptin在老年慢性肝病患者中的變化和意義尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究旨在探討TNF-α、Leptin在慢性肝病進(jìn)展過(guò)程中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2009年5月至2011年11月我院門(mén)診就診及住院治療的老年病毒性肝炎患者137例，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2000年9月中華醫(yī)學(xué)會(huì)、傳染病寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)、肝病分會(huì)聯(lián)合修訂的病毒性肝炎防治方案中慢性肝炎、肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔4〕，排除伴有心血管疾病、糖尿病、脂肪肝以及免疫系統(tǒng)疾病者。其中男性58例，女性79例;年齡60～74歲，平均年齡(65.9±3.2)歲;Child-Pugh分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：A級(jí)40例，B級(jí)43例，C級(jí)54例;慢性乙肝患者43例，慢性丙肝患者38例，肝炎肝硬化患者56例。另選擇同期健康體檢者40例為對(duì)照組，男17例，女23例，年齡60～71歲，平均年齡(64.5±3.6)歲，各組年齡、性別分布無(wú)顯著差異。

1.2 方法 均于清晨抽取空腹靜脈血5 ml，經(jīng)離心取血清，保存于－20℃冰箱統(tǒng)一檢測(cè)。采用雙抗體夾心法檢測(cè)血清TNF-α、Leptin的表達(dá)水平，TNF-α檢測(cè)試劑由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供，Leptin檢測(cè)試劑由美國(guó) Linco公司提供，酶標(biāo)儀為美國(guó)BEP2000型全自動(dòng)酶標(biāo)儀，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。采用放射免疫分析法測(cè)定透明質(zhì)酸(HA)、層黏蛋白(LN)、Ⅳ型前膠原(C-Ⅳ)、白蛋白(ALB)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，多個(gè)樣本均數(shù)之間的兩兩比較采用方差分析。兩組計(jì)量資料之間的相關(guān)性分析用直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 各組血清TNF-α、Leptin表達(dá)比較 肝硬化組血清TNF-α、Leptin表達(dá)明顯高于慢性乙型肝炎組、慢性丙型肝炎組和對(duì)照組(P＜0.05);慢性乙型肝炎組、慢性丙型肝炎組血清TNF-α、Leptin表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P＜0.05);慢性乙型肝炎組、慢性丙型肝炎組血清 TNF-α、Leptin水平差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 病毒性肝炎患者和對(duì)照組血清TNF-α、Leptin表達(dá)(s)

表1 病毒性肝炎患者和對(duì)照組血清TNF-α、Leptin表達(dá)(s)

與對(duì)照組相比：1)P＜0.05;與肝硬化組相比：2)P＜0.05

組別 n TNF-α(ng/ml)Leptin(ng/ml)40 0.52±0.15 2.58±1.16慢性乙肝組 43 1.34±0.241)2) 5.72±2.04慢性丙肝組 38 1.28±0.211)2) 5.58±2.13肝硬化組 56 3.65±1.681) 20.25±6.591)對(duì)照組

2.2 肝硬化患者血清 TNF-α、Leptin、HA、LN、C-Ⅳ、ALB 表達(dá)的相關(guān)性分析 肝硬化患者血清TNF-α(3.65±1.68)ng/ml、瘦素 (20.25 ±6.59)ng/ml、HA(215.42 ±51.27)ng/ml、LN(198.75 ± 92.46)ng/ml、C-Ⅳ (228.94 ± 84.58)ng/ml、ALB(28.45 ±4.28)g/L。TNF-α 水平與 HA、LN、、C-Ⅳ水平均呈正相關(guān)(r=0.447、0.546、0.681，P ＜0.05)，與血清 ALB 水平呈負(fù)相關(guān)(r= －0.398，P ＜0.05);Leptin水平與 HA、LN、C-Ⅳ水平均呈正相關(guān)(r=0.497、0.534、0.574，P ＜0.05)，與血清 ALB 水平呈負(fù)相關(guān)(r=－0.381，P＜0.05)。TNF-α與Leptin呈正相關(guān)(r=0.461，P ＜0.05)。

3 討論

TNF-α是由周圍血單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，作為一種肝細(xì)胞損傷因子，TNF-α能激活T、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核細(xì)胞，與肝細(xì)胞膜異常成分發(fā)生免疫應(yīng)答，進(jìn)而引發(fā)肝細(xì)胞壞死，肝功能改變。國(guó)外的研究表明〔5〕，TNF-α與肝病免疫病理反應(yīng)、導(dǎo)致肝臟功能受損密切相關(guān)，但其在老年慢性肝炎、肝炎后肝硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用目前尚不清楚。本研究提示TNF-α與慢性肝炎的發(fā)病有關(guān)，并隨肝炎病情發(fā)展、肝功能損害的加重而升高，可作為肝功能受損的指標(biāo)。

Leptin是由白色脂肪組織產(chǎn)生的一種脂肪細(xì)胞因子，對(duì)機(jī)體許多生理系統(tǒng)及代謝通路都有重要影響，通過(guò)多種組織及多種形式的受體而發(fā)揮廣泛的生物學(xué)效應(yīng)。近年來(lái)有關(guān)慢性肝病患者血清Leptin水平變化的研究日益增多，但Leptin與慢性肝病的關(guān)系尚有一定爭(zhēng)議。Testa等〔6〕的研究顯示病毒性肝炎及肝硬化患者的血清Leptin水平降低。丁百靜等〔7〕研究資料顯示肝硬化患者與正常人的血清瘦素水平無(wú)顯著差異。劉小紅等〔8〕研究認(rèn)為慢性乙型肝炎和肝硬化患者的血清Leptin水平明顯升高，可能與病毒感染、肝功能損害有關(guān)。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)〔9〕也為這一結(jié)論提供了有力的佐證。本研究說(shuō)明Leptin可能通過(guò)不同途徑、不同程度地參與了慢性肝病發(fā)生過(guò)程，并在其中起重要調(diào)節(jié)作用，但其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。

正常時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)HA、LN、C-Ⅳ在血清中含量很少，而發(fā)生肝纖維化時(shí)明顯增多。國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)〔10〕，血清HA、LN、C-Ⅳ的含量能很好地反映肝細(xì)胞損害和肝纖維化程度，被公認(rèn)為是臨床對(duì)肝纖維化和肝硬化非創(chuàng)傷性診斷的良好指標(biāo)。本研究說(shuō)明肝硬化患者血清TNF-α、Leptin水平與肝細(xì)胞損害和肝纖維化程度密切相關(guān)，提示TNF-α、Leptin可能是促肝纖維化的重要因子。因此，在慢性肝病的病情發(fā)展過(guò)程中，動(dòng)態(tài)測(cè)定患者血清TNF-α、Leptin水平將有利于臨床監(jiān)視病情，兩者可作為輔助評(píng)估肝硬化病情的參考指標(biāo)。

1 朱立娜，張旭譜，楊耀嫻，等.血清白介素-1、白介素-6、腫瘤壞死因子-α與慢性肝病的相關(guān)性研究〔J〕.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008;24(4)：341-3.

2 殷 濤.γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、堿性磷酸酶、腫瘤壞死因子檢測(cè)對(duì)肝癌、慢性肝病的診斷價(jià)值〔J〕.中國(guó)療養(yǎng)醫(yī)學(xué)，2010;1(1)：71.

3 柯 柳，溫小鳳.瘦素與胰島素抵抗在慢性肝病中的作用〔J〕.實(shí)用肝臟病雜志，2008;11(3)：209-11.

4 中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)分會(huì)、肝病學(xué)會(huì).病毒性肝炎防治方案〔J〕. 中華傳染病雜志，2001;19(1)：52-6.

5 Calabrese LH，Zein N，Vassilopoulos D.Safety of antitumour necrosis factor(anti-TNF)therapy in patients with chronic viral infections：hepatitis C，hepatitis B，and HIV infection〔J〕.Ann Rheum Dis，2004;63(2)：18-24.

6 Testa R，F(xiàn)ranceschini R，Giannini E，et al.Serum leptin levels in patients with viral chronic hepatitis or liver cirrhosis〔J〕.J Hepatol，2000;33(1)：33-7.

7 丁百靜，樸云峰，李傳鳳，等.肝硬化患者血清leptin水平測(cè)定及其臨床意義的探討〔J〕.臨床肝膽病雜志，2003;1(2)：72-3.

8 劉小紅，李延輝.慢性乙型肝炎、肝硬化患者血清leptin的測(cè)定及其與胰島素水平的相關(guān)性研究〔J〕.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2006;13(6)：1454-5.

9 Hajime H，Kenichi I，Miyoko H，et al.Leptin is required for fibrogenic responses induced by thioacetamide in the mufine liner〔J〕.Hepatology，2002;36：12-21.

10 王曉煥，史紅麗，保建強(qiáng).血清PCIII、HA與HBV-M聯(lián)合檢測(cè)對(duì)慢性肝病的診斷價(jià)值〔J〕.淮海醫(yī)藥，2009;27(4)：325-6.