楊文蓮，牛濤，傅春升，張紅艷，孫洪勝#

（1.泰安婦幼保健醫(yī)院，山東泰安2 7 1 0 0 0；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，濟(jì)南 2 5 0 0 1 1；3.山東中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科，濟(jì)南 2 5 0 0 0 1）

葛根素自微乳制劑的制備工藝研究Δ

楊文蓮1＊，牛濤2，傅春升2，張紅艷3，孫洪勝2#

（1.泰安婦幼保健醫(yī)院，山東泰安2 7 1 0 0 0；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，濟(jì)南 2 5 0 0 1 1；3.山東中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科，濟(jì)南 2 5 0 0 0 1）

目的：研究制備葛根素自微乳制劑。方法：根據(jù)葛根素的飽和溶解度選取油相、乳化劑和助乳化劑，通過偽三元相圖，以自乳化效率及成乳后粒徑為指標(biāo)，確定最佳處方。結(jié)果：最佳處方為油酸乙酯∶吐溫8 0/蓖麻油聚氧乙烯醚4 0（1∶2）∶聚乙二醇4 0 0∶葛根素∶三七總皂苷＝1 5∶3 5∶3 5∶6∶9；微乳的平均粒徑為3 2.9 nm。結(jié)論：加入三七總皂苷的葛根素自微乳粒徑小，穩(wěn)定性好，這為自微乳制劑的增效減毒提供了新的思路和途徑。

葛根素；自微乳給藥系統(tǒng)；三七總皂苷；偽三元相圖；減毒增效

葛根素是從豆科植物野葛、甘葛藤的干燥根中提取得到的一種異黃酮類化合物，其化學(xué)名為8-β-D葡萄吡喃糖-4′，7-二羥基異黃酮[1]。葛根素具有擴(kuò)張冠狀動脈、降低血壓、減慢心率等作用，在臨床上多用于心腦血管疾病的治療。但因其水溶性和脂溶性都較差，口服吸收少，生物利用度很低，限制了其在臨床中的使用。三七總皂苷（PNS）具有跟葛根素相似的藥理作用，且具有乳化劑作用。

自微乳化給藥系統(tǒng)（Self-Microemulsifying Drug Delivery System，SMEDDS）是由藥物、油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的混合物，在溫和攪拌或胃腸道運動下，在水性介質(zhì)中可形成粒徑＜1 0 0 nm的O/W型微乳，屬于微乳的濃縮液[2]。結(jié)合中醫(yī)藥理論和中藥使用經(jīng)驗，選用與葛根素有類似藥理作用的PNS作為乳化劑的一種，制備葛根素自微乳制劑，可減少乳化劑用量、降低乳化劑毒性、增加藥物藥效，達(dá)到增效減毒的作用。

1 儀器與試藥

8 5-2恒溫磁力攪拌器（江蘇金壇中大儀器廠）；6 0 C醫(yī)用低速離心機（安新縣白洋離心機廠）；U2 8 0 0紫外-可見分光光度計（日本東芝公司）；分析天平（奧豪斯國際貿(mào)易有限公司）；5 2 0 0 H超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司，功率：2 5 0 W，頻率：5 3 kHz）；HH·S2 1·6雙列六孔電熱恒溫水浴鍋（山東醫(yī)療器械廠）。

葛根素標(biāo)準(zhǔn)品（含量＞9 9%，安康禾燁麥迪森植物藥業(yè)有限公司）；油酸乙酯（上海千為油酯科技有限公司）；肉豆蔻酸異丙酯/十四酸異丙酯（IPM，杭州萬景材料有限公司）；辛癸酸甘油酯（O.D.O，河南正通化工有限公司）；蓖麻油聚氧乙烯醚4 0（Cremophor EL-4 0（以下簡稱EL-4 0），德國BASF公司）；購乙二醇辛基苯基醚（OP-1 0）、泊洛沙姆1 8 8、泊洛沙姆4 0 7，均購于美國Sigma公司；吐溫8 0（天津市天大化工實驗廠）；PNS（含量＞9 0%，云南植物藥業(yè)有限公司）；聚乙二醇4 0 0（PEG4 0 0，天津市科密歐化學(xué)試劑發(fā)展中心）；藥用甘油、異丙醇、乙醇等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外分析方法的建立

2.1.1 測定波長的選擇 稱取葛根素標(biāo)準(zhǔn)品適量，用3 0%的乙醇溶解并稀釋制成6 4 μg·mL－1的溶液，在2 0 0～4 0 0 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。同法將各種油相（油酸乙酯、O.D.O、IPM）和乳化劑（吐溫8 0、EL-4 0、OP-1 0、泊洛沙姆1 8 8、泊洛沙姆4 0 7），分別制成1 2 8 μg·mL－1的溶液，在2 0 0～4 0 0 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果，2 5 0 nm雖然為葛根素的最大吸收波長，但一些介質(zhì)如吐溫8 0在2 5 0nm波長處有一定的吸收，且所有介質(zhì)在3 0 7 nm波長處幾乎都沒有吸收，故選擇3 0 7 nm為測定波長。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取葛根素標(biāo)準(zhǔn)品1 0mg，用3 0%乙醇溶解并稀釋成濃度為4、8、1 6、3 2、6 4μg·mL－1的溶液，在3 0 7 nm波長處測定吸光度（A）。以A對檢測濃度（c）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A＝0.0 2 0 9 c－0.0 0 2 2（r＝0.9 9 9 9）。結(jié)果表明，葛根素檢測濃度在4～6 4 μg·mL－1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.2 溶解度的測定

2.2.1 葛根素在各種乳化劑和助乳化劑中的飽和溶解度 取吐溫8 0、EL-4 0、OP-1 0、泊洛沙姆1 8 8和泊洛沙姆4 0 7各種乳化劑的1 0%水溶液[3～5]各5 mL，PEG4 0 0、藥用甘油、異丙醇、乙醇各種助乳化劑各3 g，分別加入過量的葛根素，6 0℃水浴溶解1 h，3 7℃水浴靜置2 4 h，室溫平衡7 2 h，4 0 0 0 r·min－1離心1 5 min，取上清液用3 0%乙醇稀釋適宜倍數(shù)，3 0 7 nm波長處測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算溶解度，結(jié)果見表1。

2.2.2 葛根素在各種油相中的飽和溶解度 取油酸乙酯、

表1 葛根素在不同乳化劑中的飽和溶解度Tab 1 The saturation solubility of puerarin in different emulsifiers

表2 葛根素在不同油相中的飽和溶解度Tab 2 The saturation solubility of puerarin in different oil phases

2.3 不同油相與乳化劑的配伍變化

將3種油相與各種乳化劑（或按一定比例混合而成的混合乳化劑）分別以4∶6的比例在3 7℃水浴中磁力攪拌均勻，然后加入1 0 0倍量3 7℃保溫的蒸餾水，5 0 r·min－1磁力攪拌下微乳化，觀察其自乳化后的澄清度、自乳化完全的時間。每個組合各重復(fù)操作3次。將自乳化的情況分為5個級別：A級：迅速乳化，時間＜1min，澄清或微微泛藍(lán)；B級：迅速乳化，時間＜1 min，比A略濁，藍(lán)白；C級：時間＜2 min，外觀亮白，似奶狀液體；D級：乳化較慢，時間＞2 min，暗，灰白色，略帶油狀；E級：難乳化，無法形成均一體系，一直有油滴存在。不同乳化劑與油相的配伍試驗結(jié)果見表3。

表3 不同乳化劑與油相的配伍試驗結(jié)果（n＝3）Tab 3Results of different emulsifiers combined with oil phase（n＝3）

由表2、表3可知，油酸乙酯、IPM和不同乳化劑的混合物自乳化情況明顯好于O.D.O，且葛根素在油酸乙酯中的溶解度最大；從乳化劑類型看，吐溫8 0及吐溫8 0與EL-4 0按不同比例混合后得到的混合乳化劑與不同油相配伍后自乳化的情況較好；從自乳化系統(tǒng)對藥物的增溶作用、乳化劑的安全性、系統(tǒng)黏度和系統(tǒng)穩(wěn)定性等各方面考慮，選擇油酸乙酯作為油相，吐溫-8 0∶EL-4 0＝1∶2為混合乳化劑。

2.4 助乳化劑的選擇

試驗發(fā)現(xiàn)，乙醇與混合乳化劑合用，加入油相后澄清，但加水不能形成微乳，得到的是乳白色的普通乳劑；異丙醇與混合乳化劑合用，均在加入油相時即分層，加水后一直渾濁，不能形成微乳；藥用甘油和PEG4 0 0能夠形成澄清透明的微乳溶液，結(jié)合表1的結(jié)果，選擇PEG4 0 0為助乳化劑。

2.5 偽三元相圖的研究

在干燥潔凈的燒杯中，分別精密稱取油相與混合乳化劑，按1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、4∶6、7∶3、8∶2、9∶1的比例混合，兩者的重量比記為Km，逐滴加入水，攪拌混勻，繪制偽三元相圖（見圖1）。采用肉眼觀察進(jìn)行判斷，將能形成澄清或帶有少許乳光的溶液的處方點確定為相圖中可形成微乳的區(qū)域點（不包含水相邊線）。圖中陰影區(qū)為微乳區(qū)，各微乳區(qū)均延伸到水相頂點，即可被水無限稀釋，當(dāng)Km＝1時形成微乳的區(qū)域最大，故選擇Km＝1。

圖1 偽三元相圖A.Km=8:2；B.Km=7:3；C.Km=6:4；D.Km=5:5；E.Km=4:6；F.Km=3:7；G.Km=2:8Fig 1 Pseudo-ternary phase diagrams A.Km=8:2；B.Km=7:3；C.Km=6:4；D.Km=5:5；E.Km=4:6；F.Km=3:7；G.Km=2:8

2.6 處方的確定

在Km＝1的基礎(chǔ)上設(shè)定5個處方，按處方比例精密稱定各相。3 7℃、4 0 0r·min－1磁力攪拌，混勻，分別制得空白SMEDDS（處方Ⅰ）、不含PNS的葛根素SMEDDS（處方Ⅱ、Ⅲ）和含PNS的葛根素SMEDDS（處方Ⅳ、Ⅴ），加入1 0 0倍量3 7℃保溫的蒸餾水，5 0 r·min－1磁力攪拌下微乳化。觀察其自乳化后的澄清度、自乳化完全的時間、乳化后粒徑，確定最佳處方，詳見表4。

由表4可知，處方Ⅰ粒徑最小，在含葛根素的處方中處方Ⅱ粒徑最小，處方Ⅲ次之，處方Ⅴ粒徑最大，而乳化劑的含量為處方Ⅳ和處方Ⅴ最低。處方Ⅰ的自乳化時間最短，處方Ⅴ的時間最長，除處方Ⅴ外，其余處方自乳化完全的時間均＜1 min，即自乳化效率相差不大，綜合考慮自乳化后的粒徑和澄清度等因素，選處方Ⅳ作為最佳處方。

表4 葛根素自微乳處方Tab 4 Formulation for Puerarin SMEDDS

3 討論

根據(jù)葛根素在各種介質(zhì)中的溶解度，筆者考察了2種乳化劑的混合使用及混合乳化劑與不同油相的配伍變化，綜合考慮自乳化系統(tǒng)對藥物的增溶作用、乳化劑的安全性、系統(tǒng)黏度和系統(tǒng)穩(wěn)定性等各方面因素，最終選擇油酸乙酯作為油相，吐溫8 0∶EL-4 0＝1∶2為混合乳化劑，PEG4 0 0為助乳化劑。本試驗在處方篩選的過程中，均盡可能采用3 7℃的條件，以期能更好的模擬體內(nèi)微乳劑自發(fā)形成的實際情況。

通過偽三元相圖考察了加入不同比例的助乳化劑對微乳形成區(qū)域的影響。結(jié)果，在一定濃度范圍內(nèi)，隨著助乳化劑加入量的增多，形成自微乳的區(qū)域逐漸增大，但助乳化劑超過一定量后，使乳化劑比例降低太多，減弱了對體系的乳化能力，反而使形成自微乳的區(qū)域減小。由偽三元相圖可知，當(dāng)Km＝1時，形成微乳的區(qū)域最大。

在相圖研究的基礎(chǔ)上，設(shè)定了幾個含藥處方，通過綜合考慮自微乳化后的澄清度、自微乳化完全時間長短以及自微乳后粒徑的大小，確定最佳處方比例為油酸乙酯∶吐溫8 0/EL-4 0（1∶2）∶PEG4 0 0∶葛根素∶PNS＝1 5∶3 5∶3 5∶6∶9。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2 0 1 0年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2 0 1 0：9 2 5.

[2] Wu W，Wang Y，Que L.Enhanced bioavaiability of silymarin by self-microemulsifying drug delivery system[J].Eur J Pharm Biopharm，2 0 0 6，6 3（3）：2 8 8.

[3] Kim HJ，Yoon KA，Hahn M，et al.Preparation and in vitro evaluation of self-microemulsifying drug delivery systems containing idebenone[J].Drug Dev Ind Pharm，2 0 0 0，2 6（5）：5 2 3.

[4]Kommuru TR，Gurley B，Khan MA，et al.Self-emulsifying drug delivery systems（SEDDS）of coenzyme Q1 0：formulation，development and bioavailability assessment[J].Int J Pharm，2 0 0 1，2 1 2（1）：2 3 3.

[5] Park KM，Kim CK.Preparation and evaluation of flurbiprofen-loaded microemulaion for parenteral deliery[J].Int J Pharm，1 9 9 9，1 8 1（2）：1 7 3.

Study on the Preparation Technology of Puerarin Self-microemulsfying Delivery System

YANG Wen-lian（Tai’an Maternal and Child Care Service Centre，Shandong Tai’an 2 7 1 0 0 0，China）
NIU Tao，F(xiàn)U Chun-sheng，SUN Hong-sheng（Dept.of Pharmacy，The Affiliated Hospital of Shandong University of TCM，Jinan 2 5 0 0 1 1，China）
ZHANG Hong-yan（Dept.of Pharmacy，The Second Affiliated Hospital of Shandong University of TCM，Jinan 2 5 0 0 0 1，China）

OBJECTIVE：To study on the preparation of Puerarin self-microemulsifying drug delivery system（SMEDDS）.METHODS：The oil phase，emulsifier and auxiliary emulsifier were selected according to the saturation solubility of puerarin.The optimal formulation was determined by pseudo-ternary phase diagram using self-emulsifying efficiency and the emulsion particle size as the index.RESULTS：The optimal formulation was ethyl oleate∶Tween-8 0/EL-4 0（1∶2）∶PEG 4 0 0∶puerarin∶PNS＝1 5∶3 5∶3 5∶6∶9.The average diameter was 3 2.9nm.CONCLUSION：Puerarin SMEDDS added into Panax pseudoginseng total saponins has small particle size and sound stability，which provides new idea and channel for efficacy-increasing and toxicity-reducing of SMEDDS prepration.

Puerarin；Self-microemulsifying drug delivery system；Panax pseudoginseng total saponins；Pseudo-ternary phase diagram；Efficacy-increasing and toxicity-reducin

R2 8 4.2；R2 8 3.6 9

A

1 0 0 1-0 4 0 8（2 0 1 2）1 5-1 3 7 5-0 3

DOI1 0.6 0 3 9/j.issn.1 0 0 1-0 4 0 8.2 0 1 2.1 5.1 2

2 0 1 1-0 2-1 3

2 0 1 1-0 6-0 1）