孫友文 宣 強 肖 俊 周林玉 諸禹平

Survivin是近來新發(fā)現的凋亡抑制蛋白家族的一員，為迄今發(fā)現的作用最強的凋亡抑制因子［1］。研究表明，Survivin與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。本研究對膀胱移行細胞癌(bladder transitional cell carcinoma，BTCC)組織中Survivin表達情況進行了檢測，探討了Survivin表達與BTCC病理分級、臨床分期、淋巴結轉移、復發(fā)等之間的關系，以期對BTCC的早期診治、轉移復發(fā)的監(jiān)測和預后判斷提供依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

所有實驗標本均為本院2009年1月～2010年12月經病理學檢查證實的BTCC組織石蠟包埋標本，共68例。男性41例，女性27例。患者年齡42～81歲，平均60.8歲。病理分級按WHO分級標準:Ⅰ級24例，Ⅱ級30例，Ⅲ級14例;臨床分期按UICC-TNM標準:淺表型38例(Ta期16例，T1期22例)，浸潤型30例(T2期19例，T3期11例);初發(fā)腫瘤40例，復發(fā)腫瘤28例;淋巴結陽性者17例，陰性者51例。另取10例非BTCC患者的正常膀胱黏膜組織作為對照組。

1.2 Survivin表達的檢測

采用免疫組織化學SP法，SP試劑盒購于北京中山生物技術有限公司，用兔抗人Survivin多克隆抗體檢測Survivin的表達，嚴格按照說明書進行操作。已知陽性膀胱移行細胞癌切片作為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定

Survivin表達陽性結果判定標準:細胞胞質出現黃至棕黃色顆粒為陽性細胞，組織切片于400倍鏡下計數500個細胞，陽性細胞占比≥10%為陽性片，＜10%為陰性片。

1.4 統計學方法

采用SPSS10.0統計學軟件。計數資料及組間率的比較采用χ2檢驗，相關分析采用Spear-man等級分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 BTCC組和正常對照組Survivin的表達結果

10例正常膀胱黏膜組織中未見Survivin表達，陽性表達率為0%;而68例BTCC組織中有49例Survivin表達陽性，陽性率為72.1%，2組間差異有統計學意義(P ＜0.05)。

2.2 Survivin表達與BTCC臨床病理特征的關系

BTCC組織中Survivin陽性表達率隨著病理分級的增高而升高，兩者之間顯著正相關，Ⅰ級分別與Ⅱ級、Ⅲ級比較，Survivin陽性表達率差異有統計學意義(γ =0.402，P ＜0.05)。淺表型與浸潤型、初發(fā)與復發(fā)、淋巴結轉移陽性與陰性等組之間Survivin陽性表達率差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 Survivin表達與BTCC臨床病例特征的關系(例，%)

3 討論

膀胱癌是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，其中90%以上來自膀胱黏膜移行細胞。膀胱移行細胞癌(BTCC)具有復發(fā)率較高的特點，而且部分腫瘤復發(fā)后惡性程度增高，浸潤和轉移等惡性行為增強，治療比較棘手，效果不滿意。因此，研究膀胱移行細胞癌的發(fā)生、發(fā)展機制，尋找與其發(fā)生、發(fā)展密切有關，并且能夠有效預測其生物學行為的分子指標，對BTCC的診治和預后判斷具有重要意義。Survivin是1997年耶魯大學的Ambrosini等在研究效應細胞蛋白酶受體時發(fā)現的［1］。它是1種新的凋亡抑制基因，是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的一員，抑制凋亡的作用最強。研究表明，Survivin具有抑制細胞凋亡，調節(jié)細胞有絲分裂和參與血管生成等多重作用［2］。Survivin的表達分布具有明顯的組織細胞選擇性，在正常成人體內除胸腺、生殖腺中有微量表達外，所有分化成熟的組織中均無表達［3］。Survivin的表達還具有細胞周期性，只在細胞周期的 G2/M 期表達［4］。

人們隨著對惡性腫瘤、細胞凋亡研究的逐步深入，認為腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細胞凋亡的抑制有密切關系［5］。研究表明，Survivin作為作用最強的凋亡抑制因子，在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，包括膀胱癌在內的大多數惡性腫瘤組織中均存在Survivin顯著表達［6］，如胃癌、卵巢癌、膀胱癌、鼻咽癌［7］等。本研究結果顯示，10例正常膀胱黏膜組織中未見Survivin表達，而68例BTCC組織中Survivin表達陽性率為72.1%，顯著高于正常組(P ＜0.05)，提示 Survivin在BTCC組織中的表達顯著上調。其機制可能是BTCC組織中，Survivin在轉錄水平被 NF-KB、AKT、SAST-3等因子上調，導致轉錄、翻譯的蛋白產物增多。Survivin表達上調抑制了異常突變細胞的凋亡，從而擾亂了細胞的正常生長和凋亡途徑，促使異常突變細胞逃離監(jiān)控，對BTCC的發(fā)生發(fā)展起一定的促進作用。

Survivin的表達強度與BTCC的病理分級、臨床分期之間的相關性，不同文獻報道不盡一致。本研究表明，Survivin的陽性表達率與BTCC的病理分級、臨床分期密切相關。隨著BTCC病理分級和臨床分期的增高，Survivin的陽性表達率也逐漸升高;Ⅰ級分別與Ⅱ級、Ⅲ級比較及淺表型與浸潤型比較，均存在顯著性差異(P＜0.05)，前者均顯著低于后者。由于Survivin特異的表達于細胞周期的G2/M期，在此期內通過與細胞有絲分裂紡錘體的微管結合，參與對細胞基因的轉錄調節(jié)，使腫瘤細胞異常增殖和分化程度降低［8］。另有研究表明，Survivin還參與新生血管的生成。Survivin高表達主要是促進血管內皮生長因子誘導的內皮細胞增殖和三維毛細血管網的形成［9］。腫瘤的生成和發(fā)展依賴于新生血管的生成，新生血管的生成是腫瘤細胞生長、侵襲、轉移的必要條件之一。本研究中，淋巴結轉移陽性的BTCC組織中Survivin陽性表達率顯著高于淋巴結轉移陰性者(P＜0.05)，提示Survivin表達與BTCC的淋巴結轉移密切相關。Survivin可能通過參與腫瘤新生血管的形成調節(jié)在腫瘤轉移過程中發(fā)揮作用。本研究結果還顯示，復發(fā)性BTCC的Survivin陽性表達率顯著高于初發(fā)者(P＜0.05)，提示Survivin表達與BTCC的復發(fā)也存在密切關系;可能與BTCC復發(fā)后病理分級、臨床分期會增高有關。

本研究表明，Survivin陽性表達率隨著BTCC組織病理分級的增高，臨床分級的增加，淋巴結轉移陽性和復發(fā)等惡性行為的發(fā)生而明顯升高，與文獻報道基本一致［10］。Survivin陽性表達率越高，預示 BTCC可能有較高的惡性度和侵襲性，較易發(fā)生轉移和復發(fā)，而且預后不良。因此，Survivin可以作為判斷BTCC發(fā)生發(fā)展、轉移、復發(fā)及預后情況的指標之一。通過分子靶向治療手段抑制腫瘤組織中Survivin表達而促使腫瘤細胞凋亡可能是臨床治療BTCC的1個新方向。

［1］Ambrosini G，Adida C，Altieri DC.A novel anti-apoptosis gene，survivin，expressed in cancer and lymphoma〔J〕.Nat Med，1997，3(8):917.

［2］Zhu H，Chen XP，Zhang WG，et al.Expression and significance of new inhibitor of apoptosis protein survivin in hepato cellular carcinoma〔J〕.World J Gastroenterol，2005，11(25):3855.

［3］Lehner R，Lucis MS，Jarboc EM，et al.Immunohistochemical localization of the IAP protein survivin in bladder mucosa and transitional cell carcinoma〔J〕.Appl Immunohistochem Molmrphol，2002，10(2):134.

［4］Warnecke-Eberz U，Hokita S，Xi H，et al.Overexpression of survivin mRNA is associated with a favorable prognosis following neoadjuvant radiochemotherapy in esophageal cancer〔J〕.Oncol Rep，2005，13(6):1241.

［5］Dohi T，Okada K，Xia F，et al.An IAP-IAP complex inhibitor apoptosis〔J〕.J Biol Chem，2004，279(33):34087.

［6］Kirkai Z，Chan T，Manoharan M，et al.Bladder cancer:epidemiology，staging and grading，ang diagnosis〔J〕.Urology，2005，66(6Suppl1):4.

［7］黃東海，范青松，田勇泉，等.鼻咽癌組織中Survivin、bcl-2和p53蛋白的表達及相關性〔J〕.實用癌癥雜志，2004，19(6):585.

［8］Bao R，Connolly DC，Murphy M，et al.Activation of cancer gene specific gene expression by the surviving promoter〔J〕.J Natl Cancer Inst，2002，94(7):5.

［9］Mesri M，Mbrales RM，Ackemann EJ，et al.Suppression of vascular endothelial growth factor mediated endothelial cell protection by surviving targeting〔J〕.Am J Pathol，2001，158(5):1757.

［10］袁源湖，劉佛林，邵曉峰，等.凋亡抑制基因存活素在膀胱癌組織中的表達及意義〔J〕.實用癌癥雜志，2007，22(6):574.