孫友文 宣 強(qiáng) 肖 俊 周林玉 諸禹平

Survivin是近來(lái)新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族的一員，為迄今發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子［1］。研究表明，Survivin與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究對(duì)膀胱移行細(xì)胞癌(bladder transitional cell carcinoma，BTCC)組織中Survivin表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，探討了Survivin表達(dá)與BTCC病理分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等之間的關(guān)系，以期對(duì)BTCC的早期診治、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

所有實(shí)驗(yàn)標(biāo)本均為本院2009年1月～2010年12月經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)的BTCC組織石蠟包埋標(biāo)本，共68例。男性41例，女性27例?；颊吣挲g42～81歲，平均60.8歲。病理分級(jí)按WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ級(jí)24例，Ⅱ級(jí)30例，Ⅲ級(jí)14例;臨床分期按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn):淺表型38例(Ta期16例，T1期22例)，浸潤(rùn)型30例(T2期19例，T3期11例);初發(fā)腫瘤40例，復(fù)發(fā)腫瘤28例;淋巴結(jié)陽(yáng)性者17例，陰性者51例。另取10例非BTCC患者的正常膀胱黏膜組織作為對(duì)照組。

1.2 Survivin表達(dá)的檢測(cè)

采用免疫組織化學(xué)SP法，SP試劑盒購(gòu)于北京中山生物技術(shù)有限公司，用兔抗人Survivin多克隆抗體檢測(cè)Survivin的表達(dá)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。已知陽(yáng)性膀胱移行細(xì)胞癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

Survivin表達(dá)陽(yáng)性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)黃至棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，組織切片于400倍鏡下計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞占比≥10%為陽(yáng)性片，＜10%為陰性片。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)數(shù)資料及組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spear-man等級(jí)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BTCC組和正常對(duì)照組Survivin的表達(dá)結(jié)果

10例正常膀胱黏膜組織中未見Survivin表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為0%;而68例BTCC組織中有49例Survivin表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為72.1%，2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。

2.2 Survivin表達(dá)與BTCC臨床病理特征的關(guān)系

BTCC組織中Survivin陽(yáng)性表達(dá)率隨著病理分級(jí)的增高而升高，兩者之間顯著正相關(guān)，Ⅰ級(jí)分別與Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)比較，Survivin陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(γ =0.402，P ＜0.05)。淺表型與浸潤(rùn)型、初發(fā)與復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性與陰性等組之間Survivin陽(yáng)性表達(dá)率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 Survivin表達(dá)與BTCC臨床病例特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其中90%以上來(lái)自膀胱黏膜移行細(xì)胞。膀胱移行細(xì)胞癌(BTCC)具有復(fù)發(fā)率較高的特點(diǎn)，而且部分腫瘤復(fù)發(fā)后惡性程度增高，浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等惡性行為增強(qiáng)，治療比較棘手，效果不滿意。因此，研究膀胱移行細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，尋找與其發(fā)生、發(fā)展密切有關(guān)，并且能夠有效預(yù)測(cè)其生物學(xué)行為的分子指標(biāo)，對(duì)BTCC的診治和預(yù)后判斷具有重要意義。Survivin是1997年耶魯大學(xué)的Ambrosini等在研究效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體時(shí)發(fā)現(xiàn)的［1］。它是1種新的凋亡抑制基因，是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的一員，抑制凋亡的作用最強(qiáng)。研究表明，Survivin具有抑制細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂和參與血管生成等多重作用［2］。Survivin的表達(dá)分布具有明顯的組織細(xì)胞選擇性，在正常成人體內(nèi)除胸腺、生殖腺中有微量表達(dá)外，所有分化成熟的組織中均無(wú)表達(dá)［3］。Survivin的表達(dá)還具有細(xì)胞周期性，只在細(xì)胞周期的 G2/M 期表達(dá)［4］。

人們隨著對(duì)惡性腫瘤、細(xì)胞凋亡研究的逐步深入，認(rèn)為腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞凋亡的抑制有密切關(guān)系［5］。研究表明，Survivin作為作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子，在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，包括膀胱癌在內(nèi)的大多數(shù)惡性腫瘤組織中均存在Survivin顯著表達(dá)［6］，如胃癌、卵巢癌、膀胱癌、鼻咽癌［7］等。本研究結(jié)果顯示，10例正常膀胱黏膜組織中未見Survivin表達(dá)，而68例BTCC組織中Survivin表達(dá)陽(yáng)性率為72.1%，顯著高于正常組(P ＜0.05)，提示 Survivin在BTCC組織中的表達(dá)顯著上調(diào)。其機(jī)制可能是BTCC組織中，Survivin在轉(zhuǎn)錄水平被 NF-KB、AKT、SAST-3等因子上調(diào)，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄、翻譯的蛋白產(chǎn)物增多。Survivin表達(dá)上調(diào)抑制了異常突變細(xì)胞的凋亡，從而擾亂了細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和凋亡途徑，促使異常突變細(xì)胞逃離監(jiān)控，對(duì)BTCC的發(fā)生發(fā)展起一定的促進(jìn)作用。

Survivin的表達(dá)強(qiáng)度與BTCC的病理分級(jí)、臨床分期之間的相關(guān)性，不同文獻(xiàn)報(bào)道不盡一致。本研究表明，Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率與BTCC的病理分級(jí)、臨床分期密切相關(guān)。隨著BTCC病理分級(jí)和臨床分期的增高，Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸升高;Ⅰ級(jí)分別與Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)比較及淺表型與浸潤(rùn)型比較，均存在顯著性差異(P＜0.05)，前者均顯著低于后者。由于Survivin特異的表達(dá)于細(xì)胞周期的G2/M期，在此期內(nèi)通過(guò)與細(xì)胞有絲分裂紡錘體的微管結(jié)合，參與對(duì)細(xì)胞基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，使腫瘤細(xì)胞異常增殖和分化程度降低［8］。另有研究表明，Survivin還參與新生血管的生成。Survivin高表達(dá)主要是促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖和三維毛細(xì)血管網(wǎng)的形成［9］。腫瘤的生成和發(fā)展依賴于新生血管的生成，新生血管的生成是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移的必要條件之一。本研究中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的BTCC組織中Survivin陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者(P＜0.05)，提示Survivin表達(dá)與BTCC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Survivin可能通過(guò)參與腫瘤新生血管的形成調(diào)節(jié)在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮作用。本研究結(jié)果還顯示，復(fù)發(fā)性BTCC的Survivin陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于初發(fā)者(P＜0.05)，提示Survivin表達(dá)與BTCC的復(fù)發(fā)也存在密切關(guān)系;可能與BTCC復(fù)發(fā)后病理分級(jí)、臨床分期會(huì)增高有關(guān)。

本研究表明，Survivin陽(yáng)性表達(dá)率隨著BTCC組織病理分級(jí)的增高，臨床分級(jí)的增加，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性和復(fù)發(fā)等惡性行為的發(fā)生而明顯升高，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［10］。Survivin陽(yáng)性表達(dá)率越高，預(yù)示 BTCC可能有較高的惡性度和侵襲性，較易發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，而且預(yù)后不良。因此，Survivin可以作為判斷BTCC發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后情況的指標(biāo)之一。通過(guò)分子靶向治療手段抑制腫瘤組織中Survivin表達(dá)而促使腫瘤細(xì)胞凋亡可能是臨床治療BTCC的1個(gè)新方向。

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