孫 偉，叢曉麗，李一鳴，張堅(jiān)杯

（杭州民生濱江制藥有限公司 質(zhì)量部，浙江 杭州 310000）

托吡酯片含活性成分托吡酯，其化學(xué)名稱為2，3：4，5－雙－0－（1－甲基亞乙基）－β－D 吡喃果糖氨基磺酸酯，分子式為C12H21NO8S，分子量為339.36。托吡酯為廣譜抗癲癇新藥，對(duì)各類癲癇發(fā)作均有效，對(duì)肌陣攣、嬰兒痙攣也有效。如今，制劑成品中存在的雜質(zhì)的控制越來(lái)越受到大家的重視，本文對(duì)托吡酯片生產(chǎn)或存放過(guò)程中新產(chǎn)生或增加的降解產(chǎn)物進(jìn)行分析研究，從而能更有效地控制藥品的質(zhì)量。

1 材料與溶液制備

1.1 藥品與試劑

托吡酯標(biāo)準(zhǔn)品，托吡酯雜質(zhì)2標(biāo)準(zhǔn)品，托吡酯片，乙腈。

1.2 儀器

Waters2695高效液相色譜儀；Waters2414示差折光檢測(cè)器；電子天平：XS105DU。

1.3 溶液制備

1.3.1 流動(dòng)相

量取乙腈和超純水各500mL（50∶50），混勻，超聲脫氣。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)貯備液

稱取25mgTop－imp－2和10mg的托吡酯RS到50mL的容量瓶中，加入流動(dòng)相適量，超聲使溶解，再用流動(dòng)相稀釋至刻度。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液

移取5.0mL上述貯備液到25mL的量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.3.4 分離度（SS）溶液

稱取托吡酯API200mg置于10mL的量瓶中，吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液5.0mL、流動(dòng)相2.0mL，超聲溶解，再用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

1.3.5 樣品溶液

取不少于20片樣品，稱重，磨成細(xì)粉。精密稱定適量樣品粉末（相當(dāng)于500mg托吡酯）至25mL量瓶中，加入20mL流動(dòng)相，超聲10min，隨后振搖30min。再用流動(dòng)相稀釋至刻度并混勻，用0.45μm尼龍濾膜過(guò)濾，棄去初濾液3mL，收集續(xù)濾液。

1.4 色譜條件及系統(tǒng)適用性

流速：1.2mL／min ；柱溫：35℃ ；進(jìn)樣量20μL。取 SS溶液進(jìn)樣，Top－imp－2的相對(duì)于托吡酯的保留時(shí)間為0.90，與托吡酯的分離度不小于1.0。連續(xù)6次標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，Top－imp－2和托吡酯的峰面積相應(yīng)的RSD不大于5.0%。

2 方法與結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

分離度（SS）溶液進(jìn)樣所得圖譜中Top－imp－2的保留時(shí)間為7.443，相對(duì)保留時(shí)間為0.90，Top－imp－2與托吡酯的分離度（R）為2.2＞1.0。連續(xù)進(jìn)6針的標(biāo)準(zhǔn)溶液中Topimp－2的峰響應(yīng)的RSD為0.9%＜5.0%，托吡酯峰響應(yīng)的RSD為1.1%＜5.0%，符合規(guī)定。SS溶液色譜見(jiàn)圖1。

圖1 SS溶液進(jìn)樣色譜

2.2 Top－imp－2的線性范圍

分別配制Top－imp－2的濃度為10、20、30、50、100、150μg／mL的溶液，進(jìn)樣測(cè)試，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。故線性范圍為10～150μg／mL。線性表見(jiàn)圖2。

圖2 托吡酯雜質(zhì)2定量線性范圍

2.3 Top－imp－2的測(cè)定定量限

配制托吡酯雜質(zhì)2濃度為10μg／mL的溶液，重復(fù)6次進(jìn)樣所得Top－imp－2的峰面積的RSD為2.9%。

2.4 精密度試驗(yàn)

配制三個(gè)濃度水平（10%，100%，150%）每個(gè)水平3份的摻有托吡酯雜質(zhì)2的托吡酯片樣品溶液，測(cè)試得到托吡酯雜質(zhì)2的平均回收率為101.1%。見(jiàn)表1。

2.5 專屬性考察

考察藥品在各種強(qiáng)化條件下如加熱、加熱／高濕、光照、酸、堿、氧化劑破壞下的降解情況，評(píng)估分析方法對(duì)可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物的分析能力以及藥片空白輔料對(duì)降解產(chǎn)物測(cè)試的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：空白輔料對(duì)測(cè)試沒(méi)有干擾，該藥品在加熱、加熱／高濕、光照、堿、氧化劑強(qiáng)化條件下均比較穩(wěn)定，未產(chǎn)生新的降解產(chǎn)物；而在酸破壞下托吡酯雜質(zhì)2沒(méi)有顯著的增加趨勢(shì)，卻出現(xiàn)了兩個(gè)未知雜質(zhì)，保留時(shí)間分別為4.983min和5.869min，與 Top－imp－2及主峰能夠有較好的分離。見(jiàn)圖3。

表1 托吡酯雜質(zhì)2（Top－imp－2）測(cè)試的回收率

圖3 酸破壞樣品降解產(chǎn)物色譜

2.6 耐用性

耐用性主要是考察該方法是否能夠承受某些參數(shù)輕微的變動(dòng)，如HPLC系統(tǒng)參數(shù)以及樣品溶液制備時(shí)參數(shù)改變。本試驗(yàn)按表2設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)。

表2 耐用性試驗(yàn)條件

HPLC系統(tǒng)的參數(shù)的輕微改變對(duì)系統(tǒng)適用性沒(méi)有影響，Top－imp－2的相對(duì)保留時(shí)間為0.90，Top－imp－2與托吡酯的分離度（R）均＞1.0。樣品溶液制備時(shí)的參數(shù)的改變對(duì)降解產(chǎn)物的測(cè)定沒(méi)有影響，沒(méi)有雜質(zhì)的峰的出現(xiàn)或消失，各種條件下雜質(zhì)概況一致。

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)藥片進(jìn)行系統(tǒng)適用性、線性、定量限、精密度、專屬性、耐用性項(xiàng)目的研究分析，認(rèn)為該方法穩(wěn)定可靠，具有良好的準(zhǔn)確度、專屬性和耐用性，方法靈敏度高，能夠用于降解產(chǎn)物的定量檢測(cè)。