易英豪，史會杰，杜晟楠，吳 琪，王友群

（中國藥科大學(xué) 藥理研究室，江蘇 南京210009）

腺嘌呤誘發(fā)小鼠慢性腎衰（CRF），表現(xiàn)為血中BUN和Cr升高，電解質(zhì)紊亂，營養(yǎng)不良，腎實質(zhì)損害、腎小管結(jié)晶沉積等，與臨床CRF患者極為相似。中醫(yī)認(rèn)為CRF發(fā)病機(jī)理內(nèi)因主要是脾腎陽虛［1，2］。附子有回陽救逆、補(bǔ)火助陽之功效，主治陽虛陰盛之證；硫磺內(nèi)服補(bǔ)火助陽通便，張錫純善用生硫磺治陽虛，認(rèn)為其效捷而無附子之升發(fā)之弊［3］。干姜具有溫中散寒、回陽通脈等功效。本實驗考察附子和硫磺及其配伍干姜對CRF小鼠腎功能的保護(hù)作用，詳述如下。

1 材料

1.1 藥品與試劑

腺嘌呤（批號9905078，上海博蘊有限公司）；硫磺（批號20101101，南京晚晴有限公司）；川附子，干姜購自南京先聲大藥房。Cr等試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

1.2 動物與儀器

雄性清潔級小鼠100只，體重（25±2）g，購自南京青龍山動物繁殖廠，合格證號SCXK（蘇）2007－0001。

721型分光光度計（上海第三分析儀器廠）；0412－1型低速離心機(jī)（上海醫(yī)療器械集團(tuán)）；BS－110－S型電子天平（北京賽多利斯公司）。

2 方法

2.1 實驗藥物

取附子100g，加1 000mL水，煮沸60min，過濾，濾渣再加800mL水以相同方法煮沸、過濾，合并兩次濾液，濃縮至200mL，即附子水煎劑（0.5g／mL）；取附子和干姜各100g，以同法得到附子干姜水煎液。將1g硫磺溶于100mL 0.5%羧甲基纖維素鈉中，即0.01g／mL硫磺懸濁液。

2.2 動物分組及給藥方案

將小鼠隨機(jī)分為五組：對照組、模型組、硫磺附子組、附子干姜組和硫磺附子干姜組。按照Yokozawa T等［4］曾報道的方法，后四組小鼠灌胃給予腺嘌呤（第1周和第2～4周劑量分別為250和130mg／kg，每2天給藥1次）。從第2周起SF、FG和SFG組小鼠再對應(yīng)給予“2.1”項下制備的附子水煎劑（5g／kg），附子干姜水煎劑和硫磺懸濁液（0.1g／kg），每10g體重0.1mL，共4周。

2.3 考察指標(biāo)

（1）動物一般情況：觀察小鼠活動情況，每2天記錄1次體重、攝食量、飲水量。

（2）生化指標(biāo)：第4周末，眼球取血，測定血清Cr、BUN；取右側(cè)腎臟和睪丸稱重，計算腎系數(shù)（腎質(zhì)量／體重）和睪丸系數(shù)（睪丸質(zhì)量／體重）；測定腎組織GSH、MDA和γ－GT含量。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用t檢驗分析數(shù)據(jù)，結(jié)果以方差表示。

3 結(jié)果

3.1 動物一般情況

與C組相比，M組小鼠體重下降，攝食量減少，飲水量升高，反應(yīng)遲鈍；各治療組小鼠狀態(tài)較模型組有好轉(zhuǎn)，飲食稍增，但與模型組體重及攝食變化均無顯著性差異。

3.2 腎系數(shù)、睪丸系數(shù)、血清肌酐和尿素氮變化

在第4周末，從每組隨機(jī)抽取8只小鼠進(jìn)行指標(biāo)測定。與C組相比，M組小鼠腎系數(shù)顯著升高。與M組相比，SF、FG和SFG組小鼠腎系數(shù)顯著降低（P＜0.05）。各組睪丸系數(shù)無顯著性差異。M組小鼠血清Cr、BUN均顯著高于對照組；FG組Cr顯著低于M組；三個給藥組BUN均顯著低于模型組，見表1。

表1 腎系數(shù)、睪丸系數(shù)、血清肌酐和尿素氮測定結(jié)果（s，n＝8）

表1 腎系數(shù)、睪丸系數(shù)、血清肌酐和尿素氮測定結(jié)果（s，n＝8）

注：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001，與 C組比較；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01，＃＃＃P＜0.001，與 M 組比較。

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3.3 腎組織生化指標(biāo)變化

肉眼觀察C組小鼠腎臟呈蠶豆樣，質(zhì)地柔軟表面光滑；而M組小鼠腎臟肥大蒼白，表面凹凸不平。腎組織生化指標(biāo)結(jié)果顯示，M組小鼠腎組織GSH顯著高于C組，而γ－GT和MDA顯著低于C組（P＜0.001）。SF和SFG組GSH顯著低于M組，γ－GT顯著高于M組；MDA三個給藥組均顯著高于模型組，見表2。

表2 谷胱甘肽、γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、丙二醛測定結(jié)果（s，n＝8）

表2 谷胱甘肽、γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、丙二醛測定結(jié)果（s，n＝8）

注：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001，與 C組比較；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01，＃＃＃P＜0.001，與 M 組比較。

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4 討論

本實驗結(jié)果表明，M組小鼠血清Cr和BUN均顯著升高約為C組3倍，腎臟腫大蒼白，典型的“大白腎”，腎臟系數(shù)顯著增加，表明腎功能嚴(yán)重受損，使內(nèi)生肌酐清除率下降，肌酐排出減少，同時蛋白質(zhì)分解代謝增強(qiáng)使尿素氮升高，表明此模型已造成腎損傷。FG組小鼠Cr顯著低于M組。三個給藥組BUN均顯著低于M組，表明可能通過促進(jìn)毒素排泄緩解腎臟水腫。M組小鼠腎臟MDA顯著低于C組，而GSH含量顯著高于C組，說明模型組小鼠腎臟中與氧化還原相關(guān)的酶處于低活性狀態(tài)，這可能是腺嘌呤引起腎陽虛的機(jī)制之一。SF和SFG組小鼠腎組織GSH顯著低于M組，三個給藥組MDA均顯著高于M組，SF和SFG組γ－GT均顯著高于M組，提示硫磺和附子可能通過改善腎臟的能量供應(yīng)，促進(jìn)GSH利用。此外，M組腎臟γ－GT顯著降低，說明模型組腎臟催化谷胱甘肽等物質(zhì)能力受到限制，能量供應(yīng)不足。這可能是由于腎臟功能受到嚴(yán)重傷害，腎小球濾過率增加，腎小管重吸收功能下降，導(dǎo)致該酶部分隨著尿液丟失。

對綜合實驗結(jié)果分析表明，附子和硫磺配伍干姜后對腺嘌呤所致慢性腎衰小鼠腎功能有顯著改善作用，附子和硫磺可能通過激活相關(guān)黃嘌呤氧化還原酶的Fe－S中心，而產(chǎn)生腎臟保護(hù)作用，其機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

［1］邵命海，肖靜，王毅興，等.從"腎主生殖"角度評價腺嘌呤與氫化可的松誘導(dǎo)的腎陽虛模型［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2008，42（2）：57－59.

［2］鄭平東，朱燕俐，丁名城，等.腺嘌呤誘發(fā)"腎陽虛"動物模型的研制［J］.中國醫(yī)藥學(xué)報，1990，5（3）：68－73.

［3］姜敏.王琦老師用硫磺溫陽一則［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，05（9）：800.

［4］YOKOZAWA T，ZHENG P D，OURA H，et al.Animal model of adenine－induced chronic renal failure in rats［J］.Nephron，1986，44（3）：230－234.