馮建峰，彭宗玢

（常熟市中醫(yī)院 藥劑科，江蘇 常熟215500）

外用傷科傷科筋骨水是以黃柏、黃連、紫草、山梔子等藥經(jīng)醇提水沉后制成的外用水劑，我院臨床應(yīng)用多年，具有清熱解毒、活血化於、消炎止痛、祛腐生肌之功效。黃柏、黃連在處方中是主藥，小檗堿是其主要成分［1］。本文采用高效液相色譜法對(duì)其主要成分進(jìn)行了含量測(cè)定，為該藥的質(zhì)量控制提供了可行的手段。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

安捷倫1100高效液相色譜儀，Zorbax Eclipse XDBC18色譜柱（46mm×150mm，5μm），KQ250B型超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司），JA2003N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試劑

鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0713－200107，供含量測(cè)定用），傷科筋骨水由常熟市中醫(yī)院制劑室提供（批號(hào)：100122，101018，111111），甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性

色譜柱為Zorbax Eclipse XDB C18柱（46mm 150mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（55：45）（每1L水中含5.4g磷酸二氫鉀和3.4g十二烷基硫酸鈉）；檢測(cè)波長(zhǎng)345nm；柱溫為室溫；流速為10mL·min－1。理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對(duì)照品溶液制備

稱取經(jīng)105℃干燥2h的鹽酸小檗堿對(duì)照品約24mg，精密稱定，置25mL容量瓶?jī)?nèi)，加甲醇溶解并稀釋至刻度得鹽酸小檗堿溶液（0.96mg·mL－1），精密吸取該溶液1.0mL至50mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度即得（含有鹽酸小檗堿19.2μg·mL－1）。

2.3 供試品溶液制備

精密移取傷科筋骨水5.0mL，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理10min，靜置1h左右，取上清液過膜（以0.45μm微孔濾膜減壓過濾），精密移取續(xù)濾液2.0mL，置10mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度即得。

2.4 陰性對(duì)照液的制備

按傷科筋骨水處方制備不含黃柏、黃連藥材的陰性樣品，按“2.3”項(xiàng)下制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按上述色譜條件精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液陰性對(duì)照溶液各10μL，分別注入HPLC儀，記錄色譜圖。鹽酸小檗堿保留時(shí)間約為12.6min，陰性對(duì)照液在與鹽酸小檗堿對(duì)照品相同保留時(shí)間處未顯示明顯的色譜峰，故認(rèn)為無干擾。結(jié)果見圖1。

圖1 樣品HPLC色譜

2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照溶液（19.2μg·mL－1）2，4，6，8，10，20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定。以對(duì)照品質(zhì)量為橫坐標(biāo)，對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得線性回歸方程為 Y＝101772X－301713（r＝0.9999）。鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.0384～0.0.384μg·mL－1范圍內(nèi)相應(yīng)峰面積和進(jìn)樣量呈良好線性關(guān)系。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密量取10μL的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測(cè)鹽酸小檗堿峰面積，得峰面積RSD＝0.96%（n＝6），結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取10μL的對(duì)照品溶液在放置0，0.5，1，2，4，8h后注入色譜柱，按上述色譜條件進(jìn)樣，RSD＝1.19%（n＝6），結(jié)果表明8h內(nèi)測(cè)得結(jié)果較穩(wěn)定。

2.9 回收率實(shí)驗(yàn)

采用加樣回收法。精密量取已知含量的樣品（批號(hào)100122）5mL，分別加入不同體積的鹽酸小檗堿溶液（0.96mg·mL－1）1.5，1.8，2.2mL，按樣品含量測(cè)定方法操作，測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定

取3批樣品，按上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定含量，分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果見表2。

表2 鹽酸小檗堿的含量

3 討論

（1）本品為中藥提取的外用合劑，用甲醇來處理樣品：①所測(cè)成分小檗堿在甲醇中溶解較好［2］，②可以使樣品中的多糖物質(zhì)得到沉淀，從而避免多糖類對(duì)色譜柱的堵塞。

（2）對(duì)鹽酸小檗堿含量測(cè)定，經(jīng)過方法篩選［3］，以乙腈－水（55：45）（每1L水中含5.4g磷酸二氫鉀和3.4g十二烷基硫酸鈉）為流動(dòng)相，基線分離好，以HPLC法測(cè)定，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為傷科筋骨水質(zhì)量控制的測(cè)定方法。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［2］傅秀娟.HPLC法測(cè)定復(fù)方崗松洗液中鹽酸小檗堿含量［J］.瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，31（55）：513.

［3］沈煒.HPLC測(cè)定婦洗康洗劑中鹽酸小檗堿含量［J］.海峽藥學(xué)，2010，22（9）：56.