馮華，聶明華，鄒孔強(qiáng)，王祥培，羅秀瓊(.遵義市食品藥品檢驗所，貴州遵義56300;.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴陽55000)

高效液相色譜法測定連樸飲不同煎液中梔子苷的含量Δ

馮華1*，聶明華1，鄒孔強(qiáng)1，王祥培2，羅秀瓊1(1.遵義市食品藥品檢驗所，貴州遵義563002;2.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴陽550002)

目的:考察用合煎液(傳統(tǒng)湯劑)、分煎液(配方顆粒湯劑)方法制備的連樸飲湯劑中梔子苷含量的變化。方法:建立高效液相色譜(HPLC)法，采用Diamonisl C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動相為乙睛∶水(20∶80);流速為1 mL·min－1;檢測波長為238 nm。結(jié)果:連樸飲分煎液中梔子苷平均含量比合煎液中梔子苷平均含量高。結(jié)論:與傳統(tǒng)湯劑比較，連樸飲配方顆粒湯劑中梔子苷的含量高。

連樸飲;梔子苷;合煎;分煎;高效液相色譜法

連樸飲出自《霍亂論》，處方由制厚樸、川連、石菖蒲、焦梔子等組成，具有清熱化濕、理氣和中等功效。本文以有效成分梔子苷作為指標(biāo)，比較該方2種煎液中梔子苷含量差異，探索中藥復(fù)方湯劑不同制法對其有效成分溶出量的影響，對單味中藥配方顆粒應(yīng)用于臨床打下一定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

Waters 1525型高效液相色譜儀，KQ-300DE超聲儀，色譜柱:Diamonsil C18(5 μm，200 mm×4.6 mm)。厚樸、川連、石菖蒲、制半夏、香豉、焦梔子、蘆根7味藥材飲片由遵義醫(yī)藥有限公司提供，經(jīng)遵義市藥品檢驗所鑒定均符合《中華人民共和國藥典:一部》(2010年版)收載品種。梔子苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:110749-200572)，甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

流動相:乙睛∶水(20∶80);流速為1 mL·min－1;檢測波長為238 nm;柱溫為25℃［1］;進(jìn)樣量為10 μL。色譜圖見圖1 。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1 mL含0.085 mg的溶液，即得。

2.2.2 合煎液的制備:稱取藥材制厚樸6 g、川連3 g、石菖蒲3 g、制半夏3 g、香豉9 g、焦梔子9 g、蘆根60 g，加8倍量的水煎煮，保持微沸30 min，倒出煎液;藥渣再加8倍量的水煎煮30 min，合并2次煎液，減壓干燥成干粉。稱取相當(dāng)于原藥材處方量的干粉，置100 mL量瓶中，用開水溶解定溶至刻度，精密吸取2 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，稱重，超聲處理(功率為250 W，頻率為20 kHz)25 min，取出，放冷，加甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

圖1 HPLC色譜圖Fig 1HPLC chromatgrams

2.2.3 分煎液的制備:稱取上述處方量的藥材分別加8倍量的水煎煮2次，每次保持微沸30 min，制備各藥材的煎液，減壓干燥成干粉。干粉混合均勻，同法制得分煎液溶液。

2.2.4 陰性溶液的制備:稱取不含梔子的藥材，同法制備成陰性溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密稱取梔子苷對照品，配制成0.065 88、0.076 86、0.087 84、0.098 82、0.109 80 mg·mL－1的梔子苷對照品溶液，精密吸取對照品溶液10 μL，按上述色譜條件依次測定，得回歸方程:Y=1.9×106X+88 530，r=0.999 5，梔子苷在65.88～109.80 μg·mL－1間線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗

重復(fù)進(jìn)樣6次，平均峰面積分別為1 813885、2 153 595;RSD分別為0.6%、0.8%，表明精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

在0、4、8、16、24 h分別測定其峰面積，合煎液的RSD=1.0%、分煎液的RSD=1.2%，表明2種煎液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗

分別取同一樣品各5份，測定含量，結(jié)果合煎液和分煎液梔子苷平均含量分別為114.21、133.08 mg，RSD分別為0.9%、1.0%，表明重復(fù)性好。

2.7 回收率試驗

按分煎液、合煎液制備項下制備各5份，稀釋50倍進(jìn)行加樣回收，精密加入梔子苷對照品(1.250 mg·mL－1)1 mL，進(jìn)行加樣回收試驗，過0.45 μm濾膜，并按色譜條件項下進(jìn)樣，同法測定，結(jié)果見表1 、2(mg/m代表1 個樣品稀釋50倍后含梔子苷量的毫克數(shù))。

表1 分煎湯劑梔子苷加樣回收測定結(jié)果Tab 1Results of recovery test of geniposide in separated decoction sample

表2 合煎湯劑梔子苷加樣回收率測定結(jié)果Tab 2Results of recovery test of geniposide in mixed decoction sample

2.8 樣品含量測定

各制備5份，測定梔子苷含量，求平均含量。合煎液平均含量為114.98 mg，分煎液平均含量為130.41 mg。結(jié)果顯示，連樸飲分煎液比合煎液中梔子苷的含量高。

3 討論

本研究采用HPLC法測定中藥復(fù)方制劑中的梔子苷含量，文獻(xiàn)報道可用多種不同組成的流動相系統(tǒng)［2，4］，本實驗選擇《中華是否是一個比較普遍現(xiàn)象，還有待廣泛的研究才能確定。本實驗測定連樸飲中有效成分梔子苷在分煎、合煎過程中含量有無變化，為連樸飲配方顆粒應(yīng)用于臨床提供一些理論依據(jù)。

［1］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典:一部［S］．2010年版．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:231-232．

［2］吳紅娟，王清波，譚朝陽，等．不同來源梔子中梔子苷含量測定［J］．湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，30(5):35-37．

［3］段啟，莊義修，陳華師．HPLC法測定不同產(chǎn)地梔子中梔子苷含量［J］．亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5(6):20-21．

［4］劉瑛，張浩．梔子藥材中梔子苷的含量測定［J］．華西藥學(xué)雜志，2003，18(5):374-375．

Determination of Geniposide in Mixed vs.Separated Decoctions of Lian Pu Drink by HPLCΔ

FENG Hua1*，NIE Ming-hua1，ZOU Kong-qiang1，WANG Xiang-pei2，LUO Xiu-qiong1(Zunyi Institute for Food＆Drug Control，Guizhou Zunyi 563002，China;2.Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China)

OBJECTIVE:To investigate the content change of geniposide in of Lian Pu Drink prepared by mixed decoction(traditional decoction)method or separated decoction(decoction of dispensing granules)method.METHODS:The content of geniposide was determined by HPLC using Diamonisl C18column(5 μm，4.6 mm×200 mm)with a mobile phase of CH3CN∶water(20∶80)at a flow rate of 1 mL·min－1and a detection wavelength of 238 nm.RESULTS:The mean content of geniposide in separated decoction of Lian Pu Drink was higher than in its mixed decoction.CONCLUSION:The content of geniposide in decoction of dispensing granules of Lian Pu Drink was higher than in its traditional decoction.

Lian Pu Drink;Geniposide;Mixed decoction;Separated decoction;HPLC;

R932

B

1672－2124(2012)09－0809－03

遵義市中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)專項項目課題(市科合中藥專字［2009］4號)

*主管藥師。研究方向:新藥研究、藥品檢驗。E-mail:fenghua781014@yahoo.com.cn

2011-12-09

2012-02-16)

*副主任藥師。研究方向:臨床藥學(xué)、醫(yī)院制劑研發(fā)。E-mail:jgyylgb@sina．com