李婷婷， 方 叢， 賈 磊， 岳超敏

(中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)研究中心，廣東 廣州 510655)

1000-4718(2012)02-0193-08

2011-08-17

2011-12-14

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81070495)；廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.9151018201000018)

△通訊作者 Tel:020-38048013；E-mail:qingqingwenyuan@126.com

·論著·

小鼠早期完整胚胎誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜白血病抑制因子和整合素β3表達(dá)并提高子宮容受性*

李婷婷， 方 叢△， 賈 磊， 岳超敏

(中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)研究中心，廣東 廣州 510655)

目的探討小鼠早期胚胎誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜容受性改變的空間結(jié)構(gòu)，確定胚胎各個(gè)部分能否引起子宮內(nèi)膜容受性中白血病抑制因子(LIF)和整合素β3改變。方法選用6～8周昆明雌鼠，體外實(shí)驗(yàn)分為子宮內(nèi)膜培養(yǎng)前組、子宮內(nèi)膜單純培養(yǎng)組、子宮內(nèi)膜全胚胎共培養(yǎng)組、子宮內(nèi)膜卵裂球共培養(yǎng)組、子宮內(nèi)膜透明帶共培養(yǎng)組，各組培養(yǎng)2 d后收集子宮內(nèi)膜行下一步檢測；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分為胚胎移植前組、單純培養(yǎng)液移植組、全胚胎移植組、卵裂球移植組、透明帶移植組及正常妊娠未干預(yù)組，移植后2 d收集子宮內(nèi)膜行下一步檢測。熒光定量PCR檢測整合素β3和LIF mRNA表達(dá)；免疫組織化學(xué)及Western blotting檢測整合素β3和LIF的蛋白表達(dá)部位及表達(dá)水平。結(jié)果體外實(shí)驗(yàn)子宮內(nèi)膜全胚胎共培養(yǎng)組中子宮內(nèi)膜的整合素β3和LIF表達(dá)顯著高于其它組，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)正常妊娠未干預(yù)組的整合素β3和LIF表達(dá)顯著高于其它組。結(jié)論完整胚胎可顯著提升小鼠孕早期子宮內(nèi)膜容受性因子整合素β3和LIF的表達(dá)，而單純透明帶或卵裂球則不能明顯增加整合素β3和LIF的表達(dá)。早期胚胎誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜容受性可能需要完整胚胎結(jié)構(gòu)的存在。

胚胎； 整合素β3； 白血病抑制因子； 子宮內(nèi)膜容受性

自1978 年世界首例試管嬰兒在英國誕生以來，在30多年來，人類輔助生殖技術(shù)取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，有各種理念的革新和技術(shù)進(jìn)步，然而目前輔助生殖技術(shù)的成功率仍不能達(dá)到人們期望值，部分患者反復(fù)多次體外受精-胚胎移植(invitrofertilization-embyro transfer,IVF-ET)仍不能成功妊娠。胚胎植入是一個(gè)極其復(fù)雜的過程，需要正常發(fā)育胚胎和有良好容受性子宮內(nèi)膜的共同作用，以及二者同步發(fā)育和分子水平的對(duì)話[1]，胚胎種植受多方面因素控制，包括胚胎質(zhì)量、子宮內(nèi)膜容受性、胚胎移植技術(shù)等[1]，其中因子宮內(nèi)膜容受性差而致的胚胎種植失敗占失敗因素的60%[2]。國外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)患者子宮內(nèi)膜上皮與植入前胚胎共培養(yǎng)可促使胚胎正常發(fā)育并提高胚胎與子宮內(nèi)膜上皮間分子層面對(duì)話，從而提高IVF-ET成功率[3-4]，此技術(shù)對(duì)反復(fù)IVF-ET失敗的助孕患者尤其有宜[3,5]，并且Wakuda等[6]小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)推測胚胎亦能誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜容受性增加。綜上，提高妊娠率的關(guān)鍵在于如何提高子宮內(nèi)膜容受性。目前認(rèn)為子宮內(nèi)膜容受性生物標(biāo)志有細(xì)胞因子、黏附分子、生長因子、脂類等[2]，其中最具代表因子有白血病抑制因子(leukaemia-inhibitory factor,LIF)和整合素β3。雖證實(shí)早期胚胎與著床期子宮內(nèi)膜共培養(yǎng)可提高子宮內(nèi)膜容受性，從而提升妊娠率，但其具體機(jī)制尚未明朗，并且亦不清楚具體是胚胎哪一部分發(fā)揮了主要作用。本研究旨在通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討胚胎的各部分包括透明帶、卵裂球及完整胚胎在誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜容受性中的作用，以期為臨床所用。

材 料 和 方 法

1材料

1.1動(dòng)物 清潔級(jí)昆明小鼠，6～8周，體重25～35g，由中山大學(xué)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)為0083643。

1.2主要儀器和試劑 孕馬血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG) 和人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,HCG) (寧波激素制品廠)；掃描電鏡系統(tǒng)(Quanta200)、解剖鏡及倒置顯微鏡 (Nikon)、 二氧化碳孵箱 (Thermo Forma)、Mini-Protein電泳系統(tǒng)(Bio-Rad)、ABI 3900臺(tái)式高通量DNA合成儀(ABI)，ABI 7500全自動(dòng)熒光定量PCR儀(ABI)、RNA提取試劑盒(Bio-Rad)、RT-PCR 試劑盒(Toyobo)、熒光定量PCR試劑盒(Toyobo)；DMEM/F12 (1∶1)培養(yǎng)基(Sigma)、M2培養(yǎng)基(Sigma)、FBS (Gibco) 、雌二醇(estradiol,E2) 及孕激素(progestogen,P4) (Sigma) 、胰島素 (Sigma) 、表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)(Promega) 、acidic Tyrode’s solution (Sigma)；PVDF膜(Millipore)、整合素β3Ⅰ抗、LIF Ⅰ抗、β-actin、Ⅱ抗(Santa Cruz)；其它試劑除國產(chǎn)分析純主要購自Sigma。

2方法

2.1小鼠促排卵 制備輸精管結(jié)扎公鼠；小鼠腹腔注射孕馬血清促性腺激素10 U，46～48 h后注射人絨毛膜促性腺激素10 U，造成超排卵，然后雌雄按2∶1合籠，次晨檢查陰拴，發(fā)現(xiàn)陰栓為妊娠第1 d；一部分與正常公鼠合籠以獲得2細(xì)胞胚胎，一部分與絕育公鼠合籠以獲得假孕和代孕母鼠。

2.2小鼠子宮內(nèi)膜和胚胎獲取及共培養(yǎng) 母鼠與正常公鼠合籠見栓后第2 d上午在無菌條件下迅速取出小鼠輸卵管，收集2細(xì)胞期胚胎，對(duì)胚胎進(jìn)行相應(yīng)處理，利用acidic Tyrode’s solution消化透明帶獲無透明帶卵裂球，顯微機(jī)械操作吸出卵裂球獲空透明帶，無菌條件下取出子宮內(nèi)膜，擠壓法[7]獲得子宮內(nèi)膜，剪成2 mm左右的小段，即隨即分為以下5組：(1)第2 d的子宮內(nèi)膜；(2)單獨(dú)子宮內(nèi)膜；(3)完整胚胎+子宮內(nèi)膜；(4)無透明帶卵裂球+子宮內(nèi)膜；(5)空透明帶+子宮內(nèi)膜，每組10例標(biāo)本。子宮內(nèi)膜與胚胎各部分共培養(yǎng)：共培養(yǎng)條件類似譚冬梅等[8]的研究，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了改善，將子宮內(nèi)膜、胚胎處理后隨機(jī)共培養(yǎng)于約30 μL微滴的培養(yǎng)液中[DMEM/F12 (1∶1) + 200 mL/L FBS，添加 17.5 nmol/L胰島素、63.5 nmol/L P4、7.14 nmol/L E2、20 μg/L EGF]，在 37 ℃、飽和濕度、5%CO2濃度培養(yǎng)箱內(nèi)，每天觀察胚胎發(fā)育，2 d后取出子宮內(nèi)膜行熒光定量PCR、免疫組織化學(xué)、Western blotting和掃描電鏡檢測，每組10例標(biāo)本。

2.3體內(nèi)移植 正常妊娠小鼠第2 d上午在無菌條件下迅速取出輸卵管，收集2細(xì)胞期胚胎，對(duì)胚胎進(jìn)行相應(yīng)處理，利用acidic Tyrode’s solution消化透明帶，獲無透明帶卵裂球，顯微機(jī)械操作吸出卵裂球獲空透明帶，分別移植入代孕母鼠輸卵管子宮連接部內(nèi)，隨機(jī)分為以下6組：(1)假孕母鼠第2 d子宮；(2)移植5 μL培養(yǎng)液；(3)移植完整胚胎；(4)移植無透明帶卵裂球；(5)移植空透明帶；(6)與正常公鼠合籠后正常妊娠，每只代孕母鼠每側(cè)宮角移植3枚胚胎或每側(cè)移植5 μL培養(yǎng)液，每組10例標(biāo)本。于孕第4 d取子宮組織行熒光定量PCR、免疫組織化學(xué)、Western blotting和掃描電鏡檢測。

2.4子宮內(nèi)膜容受性檢測 子宮內(nèi)膜組織一部分直接置入10%甲醛液中，行免疫組織化學(xué)檢測容受性標(biāo)志物L(fēng)IF和整合素β3的表達(dá)量；一部分置入電鏡標(biāo)本前固定液(2.5%戊二醛+2%多聚甲醛+0.1 mol/L PBS)中，行掃描電鏡檢測容受性標(biāo)志物胞飲突；一部分置于-80℃，待行熒光定量PCR和Western blotting檢測LIF和整合素β3的表達(dá)量。

2.4.1掃描電鏡 子宮內(nèi)膜離體后立即用PBS沖洗干凈，置于前固定液，4 ℃冰箱中固定4 h后，50%、70%、80%、90%、100%乙醇脫水；100%丙酮15 min；醋酸戊異酯過渡液過夜，臨界點(diǎn)干燥后離子濺射鍍膜，貼板上機(jī)觀察胞飲突的形成及發(fā)育情況。

2.4.2免疫組化 子宮內(nèi)膜標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，切片烘干后梯度乙醇脫蠟，EDTA抗原修復(fù)，山羊血清(SP9001試劑A)封閉，Ⅰ抗4 ℃孵育過夜，滴加生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG(SP9001試劑B)，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液(SP9001試劑C)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)， Image-Pro Plus 6.0分析著色區(qū)域積分吸光度值。陽性對(duì)照取生殖內(nèi)分泌正常的30歲婦女黃體生成素(luteinizing hormone,LH)峰后7 d子宮內(nèi)膜的切片，陰性對(duì)照以PBS代替Ⅰ抗。每組實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陽性及陰性對(duì)照。

2.4.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR 采用總RNA提取試劑盒(Bio-Rad)提取總RNA(參照試劑盒說明提取)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Bio-Rad)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄；SYBR Green 熒光定量 PCR 試劑盒(Bio-Rad) 在 ABI7300 上進(jìn)行整合素β3和LIF mRNA 定量分析，引物和實(shí)驗(yàn)條件具體見表1，以 GAPDH為內(nèi)參照基因，檢測重復(fù)3次。

表1 定量分析引物與主要參數(shù)

2.4.4Western blotting 總蛋白提取試劑盒提取總蛋白，BCA法(Merck) 檢測蛋白濃度；7.5%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE) 凝膠電泳；80 V、2 h，轉(zhuǎn)膜2 h；5%脫脂牛奶封閉液封閉1 h；Ⅰ抗4 ℃過夜；Ⅱ抗室溫孵育1 h；TBS 液清洗；ECL化學(xué)發(fā)光，X光片顯影定影；并用 ImageJ軟件計(jì)算各條帶的積分吸光度值。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

1子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學(xué)

所有標(biāo)本均采用HE染色鑒定子宮內(nèi)膜及完整性，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)組子宮結(jié)構(gòu)完整，子宮內(nèi)膜腺體和上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰完整；體外實(shí)驗(yàn)通過擠壓法獲得的子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)完整，腺體和上皮細(xì)胞清晰可見，經(jīng)過體外培養(yǎng)2 d后組織結(jié)構(gòu)變得松散，但整體仍完整，見圖1。

Figure 1. The HE staining of endometrium. A: HE staining of uterus(×100); B: HE staining of endometrium obtained by squeezing method(×100); C: HE staining of endometrium culturedinvitrofor 2 d(×200).

圖1子宮內(nèi)膜蘇木素-伊紅染色

2子宮內(nèi)膜容受性形態(tài)

隨機(jī)選取各組標(biāo)本，掃描電鏡觀察形態(tài)學(xué)變化，種植窗時(shí)期(交配后3.5 d)均有胞飲突的出現(xiàn)，交配后1.5 d(1.5dpc)胞飲突基本仍未發(fā)育，見圖2。表明所選檢測時(shí)間為種植窗時(shí)期，同時(shí)證明子宮內(nèi)膜在體外培養(yǎng)仍能類似于體內(nèi)繼續(xù)發(fā)生形態(tài)學(xué)和功能學(xué)變化。

Figure 2. Scanning electron microscopy (SEM) photomicrographs of endometrium. A: endometrium obtained by squeezing method(×100)；B: endometrium cocultured with embryoinvitrofor 2 d(×3 000)；C: endometrium of 1.5dpc(×3 000).

圖2子宮內(nèi)膜掃描電鏡

3免疫組織化學(xué)結(jié)果

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)各組小鼠子宮上皮細(xì)胞和腺細(xì)胞在見栓后第4 d均有整合素β3和LIF表達(dá)，以正常見栓無干預(yù)組表達(dá)顯著高于其余5組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余5組組間整合素β3和LIF表達(dá)無顯著差異。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)全胚胎子宮內(nèi)膜共培養(yǎng)組中子宮上皮細(xì)胞和腺細(xì)胞在體外培養(yǎng)2 d后整合素β3和LIF表達(dá)顯著高于其余4組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余4組組間整合素β3和LIF表達(dá)無顯著差異，見圖3。

4熒光定量PCR結(jié)果

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)各組小鼠在見栓后第4 d均有整合素β3和LIF mRNA表達(dá)，以正常見栓無干預(yù)組表達(dá)顯著高于其余5組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余5組組間整合素β3和LIF表達(dá)無顯著差異。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)全胚胎子宮內(nèi)膜共培養(yǎng)組中在體外培養(yǎng)2 d后整合素β3和LIF表達(dá)顯著高于其余4組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余4組組間整合素β3和LIF表達(dá)無顯著差異，見圖4。

5Westernblotting結(jié)果

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中各組小鼠在見栓后第4 d均有整合素β3和LIF的表達(dá)，以正常見栓無干預(yù)組表達(dá)顯著高于其余5組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余5組組間整合素β3和LIF表達(dá)無顯著差異。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)全胚胎子宮內(nèi)膜共培養(yǎng)組中在體外培養(yǎng)2 d后整合素β3和LIF表達(dá)顯著高于其余4組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余4組組間整合素β3和LIF表達(dá)無顯著差異，見圖5。

討 論

胚胎植入是一個(gè)復(fù)雜的過程，需要發(fā)育良好的胚胎和具有容受性的子宮內(nèi)膜，以及二者之間的同步發(fā)育和分子對(duì)話[1]。目前對(duì)于子宮內(nèi)膜容受性的研究多是集中在對(duì)一些容受性標(biāo)志因子的發(fā)現(xiàn)和檢測上，現(xiàn)已知的子宮內(nèi)膜容受性標(biāo)志分子有細(xì)胞因子、黏附分子、生長因子、脂類等[2]，Nikas等[9-10]認(rèn)為胞飲突的出現(xiàn)是子宮內(nèi)膜容受性狀態(tài)的形態(tài)學(xué)標(biāo)志，根據(jù)胞飲突在時(shí)間和形態(tài)上的特征性，通過觀察胞飲突，可以更精確地確定植入窗開始和持續(xù)的時(shí)間，協(xié)助判斷子宮內(nèi)膜接受性，具有準(zhǔn)確、直觀和相對(duì)方便的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于輔助生殖技術(shù)具有重要的指導(dǎo)意義[10]。在這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中1.5dpc時(shí)掃描電鏡結(jié)果顯示基本無胞飲突的發(fā)育，說明種植窗還未開啟，孕4 d和共培養(yǎng)2 d后的子宮內(nèi)膜胞飲突發(fā)育，種植窗開啟，該變化符合實(shí)驗(yàn)的預(yù)測時(shí)間。觀察胞飲突的出現(xiàn)說明因子檢測是在胚胎種植窗，避免了時(shí)間選擇的錯(cuò)誤。胚胎與子宮內(nèi)膜存在“分子對(duì)話”機(jī)制，其參與的分子與子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)標(biāo)志物基本一致。對(duì)胚胎與子宮內(nèi)膜分子層面對(duì)話的深入研究將有助于提高反復(fù)失敗IVF-ET患者妊娠成功率，然而目前對(duì)胚胎誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜容受性提升的具體機(jī)制研究甚少，尚無關(guān)于各胚胎組分對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的影響，胚胎共培養(yǎng)可引起子宮內(nèi)膜容受性的增加，而與子宮內(nèi)膜直接接觸的是透明帶，透明帶是否在誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜容受性方面起作用？ Fujiwara等[11]就曾提出“透明帶是否給母體內(nèi)在信號(hào)，使其識(shí)別發(fā)育中的胚胎”的問題，并提出疑問：具體是胚胎的哪一部分參與了子宮內(nèi)膜容受性的主要誘導(dǎo)過程？

圖3免疫組織化學(xué)染色

圖4實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測胚胎各部分對(duì)子宮內(nèi)膜容受性因子LIF、整合素β3mRNA水平的誘導(dǎo)作用

這項(xiàng)研究是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域第一次探索早期胚胎誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜容受性的空間結(jié)構(gòu)，并通過小鼠的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)兩個(gè)途徑共同驗(yàn)證。收集2細(xì)胞期胚胎后分別體內(nèi)移植透明帶、卵裂球、完整胚胎以及培養(yǎng)液后，孕第4 d檢測容受性因子的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)有手術(shù)操作孕第4 d的表達(dá)并不高于孕第2 d，孕第4 d各組之間的表達(dá)也沒有差異，但正常見陰道栓后無手術(shù)操作組的表達(dá)顯著高于各組，可能原因有：(1)個(gè)體之間差異過大；(2)采用水合氯醛麻醉和開腹手術(shù)移植對(duì)小鼠的子宮和整個(gè)機(jī)體的影響較大，僅僅經(jīng)過2 d子宮內(nèi)膜容受性因子的表達(dá)也可能會(huì)受到影響，影響子宮內(nèi)膜容受性或種植窗正常時(shí)期、正常量的表達(dá)及開啟；(3)體內(nèi)移植雙側(cè)宮角各3枚，移植胚胎數(shù)量較少，不足以引起明顯的分子對(duì)話使小鼠子宮內(nèi)膜容受性因子表達(dá)增加。

胚胎與子宮內(nèi)膜體外共培養(yǎng)使得分子對(duì)話機(jī)制更加利于研究，體外實(shí)驗(yàn)避免了明顯的個(gè)體差異，研究證實(shí)早期胚胎與子宮內(nèi)膜上皮共培養(yǎng)可提高IVF-ET成功率[3-5]，Horcajadas等[12]發(fā)現(xiàn),行IVF-ET患者的胚胎與自身子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞共培養(yǎng)可改變子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞100余基因的改變，說明胚胎可誘導(dǎo)影響子宮內(nèi)膜發(fā)生相應(yīng)變化以及引起子宮內(nèi)膜容受性的增加。除了基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，在人類IVF-ET中，有學(xué)者報(bào)道通過2次移植提高反復(fù)失敗患者的臨床妊娠率的研究也表明胚胎與內(nèi)膜之間存在相互誘導(dǎo)作用[13-15]。本實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)后空白對(duì)照與見栓后2 d的表達(dá)無明顯差異，共培養(yǎng)2 d后，胚胎共培養(yǎng)組子宮內(nèi)膜LIF和整合素β3表達(dá)高于透明帶共培養(yǎng)組、卵裂球共培養(yǎng)組及空白組，此結(jié)果的可能原因有：(1) 體外共培養(yǎng)中子宮內(nèi)膜組織在培養(yǎng)2 d后仍具有子宮內(nèi)膜容受性，但HE切片顯示結(jié)構(gòu)已變得松散，部分組織細(xì)胞可能已經(jīng)壞死、凋亡，正常功能的行使可能也受影響，同時(shí)說明即使有組織細(xì)胞的凋亡，但共培養(yǎng)對(duì)子宮內(nèi)膜的誘導(dǎo)作用彌補(bǔ)了凋亡壞死所致缺少量；(2) 胚胎操作可能對(duì)胚胎、卵裂球、透明帶的損傷使其功能受損，如Kurokawa等[16]發(fā)現(xiàn),ICSI后胚胎因子改變與IVF不同，曾提出ICSI安全性的問題；(3) 所用小鼠為正常小鼠，小鼠的繁殖能力較強(qiáng)，且并無著床障礙等病理狀態(tài)，體內(nèi)移植的各組和體外共培養(yǎng)各組對(duì)子宮內(nèi)膜的誘導(dǎo)作用不夠明顯；(4)完整胚胎可以誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜容受性，透明帶與卵裂球不能單獨(dú)完成分子對(duì)話功能，既往研究也證明了胚胎與子宮內(nèi)膜共培養(yǎng)可促進(jìn)早期胚胎的優(yōu)質(zhì)胚胎率和囊胚形成率[17]，同時(shí)王麗等[18]的研究在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上證實(shí)胚胎與子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞共培養(yǎng)可提高子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞容受性分子的表達(dá)。

圖5Westernblotting檢測胚胎各部分對(duì)子宮內(nèi)膜容受性因子LIF和整合素β3蛋白水平的誘導(dǎo)作用

綜上，這項(xiàng)小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，對(duì)于正常生殖功能小鼠，胚胎完成與子宮內(nèi)膜的分子對(duì)話需要完整的空間結(jié)構(gòu)，然而單純卵裂球和透明帶不能明顯地體現(xiàn)分子對(duì)話的功能，對(duì)于著床障礙、免疫性不孕等病理狀態(tài)以及人類和其它物種在胚胎與子宮內(nèi)膜相互作用的生理基礎(chǔ)仍需繼續(xù)探討研究。

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Mouseearlyintegralembryoinducesexpressionofendometrialintegrinβ3andleukaemia-inhibitoryfactor,andimprovesuterinereceptivityinmice

LI Ting-ting, FANG Cong, JIA Lei, YUE Chao-min

(CenterforReproductiveMedicine,TheSixthAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510655,China.E-mail:qingqingwenyuan@126.com)

AIM: To investigate the changes of endometrial receptivity under the effect of mouse embryo bothinvitroandinvivo, and to figure out which part of the embryo induces the change.METHODSScanning electron microscope was applied to observe the pinpode formation on day 4 endometrium bothinvitroandinvivo. The expression of integrin β3and leukaemia-inhibitory factor(LIF) on day 2 pregnant mouse endometrium , day 4 endometrium after co-culture for 2 d with day 2 embryo , blastomere and zona pellucida as well as control groupinvitrowere detected by the methods of fluorescent quantitative PCR, immunohistochemistry and Western blotting. The same tests were conducted in theinvivopart of the experiment with the integral embryo or different parts of the embryo being transferred to pseudopregnant mouse uterus. On day 4 of the pregnancy, the endometrium was extracted to carry out the tests.RESULTSAfter co-cultured for 2 d with whole embryo, the experssion of integrin β3and LIF was higher than that in any other group in theinvitropart. The expression of integrin β3and LIF on day 4 of normal pregnancy was higher than that in any other group in theinvivoexperiments.CONCLUSIONMouse embryo as a whole is able to induce better endometrial receptivity, while any separated part of embryo, such as blastomere or zona pellucida, couldn’t.

Embryo; Integrin β3; Leukaemia-inhibitory factor; Endometrial receptivity

R321.2

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2012.02.001