韋美丹, 林繼宗, 朱 寧, 王克萬, 王 勇△

(1南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院藥劑科, 廣東 廣州 510282； 2中山大學(xué)第三附屬醫(yī)院肝膽外科, 廣東 廣州 510630； 3南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院神經(jīng)外科, 廣東 廣州 510015)

1000-4718(2012)04-0683-06

2011-12-27

2012-03-09

國家自然科學(xué)基金資助項目 (No.30973162); 廣東省自然科學(xué)基金資助項目 (No.07005203)

△通訊作者 Tel:020-61643555; E-mail:yongwh2005@163.com

Aβ1-42作用的小膠質(zhì)細胞對體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞生存的影響*

韋美丹1, 林繼宗2, 朱 寧1, 王克萬3, 王 勇1△

(1南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院藥劑科, 廣東 廣州 510282；2中山大學(xué)第三附屬醫(yī)院肝膽外科, 廣東 廣州 510630；3南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院神經(jīng)外科, 廣東 廣州 510015)

目的探討β-淀粉樣蛋白(Aβ1-42)作用的小膠質(zhì)細胞對體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞(NSCs)生存的影響。方法利用Transwell小室在體外建立NSCs與小膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)體系，檢測Aβ1-42蛋白作用小膠質(zhì)細胞前后NSCs增殖、分化及凋亡情況。結(jié)果與單純共培養(yǎng)組相比，Aβ1-42干預(yù)共培養(yǎng)組的增殖率降低，且微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)和膽堿乙酰轉(zhuǎn)化酶(CHAT)陽性表達率也均降低。結(jié)論Aβ1-42介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)抑制了神經(jīng)干細胞的增殖，促進其凋亡，并能顯著降低其分化成神經(jīng)元尤其是膽堿能神經(jīng)元的能力。

小膠質(zhì)細胞；神經(jīng)干細胞；阿爾茨海默??； 淀粉樣β蛋白

阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)是一種神經(jīng)元進行性丟失和認知障礙的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病[1]。β-淀粉樣蛋白(beta-amyloid protein, Aβ)沉積激活小膠質(zhì)細胞引起的炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致AD腦內(nèi)神經(jīng)元丟失的重要原因[2]。神經(jīng)干細胞(neural stem cells, NSCs)是一種具有自我更新和多向分化潛能的神經(jīng)前體細胞，正常條件下可以分化成神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞等。但是，從神經(jīng)干細胞技術(shù)治療AD構(gòu)想的提出到現(xiàn)在，無論是促進AD患者內(nèi)源性神經(jīng)細胞生成還是外源性神經(jīng)干細胞移植，均未獲得成功。這可能與Aβ致AD患者顱內(nèi)“微環(huán)境”改變有關(guān)。因此，如何改善AD腦內(nèi)“微環(huán)境”進行干細胞移植成為治療AD研究熱點。本研究旨在利用Transwell裝置建立神經(jīng)干細胞和小膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)體系，在細胞水平上探討Aβ作用的小膠質(zhì)細胞對神經(jīng)干細胞生存的影響，以證實Aβ介導(dǎo)的神經(jīng)細胞生成抑制是否通過小膠質(zhì)細胞間接實現(xiàn)。

材 料 和 方 法

1材料

新生SD大鼠由南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供[合格證號為SCXK (粵) 2006-0015]。DMEM/F12、B27、胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)、胰酶和L-谷氨酰胺(L-glutamine,L-Gln)均購自Gibco；表皮生長因子(epidermal growth factor, EFG)和堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth, bFGF)均購自R&D system；神經(jīng)巢蛋白(nestin)、5-溴-2-脫氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2'-deoxyuridine, BrdU)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)、CD11b/c、微管相關(guān)蛋白2(microtubule-associated protein 2, MAP-2)、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(choline acetyltransferase, CHAT)抗體及相關(guān)Ⅱ抗均購自Abcam; 多聚賴氨酸、Aβ1-42、Hoechst 33258及annexin V-FITC/PI檢測試劑盒購自Sigma；Transwell板 (孔直徑0.4 μm) 購自Costar。

2方法

2.1大鼠神經(jīng)干細胞分離、培養(yǎng)與鑒定 參照蘭艷纖等[3]的方法,新生SD大鼠海馬組織中分離出的細胞用含EGF(20 μg/L)、bFGF(20 μg/L)、B27(2%)、L-Gln(2%)和青鏈雙霉素(1%)的DMEM/F12培養(yǎng)液重懸后以1×109/L接種于25 cm2透氣培養(yǎng)瓶內(nèi)。置37 ℃、5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3～4 d半量換液第7 d結(jié)束原代培養(yǎng)并進行傳代培養(yǎng)，每6～7 d傳代1次。取第2代NSCs進行nestin鑒定；第2代神經(jīng)細胞球制備單細胞懸液，加入10 μmol/L BrdU標(biāo)記24 h后全量換液培養(yǎng)4 d后將神經(jīng)細胞球轉(zhuǎn)移到用多聚賴氨酸包處理的24孔板中貼壁培養(yǎng)2 h后，免疫熒光鑒定細胞增殖能力；第2代神經(jīng)干細胞用含10% FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液進行正常分化處理，分化10 d后分別行GFAP和MAP-2免疫細胞熒光染色鑒定細胞多向分化潛能。

2.2大鼠小膠質(zhì)細胞的純化、培養(yǎng)與鑒定 參照雷露雯等[4]的方法，新生SD大鼠海馬組織經(jīng)0.125% 胰蛋白酶消化后離心，棄上清，細胞沉淀用含10% FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基重懸，單細胞懸液以5×108/L細胞密度接種于經(jīng)多聚賴氨酸包被處理的75 cm2透氣培養(yǎng)瓶中，37 ℃、5% CO2孵育箱中培養(yǎng)2 d后全量換液，待培養(yǎng)至7～9 d，手搖法分離純化小膠質(zhì)細胞，并通過小膠質(zhì)細胞特異性抗體CD11b/c進行免疫細胞化學(xué)檢測，同時以Hoechst 33258對細胞核進行復(fù)染，以明確細胞總數(shù)，計算小膠質(zhì)細胞純度。

2.3共培養(yǎng)體系的建立與實驗分組 用6孔板的Transwell小室構(gòu)建雙層細胞共用培養(yǎng)液而不直接接觸的共培養(yǎng)體系。將Transwell小室作為培養(yǎng)體系上室，接種NSCs，培養(yǎng)體系下室為6孔塑料培養(yǎng)板，接種純化后的小膠質(zhì)細胞，探討Aβ1-42激活小膠質(zhì)細胞前后對NSCs生存的影響。實驗分4組：(1) 空白對照組(control)：神經(jīng)干細胞正常培養(yǎng)于上室，下室加培養(yǎng)基；(2) 實驗對照組(Aβ1-42+NSCs)：神經(jīng)干細胞培養(yǎng)于上室，下室加入10 μmol/L Aβ1-42的培養(yǎng)基；(3) 單純共培養(yǎng)組(microglia and NSCs coculture)：神經(jīng)干細胞與小膠質(zhì)細胞以1∶1的濃度比依次接種于上室和下室； (4) Aβ1-42干預(yù)共培養(yǎng)組(Aβ1-42+microglia and NSCs coculture)：神經(jīng)干細胞與小膠質(zhì)細胞以1∶1的濃度比依次接種于上室和下室，同時小膠質(zhì)細胞層加入10 μmol/L Aβ1-42。各處理組于37 ℃、5% CO2孵育箱中培養(yǎng)96 h后，進行后續(xù)指標(biāo)檢測。

2.4BrdU摻入法檢測神經(jīng)干細胞增殖率 第2代神經(jīng)干細胞球制備成單細胞懸液，加入10 μmol/L BrdU標(biāo)記24 h后，收集細胞并重懸。細胞懸液按照實驗分組情況分別進行加藥處理。共培養(yǎng)96 h后將各組神經(jīng)細胞球轉(zhuǎn)移到用多聚賴氨酸包被處理過的24孔板中貼壁培養(yǎng)2 h后，按常規(guī)方法進行免疫熒光鑒定各組細胞BrdU表達，即：收集各組細胞，4% 多聚甲醛室溫固定；0.3% Triton X-100透化處理；10% 山羊血清封閉后，小鼠抗BrdU單抗4 ℃濕盒孵育過夜；FITC羊抗小鼠IgG避光孵育1.5 h。Hoechst 33258核染后，熒光顯微鏡下觀察并照相。

2.5流式細胞儀檢測神經(jīng)干細胞分化 第2代神經(jīng)干細胞球用含10% FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液進行正常分化處理5 d后，按照實驗分組情況分別進行加藥處理。共培養(yǎng)96 h后行MAP-2和CHAT免疫熒光染色。所用Ⅰ抗分別為鑒定神經(jīng)元的小鼠抗MAP-2單抗和鑒定膽堿能神經(jīng)元的兔抗CHAT多克隆抗體。所用Ⅱ抗分別為FITC標(biāo)記的抗小鼠IgG和抗兔IgG 抗體。采用流式細胞儀(FACS)分析，用Cell Quest 3.0 軟件進行分析。

2.6流式細胞儀分析神經(jīng)干細胞凋亡率 第2代神經(jīng)干細胞球制備成單個細胞懸液并用含EGF(20 μg/L)、bFGF(20 μg/L)、B27(2%)、L-Gln(2%)和青鏈雙霉素(1%)的DMEM/F12培養(yǎng)液重懸，然后按照實驗分組情況分別進行加藥處理。各組細胞經(jīng)處理96 h之后，參照annexin V-FITC/PI檢測試劑盒說明書進行前期處理后，上流式細胞儀檢測。

3統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié) 果

1NSCs培養(yǎng)及鑒定

倒置顯微鏡鏡下觀察：原代接種的細胞為圓型、透亮的單個細胞，培養(yǎng)2～4 d后，可形成由數(shù)十至數(shù)百個細胞組成的神經(jīng)干細胞球，細胞球球體透亮，形態(tài)規(guī)則，邊緣整齊，邊界清晰，排列緊密，周邊有亮的光暈，培養(yǎng)液中懸浮生長，見圖1A；經(jīng)免疫熒光鑒定神經(jīng)細胞球表達nestin陽性，見圖1B；BrdU陽性，見圖2。10% FBS分化條件下培養(yǎng)，細胞呈貼壁生長，可見細胞逐漸從球體中“爬”出來，培養(yǎng)5 d后細胞呈多種形態(tài)，見圖3A；經(jīng)免疫熒光鑒定部分細胞呈MAP-2陽性，見圖3B；GFAP陽性，見圖3C。

Figure 1. Morphology and identification of the cultured fetal neural stem cells derived from the hippocampus (scale bar=100 μm). A:inverted microscope photograph showed numerous neurospheres at 3 d of primary culture. B: most of the cells in the second passage of neurospheres were nestin positive.

圖1神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)與鑒定

Figure 2. Identification of the neural stem cells (NSCs) by BrdU incorporation. Nearly all cells expressed high level of BrdU (A and C, green). Nuclei were counterstained with Hoechst 33258 (B and C, blue). Scale bar=100 μm.

圖2BrdU摻入法檢測NSCs增殖

Figure 3. Identification of the neural stem cells (NSCs) by immunofluorescence.A:a number of cells migrated from the neurosphere and were induced by 10% FBS for 5 dinvitro(×400);B:the microtubule-associated protein 2 (MAP-2) positive cells differentiated from passage neurospheres (green);C:the glial fibrillary acidic protein (GFAP) positive cells differentiated from passage neurosphere (red). Scale bar=100 μm in B and C.

圖3免疫熒光檢測NSCs分化

2小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)與鑒定

原代培養(yǎng)的細胞主要是以星形膠質(zhì)細胞為主，并含有小膠質(zhì)細胞、神經(jīng)元和少量的少突膠質(zhì)細胞，見圖4A。細胞培養(yǎng)9 d出現(xiàn)分層現(xiàn)象后，通過手搖法分離純化獲得小膠質(zhì)細胞。顯微鏡下觀察：小膠質(zhì)細胞胞體扁平或卵圓形,突起細長，見圖4B。經(jīng)CD11b/c免疫熒光檢測，陽性率在95%以上，見圖5。

Figure 4. Isolation and purification of microglia (×200).A: morphology of the primary glial cells 9 d after culture;B: the purity of microglia 2 d after culture.

圖4小膠質(zhì)細胞分離純化

Figure 5. Identification of the purified microglia by CD11b/c immunofluorescent staining(scale bar=100 μm). A:the localization of CD11b/c was shown in red;B:nuclei were counterstained with Hoechst 33258;C:a merged image showed that more than 95% cells were double positive for microglial marker CD11b/c.

圖5免疫熒光鑒定小膠質(zhì)細胞

3BrdU摻入法檢測神經(jīng)干細胞增殖

BrdU摻入法檢測各組神經(jīng)干細胞增殖率依次為：78.78%±5.49%、48.58%±1.83%、77.23%±14.77%和26.95%±3.30%。數(shù)據(jù)顯示，單純共培養(yǎng)組與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而Aβ1-42干預(yù)共培養(yǎng)組與實驗對照組及單純共培養(yǎng)組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.01)。這表明未經(jīng)Aβ1-42作用的小膠質(zhì)細胞對NSCs增殖影響不顯著；Aβ1-42既能直接影響NSCs的增殖，又能通過作用于小膠質(zhì)細胞使NSCs增殖抑制加強，見圖6。

Figure 6. The proliferation of NSCs detected by BrdU incorporation (scale bar=100 μm). A:NSCs control;B: Aβ1-42+NSCs;C:microglia and NSCs coculture;D:Aβ1-42+microglia and NSCs coculture. The proportion of BrdU positive cells (A-D, green) relative to total cell count was estimated under a fluorescent microscope.Nuclei were counterstained with Hoechst 33258 (A-D, blue).

圖6BrdU摻入法檢測NSCs增殖

4小膠質(zhì)細胞對共培養(yǎng)NSCs分化的影響

圖7顯示，單純共培養(yǎng)組的MAP-2和CHAT陽性細胞數(shù)少于空白對照組(P<0.01)。與實驗對照組和單純共培養(yǎng)組相比，共培養(yǎng)體系中10 μmol/L Aβ1-42作用于小膠質(zhì)細胞后， MAP-2和CHAT陽性細胞數(shù)減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

5流式細胞儀檢測NSCs凋亡率

表1顯示，單純共培養(yǎng)NSCs與小膠質(zhì)細胞時，NSCs凋亡率與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而在共培養(yǎng)體系中，小膠質(zhì)細胞層中加入10 μmol/L Aβ1-42共同孵育96 h后，NSCs凋亡率均高于實驗對照組與單純共培養(yǎng)組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

討 論

Transwell是一種帶有Transwell小室、外形為一個可放置在細胞培養(yǎng)板里的小杯子，杯子底層具有通透性的聚碳酸酯膜的裝置，目前主要應(yīng)用于細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲、共培養(yǎng)等多種方面的研究。近年來，越來越多的學(xué)者利用共培養(yǎng)技術(shù)研究細胞與細胞或是細胞與組織間的相互作用[5]。而這些研究主要是采取同一培養(yǎng)瓶、細胞相互接觸的方法進行共培養(yǎng)，針對的對象主要為神經(jīng)元，關(guān)于NSCs共培養(yǎng)研究較少。我們根據(jù)孔徑0.4 μm的Transwell半透膜僅可以通過培養(yǎng)液而不能透過細胞的特點，在6孔塑料培養(yǎng)板上架起Transwell小室，構(gòu)建NSCs與小膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)體系。與以往研究不同的是，我們采用Transwell這種特殊裝置，實現(xiàn)非接觸性細胞通訊，觀察共培養(yǎng)體系中小膠質(zhì)細胞在Aβ1-42作用下對NSCs生存的影響。為此，獲得高純度的神經(jīng)干細胞和小膠質(zhì)細胞是本研究構(gòu)建共培養(yǎng)體系成功與否的關(guān)鍵。

Nestin(巢蛋白)是一種中間絲類型的蛋白，能夠特異性表達在神經(jīng)上皮干細胞上的一種分子標(biāo)記物，是目前鑒定神經(jīng)干細胞的主要特征性標(biāo)記物[6]。本研究從新生SD乳鼠的海馬組織中分離出單細胞重懸于無血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)第3 d即可見神經(jīng)細胞球，懸浮于培養(yǎng)液中。神經(jīng)球經(jīng)0.125 %胰酶消化成單個細胞懸液進行傳代培養(yǎng)，3～4 d后重新形成神經(jīng)球，數(shù)量明顯多于第1代，免疫熒光鑒定呈nestin陽性，證實具有神經(jīng)干細胞特性。神經(jīng)干細胞除能表達nestin外，在功能上具有增殖分化的能力，因此，我們繼續(xù)觀察了培養(yǎng)的細胞球增殖分化的能力。將原細胞球分散成單細胞后，用10 μmol/L BrdU標(biāo)記24 h后全量換液培養(yǎng)4 d后，行免疫熒光鑒定。結(jié)果顯示絕大多數(shù)細胞呈BrdU陽性，說明它們是具有分裂、增殖能力的細胞。當(dāng)神經(jīng)球重懸于含10% FBS的DMEM/F12并接種于預(yù)先經(jīng)多聚賴氨酸包被的24孔板時，神經(jīng)球開始貼壁分化，可見細胞從球體周圍逐漸遷移，隨著時間的推移出現(xiàn)突起細胞并漸有突起增長、相互連接交織成網(wǎng)，形成可表達MAP-2、GFAP的神經(jīng)元樣細胞和膠質(zhì)細胞樣細胞，提示培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞具有分化為神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細胞的潛能，從而也進一步證實了神經(jīng)干細胞的多向分化潛能。

圖7各組MAP-2及CHAT陽性細胞熒光表達率的比較

表1各組神經(jīng)干細胞凋亡率的比較

GroupApoptoticrateNSCscontrol5.76±2.01Aβ1-42+NSCs25.77±0.48**MicrogliaandNSCscoculture8.43±5.35##Aβ1-42+microgliaandNSCscoculture45.19±1.02**##

**P<0.01vsNSCs control;##P<0.01vsAβ1-42+NSCs.

關(guān)于小膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)，目前學(xué)者們主要是采用搖床振搖和利多卡因分離的方式從混合培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)細胞中分離小膠質(zhì)細胞[4, 7]。本研究考慮到分離的小膠質(zhì)細胞純度會直接影響到Transwell體系的建立，我們采用了溫和的手搖法從混合培養(yǎng)的神膠質(zhì)細胞中分離小膠質(zhì)細胞。該方法收集到的小膠質(zhì)細胞生長狀態(tài)較佳，細胞胞體呈圓型并具有較好的折光性，30 min內(nèi)即可貼壁。同時，收獲的小膠質(zhì)細胞貼壁培養(yǎng)30 min后全量換液，去除未貼壁的細胞可達到純化的目的。繼續(xù)培養(yǎng)2 d后，可出現(xiàn)較多較短突起，少數(shù)細長突起，部分為圓型或橢圓形。經(jīng)免疫熒光鑒定，分離的細胞有95% 可表達CD11b/c陽性，即為小膠質(zhì)細胞。本研究體外獲得了高純度、高活力的神經(jīng)干細胞和小膠質(zhì)細胞，為Transwell共培養(yǎng)體系的建立提供了良好的細胞來源。

體內(nèi)外研究均提示Aβ可激活小膠質(zhì)細胞[8]，激活的小膠質(zhì)細胞后可釋放多種細胞因子、趨化因子、補體及其激活物，導(dǎo)致非特異性炎細胞浸潤，產(chǎn)生慢性炎性反應(yīng)[9]。這種效應(yīng)能否破壞腦內(nèi)神經(jīng)細胞生存和分化環(huán)境，造成內(nèi)源性或移植的外源性神經(jīng)干細胞不能發(fā)揮正常功能，導(dǎo)致AD腦內(nèi)丟失的神經(jīng)細胞得不到及時補充，目前尚未得到證實。因此，本實驗建立神經(jīng)干細胞和小膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)體系，先觀察了Aβ1-42作用于小膠質(zhì)細胞前后神經(jīng)干細胞的增殖、分化情況。結(jié)果顯示未經(jīng)Aβ1-42作用的小膠質(zhì)細胞對共培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞的增殖無明顯影響作用，以往的研究也有類似報道[10]；但神經(jīng)干細胞分化成神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的比例下降，這可能與正常情況下小膠質(zhì)細胞分泌某些因子有關(guān)。研究表明Aβ1-42能夠直接抑制神經(jīng)干細胞的增殖，促進其凋亡，減少其分化成神經(jīng)元、膽堿能神經(jīng)元的比例。在神經(jīng)干細胞與小膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)體系中，Aβ1-42抑制神經(jīng)干細胞自我更新能力及多向分化潛能的這種作用尤為明顯，證實了Aβ1-42對神經(jīng)細胞生存抑制的作用可能通過小膠質(zhì)細胞而加強。也許正是這些因素，導(dǎo)致AD腦內(nèi)微環(huán)境改變，影響內(nèi)源性或外源性NSCs的生存。這既構(gòu)成目前臨床上應(yīng)用NSCs治療AD的嚴峻的挑戰(zhàn)，也為AD的進一步治療提供了新的線索。

因此，通過干預(yù)小膠質(zhì)細胞改善患者腦內(nèi)“微環(huán)境”，促進內(nèi)源性或外源性NSCs生存，是干細胞移植治療神經(jīng)元退行性疾病的有效途徑。而Aβ介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與NSCs失能之間的關(guān)系及作用機制還須進一步深入研究。

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EffectsofAβ1-42-inducedmicroglialcellsonsurvivalofneuralstemcellsinvitro

WEI Mei-dan1, LIN Ji-zong2, ZHU Ning1, WANG Ke-wan3, WANG Yong1

(1DepartmentofPharmacy,ZhujiangHospital,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510282,China;2DepartmentofHepatobiliarySurgery,TheThirdAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510630,China;3DepartmentofNeurosurgery,SouthernHospital,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China.E-mail:yongwh2005@163.com)

AIM: To explore the effects of β-amyloid protein 1-42 (Aβ1-42)-induced microglia on the survival of cultured neural stem cells (NSCs)invitro.METHODSUsing the Transwell chambers to build a coculture system of NSCs and microglia, we detected the proliferation, differentiation and apoptosis of the NSCs with the microglia before and after induction by Aβ1-42.RESULTSCompared with non-intervention group, the proliferation rate of NSCs in Aβ1-42intervention coculture group decreased, as well as the positive expression rates of microtubule-associated protein 2 (MAP-2) and choline acetyltransferase.CONCLUSIONThe inflammation mediated by Aβ1-42inhib their the proliferation of NSCs and induces their apoptosis. Inflammation also significantly reduces the ratio of NSCs differentiating to neurons, especially to cholinergic neurons.

Microglial; Neural stem cells; Alzheimer disease; Amyloid beta-protein

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2012.04.018