王雪玲，王保梅，張永澤，陳劍華，張新國，劉紅珍，姚艷冰，熊南燕，霍忠超＊

（1.河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河北 邯鄲056029；2.河北工程大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院）

由于臨床上廣譜抗生素、皮質(zhì)激素、免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，甚至是濫用抗生素引起人體菌群失調(diào)、免疫力降低，種種因素導(dǎo)致念珠菌的感染率呈上升趨勢［1］，抗真菌藥物越來越多地應(yīng)用于臨床，念珠菌耐藥性日益增強，念珠菌感染成為醫(yī)源性感染的主要病原菌之一［2，3］。

青春期在校大學(xué)生性激素含量正處于較高水平，分泌物旺盛，不良的衛(wèi)生習(xí)慣、生活習(xí)慣、有限的洗浴條件及不潔性生活史等等因素極易導(dǎo)致念珠菌的感染［4］。微生物實驗室加強對念珠菌培養(yǎng)分離鑒定及耐藥性分析的工作對臨床感染性疾病病原學(xué)診斷和合理使用抗真菌藥物起著至關(guān)重要的作用。本課題組隨機采集在校大學(xué)生的1270份標(biāo)本，分離出175株念珠菌，對其種類及耐藥性分析報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源 隨機抽取某醫(yī)學(xué)院在校大學(xué)生1270人的外陰分泌物、陰道分泌物、尿道分泌物、尿液、糞便等標(biāo)本共1270份。

1.1.2 菌株來源 175株念珠菌中，從外陰分泌物標(biāo)本分離出84株、陰道分泌物分離出60株、尿道分泌物分離出16株、尿液分離出7株、糞便分離出5株、其他標(biāo)本分離出3株。見表1。

1.1.3 培養(yǎng)基 血平板、麥康凱、巧克力、沙保羅氯霉素培養(yǎng)基（法國—生物梅里埃公司）、玉米培養(yǎng)基（自制）、科瑪嘉念株菌顯色培養(yǎng)基（CHRO－Magar法國科瑪嘉公司生產(chǎn)）等 。

1.1.4 API－20CAUX 念珠菌鑒定試條（法國—生物梅里埃公司）。

1.1.5 抗真菌藥物ATB－Fungus念珠菌藥敏試條（法國生物梅里埃公司生產(chǎn)）、藥敏紙片（25μg／片，由BBL公司提供），包括藥物有兩性霉素B（AMB）、5－氟胞嘧啶（5－FC）、酮康唑（KTC）、益康唑（ECO）、咪康唑（MTC）、制霉菌素（NYS）、氟康唑（FLC）。

1.1.6 質(zhì)控菌株 白色念珠菌ATCC90028；熱帶念珠菌ATCC 13803；光滑念珠菌ATCC22019；克柔念珠菌ATCC6258。

1.2 方法

1.2.1 念珠菌培養(yǎng)分離鑒定 將標(biāo)本分別接種于麥康凱、血平板、巧克力、沙保羅氯霉素培養(yǎng)基培養(yǎng)基，在28－35℃、5.0%CO2孵箱培養(yǎng)24－48h，挑取可疑菌落涂片，革蘭染色確認(rèn)為念珠菌后轉(zhuǎn)種科瑪嘉（CHRO－Magar）念珠菌顯色培養(yǎng)基和玉米培養(yǎng)基，同時采用API－20CAU X念珠菌鑒定試劑條進(jìn)行鑒定。

1.2.2 藥敏試驗

1.2.2.1 微量稀釋法 將分離出的念珠菌用無菌鹽水配制為2.0麥?zhǔn)蠁挝痪鷳乙海∫欢烤旱紸TB－Fungus藥敏試條中，30℃孵育24h，判讀結(jié)果。

1.2.2.2 紙片擴(kuò)散法 將分離出的白色念珠菌采用2003年美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（CLSI）認(rèn)可的酵母菌紙片擴(kuò)散法敏感試驗指南，將白色念珠菌接種液用無菌鹽水配制成0.5麥?zhǔn)蠞岫?，用無菌棉簽蘸取接種液均勻涂布在MH亞甲藍(lán)藥敏平板上，待表面干后貼上七種藥敏紙片，35℃孵育18h－24h判讀結(jié)果。如24h生長不良，延長至48h。根據(jù)試劑的說明書判定結(jié)果。紙片擴(kuò)散法操作簡便，結(jié)果清晰易讀取，在國外被廣泛用于臨床實驗室［5］。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)本分離 從1270份標(biāo)本中分離出175株念珠菌，其中白色念珠菌107株（61.19%），熱帶念珠菌31株（17.91%），克柔念珠菌21株（11.94%），光滑念珠菌8株（4.48%）其他念珠菌8株（4.48%）。見表1。

2.2 4種念珠菌對臨床常用七種抗真菌藥物的耐藥情況 見表2。

2.3 107株白色念珠菌對臨床常用七種抗真菌藥物的敏感率（%） 見表3。

表1 175株念珠菌分離鑒定結(jié)果

表2 4種念珠菌對抗真菌藥物的耐藥率

表3 107株白色念珠菌對常用抗真菌藥物的敏感率（%）

3 討論

從表1可見從標(biāo)本中分離到白色念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌，過去認(rèn)為念珠菌感染主要由白色念珠菌引起［6］，而今念珠菌感染類型發(fā)生了變遷，熱帶念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌檢出率大大增加，也是引起感染的重要病原菌［7］。這一點應(yīng)引起臨床醫(yī)師和臨床實驗室微生物檢驗者高度重視。

從表2、表3可見4種念珠菌對7種抗真菌藥物體外抑菌試驗結(jié)果表明兩性霉素B、5－氟胞密啶、制霉菌素、氟康唑這4種抗真菌藥物目前對念珠菌活性較強，但兩性霉素B毒副作用大，臨床用量少［8］；而氟康唑由于具有藥代動力學(xué)優(yōu)勢和不良反應(yīng)少、抗真菌譜廣、對人體副作用小較安全、口服吸收好，能廣泛滲透體液組織器官，對念珠菌屬療效好，目前臨床廣泛使用［9］，正是由于大量或不合理使用，部分念珠菌已出現(xiàn)耐藥性，其耐藥現(xiàn)象有越來越嚴(yán)重趨勢，已引起國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注［10］。由于制霉菌素口服不易吸收，只對腸道與其接觸的真菌有效，而兩性霉素B毒性較大，因而氟康唑目前仍是抗真菌治療的首選藥物［11］。4種念珠菌對酮康唑、益康唑、咪康唑耐藥性較強，所以臨床醫(yī)師應(yīng)重視真菌培養(yǎng)和真菌藥敏試驗，參照藥敏結(jié)果，針對性選擇有效的抗真菌藥物，及時治療真菌感染性疾病。微生物實驗室要加強念珠菌的培養(yǎng)分離鑒定藥敏研究工作，積極開展真菌耐藥性監(jiān)測，給臨床提供用藥依據(jù)，指導(dǎo)臨床合理使用抗真菌藥物，有效治療真菌感染性疾病，有效控制和減少真菌耐藥性產(chǎn)生很有必要性。提醒在校大學(xué)生改變不良生活、衛(wèi)生習(xí)慣從而減少感染白色念珠情況的發(fā)生。

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［4］陳東科，許宏濤，陶鳳容，等.深部酵母菌醫(yī)院感染的病原學(xué)變化及耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2002，12（10）：785.

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