趙曉麗 薛毅博

河南省駐馬店市食品藥品檢驗所，河南駐馬店 463000

中藥復(fù)方制劑中黃芩苷含量的HPLC檢測法的建立

趙曉麗 薛毅博

河南省駐馬店市食品藥品檢驗所，河南駐馬店 463000

目的 建立中藥復(fù)方制劑中黃芩苷含量的HPLC檢測法。 方法 采用高效液相色譜法檢測以清開靈顆粒為代表的中藥復(fù)方制劑中黃芩苷的含量，流動相為0.5%磷酸水溶液-甲醇（58︰42），檢測波長280 nm，流速為1.0 mL/min，采用外標(biāo)峰面積法計算清開靈顆粒中黃芩苷的含量。 結(jié)果 黃芩苷與有關(guān)物質(zhì)完全分離，在0.101 9～1.019 μg范圍內(nèi)峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（R2=0.999 9，n=5），平均回收率為99.44%（RSD=0.86%，n=5）。 結(jié)論 本實驗方法簡單、迅速、專一性強，適用于中藥復(fù)方制劑中黃芩苷的含量檢測。

高效液相色譜法；中藥復(fù)方制劑；黃芩苷；含量檢測

中藥復(fù)方制劑中成分復(fù)雜，干擾因素較多，檢測黃芩苷難度大。中藥復(fù)方制劑清開靈顆粒，本身成分復(fù)雜，由膽酸、豬去氧膽酸、水牛角、黃芩苷、金銀花等藥加工制成顆粒，具有中藥復(fù)方制劑的典型特點，且顆粒中輔料較多，清開靈顆粒主要通過檢測黃芩苷的含量作為質(zhì)量控制的的標(biāo)準(zhǔn)，國家規(guī)定要求每顆顆粒中黃芩苷的含量＞5 mg。本研究以清開靈顆粒為中藥復(fù)方制劑為代表，建立高效液相檢測中藥復(fù)方制劑中黃芩苷的含量的研究方法。建立起的中藥復(fù)方制劑中黃芩苷含量的HPLC檢測方法具有一般性，對于其他中藥復(fù)方制劑的的黃芩苷含量的HPLC檢測方法也具有較重要的參考價值，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與藥品

Agilent1260型高效液相色譜儀；黃芩苷對照品（批號：0715-9915，為含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇為天地色譜純級別，其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

2 色譜條件[1]

色譜柱：大連伊力特C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.5%磷酸水溶液-甲醇（58︰42）；流速1.0 mL/min；紫外檢測波長280 nm，進(jìn)樣量10 μL，柱溫：30.0℃。

3 方法與結(jié)果

3.1 對照品溶液制備[2]

精密稱取黃芩苷對照品（在五氧化二磷減壓干燥器重干燥12 h的黃芩苷[3]）適量，加50%甲醇溶液制備成50 μg/mL溶液，即可。

3.2 供試品溶液制備

精密稱取本品0.5 g，小心加到50 mL量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度線，混合均勻，取濾液即可。

3.3 陰性對照品制備

按清開靈顆粒制備工藝，取不含黃芩的處方的其他各藥，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品。

3.4 線性關(guān)系考察[4]

精密稱取黃芩苷對照品（在五氧化二磷減壓干燥器重干燥24 h的黃芩苷）10.19 mg置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度線，混合搖勻，為對照品貯備液，然后再分別吸取對照品貯備液 1、2、3、5、10 mL 置于 20 mL 的量瓶中，加 50%甲醇溶液稀釋至刻度，混合均勻。然后用進(jìn)樣針分別吸取上述各對照品溶液各10 μL進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以10 μL中黃芩苷進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，各濃度的色譜峰面積（A）均值為縱坐標(biāo)，計算回歸方程。見表1。研究結(jié)果表明在0.101 9～1.019 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：A=2 905.842C+12.324，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9。

表6 回收率測定

表1 線性關(guān)系考察（n=5）

3.5 穩(wěn)定性試驗

精密量取本品0.5 g按供試品溶液的制備，分為日間穩(wěn)定性檢測和日內(nèi)穩(wěn)定性檢測，日內(nèi)穩(wěn)定性檢測在0、6、12、18、24 h時間點取供試品溶液10 μL注入高效液相中檢測，檢測的結(jié)果見表2。日間穩(wěn)定性檢測，將分裝供試品保存于-20 ℃冰箱中，每天取1次供試品10 μL，連續(xù)4 d注入高效液相中檢測，檢測結(jié)果見表2、3。

表2 日內(nèi)穩(wěn)定性試驗結(jié)果

表3 日間穩(wěn)定性試驗結(jié)果

3.6 精密度試驗

用進(jìn)樣針精密吸取50.95 mg/L 10 μL黃芩苷對照品溶液注入液相色譜儀中，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄各峰的峰面積面積，結(jié)果見表4。

表4 精密度檢測

3.7 重復(fù)性試驗

精密量取本品0.5 g，按“供試品溶液的制備”的方法制備5份平行的供試品溶液，分別測定各份中黃芩苷的含量，結(jié)果見表5。

表5 重復(fù)性檢驗

3.8 加樣回收試驗

精密稱取黃芩苷對照品（在五氧化二磷干燥24 h）13.00 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度線，混合均勻得對照品溶液。本研究采用加樣回收測定法，精密量取已測知含量（5.21 mg/g）的本品0.25 g，置50 mL量瓶中，再精密加入上述對照品溶液1 mL，用50%甲醇溶液稀釋至刻度，混合均勻，得供試品溶液，然后平行分為5份，進(jìn)樣10 μL依照本研究方法測定，結(jié)果見表6。

3.9 含量測定

精密量取本品0.5 g，按“供試品溶液的制備”項方法制備3批供試品溶液，進(jìn)行測定，結(jié)果見表7。

表7 樣品中黃芩苷含量的測定

4 討論

本檢驗方法在確定好各項條件后，經(jīng)過多次實驗，能夠完全將待測組分分離，較好的檢測了清開靈顆粒中黃芩苷的含量，對于藥品的質(zhì)量控制有著一定的意義。該研究中流動相是實驗成功的關(guān)鍵，磷酸水溶液和甲醇的比例對于研究的成功起到了關(guān)鍵作用，其中磷酸的含量對于研究中黃芩苷的出峰時間也有較大的影響。通過實驗前研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)甲醇含量過高時，復(fù)方制劑中的各峰分離度不好，R＜1.5，各峰在較短時間內(nèi)出現(xiàn)，各峰擁擠在一起，出峰時間都較短，不利于實驗的分析，對結(jié)果影響較大。當(dāng)甲醇含量偏低時，復(fù)方制劑中的各峰分離度都較好，基本都能達(dá)到完全分離，R＞1.5，但是中藥制劑中成分較多，各峰完全出峰時間較長，分析時間較長，不利于實驗的進(jìn)行，而且也增加了研究的耗材，提高了研究的成本。流動相的pH值對于該研究的影響也較大，流動相的pH過大或者過小是都不利于研究的進(jìn)行。綜合考慮各項因素，筆者采用的流動相比例為0.5%磷酸水溶液-甲醇（58︰42），流速 1.0 mL/min，檢測波長 280 nm，進(jìn)樣量 10 μL，柱溫：30.0℃。

該研究中，標(biāo)準(zhǔn)品的定量對于研究結(jié)果的影響較大，筆者采用第10版藥典要求，將黃芩苷對照品在五氧化二磷干燥12 h后再準(zhǔn)確稱量，這樣可以有效避免水分對于該研究的影響。

[1] 錢江.HPLC法測定銀黃口服液中綠原酸和黃芩苷的含量[J].中成藥，2003，25（2）：117-119.

[2] 林啟壽.中草藥有效成分化學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：279-281.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010版）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：1321-1324.

[4] 趙陸華.高效液相色譜法分析中成藥成分手冊[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：129-130.

Establishment of HPLC detection method for the Baicalin content in Chinese herbal compound

ZHAO Xiaoli XUE Yibo
Zhumadian Institue for Food and Drug Control of Henan Province, Zhumadian 463000,China

ObjectiveTo establish the detection method for the Baicalin content in Chinese herbal compound.MethodsThe baicalin in Chinese herbal compound which presented by Qingkailing granules was detected via HPLC method in this study.The mobile phases was 0.5% phosphoric acid aqueous solution-methanol(58:42), measurement wavelength was 280 nm and flow rate was 1.0 mL/min. The Baicalin content in Qingkailing granules was calculated by external standard peak area method.ResultsThe Baicalin was separated from related substances, peak area has a good linear relation with concentration in the range of 0.101 9 to 1.019 μg(R2=0.999 9,n=5).The average recovery rate was 99.44%(RSD=0.86%,n=5).ConclusionThis method is a breif, rapid, specific characteristic method. And it's appropriate for the Baicalin detection of Chinese herbal compound.

HPLC method; Chinese herbal compound; Baicalin; Content detection

R286

B

2095-0616（2012）17-105-02

2012-06-12）