□張幼芳

（浙江警察學(xué)院，浙江 杭州 310053）

浙江純種犬在9個(gè)STR基因座上的遺傳多態(tài)性研究*

□張幼芳

（浙江警察學(xué)院，浙江 杭州 310053）

犬與人類關(guān)系密切，涉及犯罪現(xiàn)場(chǎng)的犬的生物性物證可以作為法庭證據(jù)。為積累犬生物物證個(gè)體識(shí)別和親子鑒定的群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)，本文采用美國(guó)AB公司的犬基因分型試劑盒，調(diào)查浙江地區(qū)72頭純種犬的9個(gè)STR基因座（PEZ1、FHC2054、FHC2010、PEZ5、PEZ20、PEZ12、PEZ6、PEZ8、FHC2079）的遺傳多態(tài)性，9個(gè)STR基因座的累積個(gè)體識(shí)別率（TDP）為0.999991823，累積非父排除率（CPE）為0.975,平均雜合度和多態(tài)信息量分別為0.515和0.563，偶合率為8.177×10-6，表明9個(gè)STR基因座可用于犬的個(gè)體識(shí)別和親子鑒定。

犬；浙江純種犬；STR；遺傳多態(tài)性；個(gè)體識(shí)別；親權(quán)鑒定

在案件偵辦中，動(dòng)物物證的價(jià)值已逐漸被人們所認(rèn)識(shí)和利用，涉及犯罪現(xiàn)場(chǎng)的動(dòng)物物證可以作為法庭證據(jù)。犬為國(guó)內(nèi)外最常見的寵物，與人類生活密切相關(guān)，因而涉及犬生物性物證的案件時(shí)有發(fā)生，國(guó)內(nèi)外均有將犬的生物性物證作為定案證據(jù)的報(bào)道[1,2,3]，對(duì)該類物證的應(yīng)用需要群體遺傳學(xué)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。本文應(yīng)用美國(guó)AB公司的犬基因分型試劑盒，對(duì)浙江地區(qū)72頭純種犬的9個(gè)STR基因座進(jìn)行遺傳學(xué)調(diào)查，為犬生物性物證的個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定提供群體遺傳學(xué)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

一、材料

（一）實(shí)驗(yàn)樣本。72頭純種犬來自浙江省數(shù)個(gè)警犬基地，包括史賓格犬14頭，拉布拉多犬15頭，德國(guó)牧羊犬36頭，昆明犬7頭，取唾液樣本，-20℃保存。

（二）主要儀器。ABI 9700 PCR擴(kuò)增儀，ABI 3100-A遺傳分析儀。

（三）主要試劑。AB公司犬基因分型試劑盒(Canine Genotyping Kit)，內(nèi)含10對(duì)引物混合物，dNTP混合物，MgCl2，TaqGold DNA聚合酶，PCR緩沖液，犬DNA陽(yáng)性對(duì)照。

二、方法

（一）提取DNA。用常規(guī)Chelex-100法提取犬唾液樣本DNA。

（二）PCR擴(kuò)增。使用Canine Genotyping Kit(美國(guó)AB公司)擴(kuò)增模板DNA,采用10μl反應(yīng)體系，內(nèi)加 PCR緩沖液 1.4μl，MgCl2 0.36μl，dNTP 2.2μl，TaqGold DNA聚合酶0.36μl，引物混合物2.8μl，1 μl模板DNA,用蒸餾水補(bǔ)足到10μl。

擴(kuò)增條件為預(yù)變性95℃10min，共35個(gè)熱循環(huán)，前20個(gè)循環(huán)的參數(shù)為95℃30sec，58℃30sec，72℃1min，后15個(gè)循環(huán)的參數(shù)為95℃30sec，56℃sec，72℃1min，72℃30min,4℃保存。

（三）擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)。取1μlPCR擴(kuò)增產(chǎn)物加入12μl去甲酰胺和ROX-500內(nèi)標(biāo)的混合物，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在 3100-A型遺傳分析儀上電泳檢測(cè)，GeneMapper ID v3.2軟件基因分型，記錄樣本各基因座的等位基因。

（四）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。用GENEPOP軟件進(jìn)行遺傳學(xué)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，有關(guān)數(shù)據(jù)計(jì)算參見文獻(xiàn)［4］。

三、結(jié)果

（一）等位基因及基因頻率。72頭純種犬的9個(gè) STR基因座所檢測(cè)到的等位基因和基因頻率見表1，圖1為一頭犬的9個(gè)STR基因座檢測(cè)圖譜。

表1 72頭純種犬在9個(gè)STR基因座的等位基因及其頻率分布

圖1 一頭犬的9個(gè)STR基因座檢測(cè)圖譜

（二）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。9個(gè)STR基因座的雜合度（H）、偶合率（Pm）、個(gè)體識(shí)別率（DP）、多態(tài)信息含量（PIC）、非父排除率（PE）見表2,9個(gè)STR基因座的累積個(gè)體識(shí)別率（TDP）為0.999991823，累積非父排除率（CPE）為0.975，偶合率為8.177×10-6。

表2 9個(gè)STR基因座的H、Pm、DP、PIC、PE、TDP、CPE

四、討論

通過分析72頭純種犬的9個(gè)STR基因座的遺傳多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)FHC2054、FHC2010、PEZ6、PEZ8等4個(gè)基因座PIC＞0.5，屬于高度多態(tài)性基因座，其余PEZ1、PEZ5、PEZ20、PEZ12、FHC2079等6個(gè)基因座0.25＜PIC＜0.5，為中度多態(tài)性基因座，9個(gè)STR基因座的平均雜合度和多態(tài)信息量分別為 0.515和0.563,適于犬的個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定，研究結(jié)果與王海生等報(bào)道[5]基本一致。

研究表明，與用于人個(gè)體識(shí)別的STR商用試劑盒相比較，犬的基因分型試劑盒個(gè)體識(shí)別率相對(duì)較低，這可能與我們進(jìn)行群體調(diào)查的樣本有關(guān)，一是樣本量過小，二是個(gè)體間可能存在親緣關(guān)系。由于犬近親繁殖現(xiàn)象明顯，要準(zhǔn)確進(jìn)行犬的個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定，應(yīng)探索更多多態(tài)性高的STR基因座。

［1］Savolainen P,Lundeberg J.Forensic ev idence based on mtDNA from dog and wolf hair.J Forensic Science［J］.1999, 44(1):77-81.

［2］王海生,王祥,葛臺(tái)明,等.利用犬STR基因座檢驗(yàn)認(rèn)定犬精斑1例［J］.刑事技術(shù),2004,(1):56.

［3］Eichmann C,Berger B,Reinhold M,et al.Canine specific STR typing of saliva traces on dog bite wounds［J］.Int J legal Med，2004,118:337-342.

［4］Raymond Mamp;Rousset F.Genepop (version 1.2): population genetics software for exact tests and ecumenicism［J］.Journal of Heredity.1995,86:248-249.

［5］王海生,王祥,張文平,等.湖北地區(qū)德國(guó)牧羊犬10個(gè)微衛(wèi)星DNA基因座的遺傳多態(tài)性研究［J］.刑事技術(shù),2003,(2):12-14.

Q523

A

1674-3040（2012）02-0046-03

2012-03-06

張幼芳，浙江警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)系教授。

*本文系浙江省教育廳科研項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：Y20084732）之研究成果。

（責(zé)任編輯：王玉葉）