邱宏聰，孟夏臨

(1.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530022)

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(桂科攻：0424008-3C)

*

邱宏聰, Tel:(0771)5883405,E-mail:qiuhongcong@163.com

HPLC測(cè)定五淋化石膠囊中延胡索乙素的含量△

邱宏聰1,2*，孟夏臨1

(1.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530022)

目的建立五淋化石膠囊中延胡索乙素的含量測(cè)定方法。方法采用Kromasil Cl8色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流動(dòng)相甲醇-磷酸鹽溶液(磷酸二氫鉀0.2 g和磷酸氫二鉀9.6 g混合溶解于1 L水中)(60∶40)，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。結(jié)果延胡索乙素在0.045～0.980 μg線性關(guān)系良好，r=0.999 8，平均回收率為98.44%，RSD=1.35%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可作為五淋化石膠囊質(zhì)量控制方法。

五淋化石膠囊；高效液相色譜法；延胡索乙素

五淋化石膠囊由延胡索(醋制)、廣金錢草、雞內(nèi)金、石韋等11味中藥制備而成，具有通淋利濕，化石止痛之功效，用于淋癥，癃閉，尿路感染，尿路結(jié)石，前列腺炎，膀胱炎，腎盂腎炎，乳糜尿。作者曾進(jìn)行五淋化石膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，用HPLC測(cè)定槲皮素的含量[1]。本實(shí)驗(yàn)參考《中國(guó)藥典》2010年版一部延胡索含量測(cè)定方法[2]及相關(guān)文獻(xiàn)，建立HPLC測(cè)定五淋化石膠囊中延胡索乙素含量的方法，可更全面地控制本品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

日本島津公司LC-20A高效液相色譜儀；延胡索乙素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：0726-200107，供含量測(cè)定用)；五淋化石膠囊(本單位自制，規(guī)格：每粒裝0.3 g，批號(hào)：091001，091002，091003)；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-磷酸鹽溶液(磷酸二氫鉀0.2 g和磷酸氫二鉀9.6 g混合溶解于1 L水中)(60∶40)；流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，進(jìn)樣量為10 μL。理論板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取延胡索乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取膠囊10粒，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液50 mL，稱定重量，冷浸1 h后加熱回流1 h，放冷，稱定重量，用濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液20 mL，用乙醚萃取3次(25，20，20 mL)，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見圖1。延胡索乙素主峰的保留時(shí)間約為21 min，陰性樣品的色譜圖中與延胡索乙素對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間附近無干擾。

A.延胡索乙素對(duì)照品 B.供試樣品 C.陰性樣品 1.延胡索乙素圖1 五淋化石膠囊HPLC圖

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取延胡索乙素對(duì)照品貯備溶液(0.245 mg·mL-1) 0.5，1，2.5，5，10 mL對(duì)照品溶液，分別置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別按上述色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=82 766X-4 002，r=0.999 8，表明延胡索乙素在0.045～0.980 μg線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一延胡索乙素對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果RSD=0.58%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取091001批樣品，制備供試品溶液1份，分別在0，1，2、4、8，12 h測(cè)定，結(jié)果RSD=0.73%，表明樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取091001批樣品6份，制備供試品溶液6份，按擬定方法測(cè)定，結(jié)果平均含量為0.12 mg·g-1，RSD=1.60%。

2.9 回收率試驗(yàn)

取091001批6份樣品，每份取約1 g，精密稱定，分別精密加入延胡索乙素對(duì)照品溶液(濃度為2.45 μg·mL-1)50 mL，按供試品溶液制備項(xiàng)下方法處理，測(cè)定含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品測(cè)定

取3批五淋化石膠囊樣品(批號(hào)：091001，091002，091003)，按上述方法測(cè)定延胡索乙素的含量，結(jié)果分別為37，38，35 μg/粒。

表1 延胡索乙素回收率試驗(yàn)

注：延胡索乙素對(duì)照品加入量均為0.122 5 mg

3 討論

方中延胡索乙素具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛的作用[3]，為主要活性成分之一。為更全面地控制本品的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC測(cè)定延胡索乙素含量的方法。

方中延胡索用量少，延胡索乙素含量相對(duì)較低，考察提取溶媒時(shí)，發(fā)現(xiàn)只用濃氨試液-甲醇不能完全提取[2]。延胡索乙素在氨堿性條件下以游離堿形式存在，在乙醚中有較好的溶解度，因此提取方法采用氨堿性條件下用乙醚萃取。

在流動(dòng)相選擇時(shí)采用混合磷酸鹽溶液，其分離效果比用三乙胺[4]調(diào)節(jié)好，因此采用甲醇-磷酸鹽溶液(磷酸二氫鉀0.2 g和磷酸氫二鉀9.6 g混合溶解于1 L水中)(60∶40)作為流動(dòng)相。

[1] 邱宏聰,覃瀟,孟夏臨,等.五淋化石膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].山東中醫(yī)雜志,2007,26(8):571-572.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：130.

[3] 王宜祥,何忠平.延胡索不同提取液對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響[J].中藥藥理與臨床,2005,21(5)：34.

[4] 朱才慶,吳迪,李艷,等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方元胡止痛膠囊中延胡索乙素的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，(7):1727-1728.

DeterminationofTetrahydropalmatineinWulinHuashiCapsulebyHPLC

QIU Hong-cong1,2，MENG Xia-lin1

(1.GuangxiInstituteofTraditionalMedicalandPharmaceuticalSciences,Nanning530022,China; 2.GuangxiKeyLaboratoryofTradtitonalChineseMedicaineQualityStardands,Nanning530022,China)

Objective:To establish a HPLC method for determination of tetrahydropalmatine in Wulin Huashi Capsules.MethodsKromasil C18(250 mm ×4.6 mm,5 μm)was adopted and mobile phase consisted of methanol-phosphate solution(60∶40). Flow rate was 1.0 mL·min-1. Detection wavelength was 280 nm.ResultsThe linear ranges were 0.045～0.980 μg(r=0.999 8). The reproducibility was 98.44%(RSD=1.35%).ConclusionThe method is simple, accurate, and suitable for the quality control of Wulin Huashi Capsules.

Wulin Huashi Capsule；HPLC；Tetrahydropalmatine

2012-05-25)