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        藍萼香茶菜不同部位藍萼甲素的含量測定及采收期考察

        2012-11-03 00:54:54王強郎軼詠任常順朱曉紅于曉黎
        中國現(xiàn)代中藥 2012年11期

        王強,郎軼詠,任常順,朱曉紅,于曉黎

        (解放軍第202醫(yī)院,遼寧 沈陽 110003)

        *

        郎軼詠,E-mail:langyiyong0452@126.com

        藍萼香茶菜不同部位藍萼甲素的含量測定及采收期考察

        王強,郎軼詠*,任常順,朱曉紅,于曉黎

        (解放軍第202醫(yī)院,遼寧 沈陽 110003)

        目的考察藍萼香茶菜不同部位藍萼甲素的含量及最適采收期。方法采用反相高效液相色譜法,色譜柱為島津C18ODS,流動相為甲醇-水(60∶40),流速為0.9 mL·min-1,柱溫為25 ℃,于波長234 nm條件下對樣品中藍萼甲素的含量進行測定。結(jié)果以葉中藍萼甲素含量最高,且7、8月份采集的葉中藍萼甲素含量較高。結(jié)論藍萼香茶菜應在夏季采收,并以葉入藥為宜。

        藍萼香茶菜;藍萼甲素;高效液相色譜法

        唇形科香茶菜屬植物在我國資源豐富,藍萼香茶菜Rabdosiajaponica(Burm.f.)Hara var.glaucocalyx(Maxim.)Hara有較好的心血管作用,系我國首先發(fā)現(xiàn)[1-3],從該植物中分離得到的二萜單體藍萼甲素glycocalyxin A具有顯著的增加小鼠心肌營養(yǎng)性血流量作用和抗血小板凝集作用。藍萼甲素是該植物的有效成分之一[4-5]。為了了解該成分在植物體內(nèi)的分布及不同生長期的消長情況,確定正確的采摘期及最佳入藥部位,以便更好地利用植物資源,我們研究建立了藍萼香茶菜中藍萼甲素含量測定方法,考察藍萼香茶菜不同部位及不同采收時間的藍萼甲素含量。

        1 儀器與試劑

        高效液相色譜儀LC-20AT(日本島津)。藍萼甲素對照品(解放軍第二軍醫(yī)大學天然藥化教研室提供,高效液相色譜歸一化法測定純度為99.3%),藍萼香茶菜根、莖、葉分別于2010年7~9月采自遼寧千山、沈陽、丹東、本溪、撫順,采樣信息見表1。經(jīng)第二軍醫(yī)大學藥學院鄭漢臣教授鑒定為藍萼香茶菜Rabdosiajaponica(Burm.f.)Hara var.glaucocalyx(Maxim.)Hara的根、莖、葉。流動相為色譜用甲醇,其余試劑均為分析純。

        表1 藍萼香茶菜樣品信息

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

        色譜柱為島津C18ODS;柱溫為25 ℃;流動相為甲醇-水(60∶40);流速為0.9 mL·min-1;檢測波長為234 nm;進樣量為20 μL。理論板數(shù)按藍萼甲素峰計應不低于3 000,與相鄰峰的分離度不小于1.5。

        2.2 對照品溶液的制備

        精密稱取100 mg藍萼甲素對照品,置100 mL容量瓶中加適量甲醇使溶解,并稀釋至刻度,搖勻,作為貯備液。HPLC圖見圖1。

        2.3 樣品溶液的制備

        分別精密稱取樣品粗粉10 g,以乙醚150 mL提取,以甲醇5 mL溶解殘留物,濾液加入150 mg活性炭脫色,過濾,溶液揮干,干法上硅膠柱(8.0 cm×150 cm,200~300目,5 g),分別以三氯甲烷-丙酮(15∶1,7∶1)100 mL洗脫,以TLC[硅膠G板,三氯甲烷-丙酮(10∶1)展開,硫酸-甲醇為顯色劑,藍萼甲素為對照]檢查,收集含藍萼甲素各段,水浴蒸干,以甲醇10 mL溶解,微孔濾膜(0.45 μm)過濾,移至25 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,備用。HPLC圖見圖2。

        圖1 藍萼甲素對照品的HPLC圖

        圖2 藍萼香茶菜提取物HPLC圖

        2.4 線性關系考察

        精密吸取以上藍萼甲素貯備液0.1,0.2,0.4,0.5,0.6 mL置于25 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,分別進樣20 μL,以峰面積與對應濃度(μg·mL-1)繪制標準曲線,得回歸方程:Y=11 301X+33 708,r=0.996 4。結(jié)果表明藍萼甲素濃度在4~24 μg·mL-1與峰面積呈良好線性關系。

        2.5 方法學考察

        2.5.1 精密度試驗 取濃度為12 μg·mL-1的藍萼甲素對照品溶液,重復進樣5次,測得峰面積的RSD=0.43%。結(jié)果表明精密度良好。

        2.5.2 穩(wěn)定性試驗 取藍萼香茶菜葉(千山樣品,7月份采集),按2.3項下方法制備,分別于制備后0,1,3,5,7 h依法測定,結(jié)果峰面積的RSD=1.47%。

        2.5.3 重現(xiàn)性試驗 取藍萼香茶菜葉(千山樣品,7月份采集)5份,分別按2.3項下方法制備,測定其藍萼甲素的峰面積,計算RSD=2.09%。

        2.5.4 回收率試驗 取已知含量的藍萼香茶菜葉(千山樣品,7月份采集)150 mg,精密加入藍萼甲素對照品(1.25 mg·mL-1)溶液1 mL,按2.3項下方法制成供試液,每次進樣20 μL,測定藍萼甲素的含量,計算加樣回收率,結(jié)果見表2。

        2.6 樣品測定結(jié)果

        取樣品溶液,每批樣品5份,用甲醇適當稀釋后取20 μL注入液相色譜儀測定,結(jié)果見表3、4。

        表2 藍萼香茶菜中藍萼甲素加樣回收率試驗

        注:藍萼甲素對照品加入量均為1.250 mg

        表3 不同地區(qū)7月采摘的藍萼香茶菜根、莖、葉中藍萼甲素的含量(n=5) /%

        表4 不同地區(qū)不同采摘時間藍萼香茶菜葉中藍萼甲素的含量(n=5) /%

        3 討論

        將同一批藍萼香茶菜均勻樣品粉末分別用水、乙醇和乙醚提取,結(jié)果表明,乙醚提取的效率最佳,水的提取效率最差。因此采用乙醚回流提取,將提取物用甲醇溶解后上硅膠柱可對提取物中藍萼甲素進行富集,去除不必要雜質(zhì),提高含量測定的準確度。

        經(jīng)測定分析發(fā)現(xiàn),不同部位中藍萼甲素的含量以葉中最高;不同采集期以7、8月份含量較高,9月末含量下降,這可能和植物的生長周期有關,撫順、千山的藍萼香茶菜中藍萼甲素含量較高。實驗結(jié)果表明,藍萼香茶菜應在夏季采收,并以葉入藥為宜。

        [1] 任常順,葉麗卡.香茶菜屬植物研究進展[J].遼寧藥物與臨床,2002,5(2):91.

        [2] 桂明玉,金永日,劉松艷,等.藍萼香茶菜化學成分研究Ⅱ[J].中國藥學雜志,2000,35(6):374-375.

        [3] 金永日,桂明玉,王寶珍.藍萼香茶菜根化學成分研究[J].中國中藥雜志,2000,25(11):678-679.

        [4] 楊秀偉,趙靜.藍萼香茶菜化學成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2003,15(6):490-493.

        [5] 項昭保,徐一新,陳海生,等.藍萼香茶菜化學成分研究[J].中成藥,2009,31(5):763-764.

        DetectContentsofGlaucocalyxinAinRabdosiajaponicavar.GlaucocalyxDifferentPartatDifferentCollectedTime

        WANG Qiang,LANG Yi-yong, REN Chang-shun,YU Xiao-li

        (No202thhospitalofPLA,Shenyang110003,China)

        Objective:To study content of glaucocalyxin A in different part ofRabdosiajaponicavar.Glaucocalyxat different collected time and select the perfect time.MethodsHPLC was used to detect the content of glaucocalyxin A. HPLC separation was performed on Symmetry C18column with a solvent system of methanol-water(60∶40). The detection wavelength was 234 nm. The flow rate was 1 mL·min-1. The column temperature was 25 ℃.ResultsThe content was the highest in leaves of Rabdosia japonica var which was collected in July and August.ConclusionRabdosiajaponicavar.Glaucocalyx’s leaves should be collected at summer.

        Rabdosiajaponicavar.Glaucocalyx; Glaucocalyxin A; HPLC

        2011-12-09)

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