胡正余，徐以亮

(江陰天江藥業(yè)有限公司,江蘇 江陰 214434)

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徐以亮，Tel：(0510)86408091，E-mail：xyl009@126.com

不同等級(jí)白芍藥材中芍藥苷含量的分析

胡正余，徐以亮*

(江陰天江藥業(yè)有限公司,江蘇 江陰 214434)

目的測(cè)定不同等級(jí)白芍中芍藥苷的含量。方法采用反相HPLC法，色譜柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。結(jié)果芍藥苷進(jìn)樣量在0.201 6～1.008 μg線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為97.36%(RSD=1.27%)。19批樣品測(cè)定結(jié)果表明，一等品中芍藥苷的含量在2.88%～3.54%，二等品中芍藥苷的含量在2.46%～2.78%，三等品中芍藥苷的含量在2.04%～2.32%，四等品中芍藥苷的含量在1.34%～1.97%。結(jié)論白芍現(xiàn)有的劃分等級(jí)的方法較好地體現(xiàn)了白芍的質(zhì)量差異，為白芍的臨床使用和制藥企業(yè)選擇原料提供了依據(jù)。

白芍；芍藥苷；HPLC；含量測(cè)定

白芍[1]為毛茛科植物芍藥PaeonialactitloraPall.的根經(jīng)過(guò)水煮去皮的干燥品，性微寒，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)，斂陰止汗，柔肝止痛，平抑肝陽(yáng)的功能，用于血虛萎黃，月經(jīng)不調(diào)，自汗，盜汗，脅痛，腹痛，四肢攣痛，頭痛眩暈。白芍中含有芍藥苷、牡丹酚、芍藥花苷、芍藥內(nèi)酯以及揮發(fā)油和三萜類(lèi)等化學(xué)成分，其中芍藥苷為其主要藥效成分，具有鎮(zhèn)靜、解痙、抗炎、抗應(yīng)激性潰瘍等多方面的作用[2]，是白芍質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)成分。白芍主產(chǎn)浙江、安徽、四川等地，分別被稱(chēng)為杭白芍、毫白芍以及川白芍。在長(zhǎng)期實(shí)踐中，人們根據(jù)藥材傳統(tǒng)外觀、規(guī)格，將白芍劃分為杭白芍1～7等、白芍1～4等進(jìn)行銷(xiāo)售。筆者以芍藥苷為指標(biāo)，參考《中國(guó)藥典》2010版一部白芍【含量測(cè)定】項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定，采用HPLC法對(duì)4個(gè)等級(jí)白芍樣品[3]的芍藥苷含量進(jìn)行考察，為白芍的質(zhì)量評(píng)價(jià)及臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent12000高效液相色譜儀、Agilent-G1311A四元泵、Agilent-G1322A真空脫氣器、Agilent-G1314B可變波長(zhǎng)檢測(cè)器、CHEMSTATION B.04.01化學(xué)工作站(美國(guó)安捷倫公司)；超聲清洗機(jī)(無(wú)錫超聲電子設(shè)備廠)；電子天平(瑞士Mettler公司)；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器公司)；SD101-2電熱鼓風(fēng)干燥箱(南通金石實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。

1.2 試藥

芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110736-200527，供含量測(cè)定用)；乙腈為色譜純(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

白芍樣品產(chǎn)自安徽亳州，按照現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)劃分為：一等1～4號(hào)，二等1～6號(hào)，三等1～5號(hào)，四等1～4號(hào)(一等：長(zhǎng)8 cm以上，中部直徑1.7 cm以上，無(wú)蘆頭、花麻點(diǎn)、破皮、裂口、夾生；二等：長(zhǎng)6 cm以上，中部直徑1.3 cm以上，間有花麻點(diǎn)；三等：長(zhǎng)4 cm以上，中部直徑8 mm以上，間有花麻點(diǎn)；四等：長(zhǎng)短粗細(xì)不分，間有夾生、破條、花麻點(diǎn)、頭尾、碎節(jié)或未去凈栓皮)。以上白芍藥材經(jīng)江陰天江藥業(yè)有限公司唐波執(zhí)業(yè)藥師鑒定為毛茛科植物芍藥PaeonialactitloraPall.的去外皮干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1% 磷酸溶液(14∶86)；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于1 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成1 mL含芍藥苷100.8 μg的溶液，搖勻，即得。HPLC圖見(jiàn)圖1。

2.3 供試品溶液的制備

本品切片干燥，取適量打粉，稱(chēng)取約0.1 g，精密稱(chēng)定，置50 mL量瓶中，加稀乙醇35 mL，超聲處理(功率240 W，頻率45 kHz)30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)微孔濾膜(0.45 μm)，即得。HPLC圖見(jiàn)圖2。

圖1 芍藥苷對(duì)照品HPLC圖

圖2 白芍藥材HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液(100.8 μg·mL-1)2，4，6，8 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為20.16,40.32,60.48,80.64 μg·mL-1的系列對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述不同濃度的對(duì)照品溶液各10 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣，以芍藥苷峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，芍藥苷進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(X)，計(jì)算得回歸方程Y=12.057X-5.45，r=0.999 9。結(jié)果表明芍藥苷進(jìn)樣量在0.201 6～1.008 μg進(jìn)樣濃度與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度考察

精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液(100.8 μg·mL-1)5 μL，注入液相色譜儀分析，測(cè)定峰面積積分值，重復(fù)6次，計(jì)算其RSD=0.99%。結(jié)果表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取白芍藥材(二等1號(hào)樣品)0.1 g，6份，按供試品溶液的制備方法制成供試液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定。結(jié)果表明白芍藥材(二等1號(hào)樣品)中芍藥苷的平均含量為2.54%，RSD=1.27%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取白芍二等1號(hào)樣品的供試品溶液，于0，1，2，4，6，8 h分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定樣品中芍藥苷峰面積積分值，計(jì)算其RSD=1.14%。結(jié)果表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品(白芍二等1號(hào)樣品)0.05 g，精密稱(chēng)定，分別加入芍藥苷對(duì)照品適量，按正文供試品溶液制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果平均加樣回收率為97.36%，RSD=1.34%(n=6)，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 樣品測(cè)定

分別取各樣品約0.1 g，精密稱(chēng)定，按供試品溶液制備方法分別制成供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)

表2 樣品測(cè)定結(jié)果 /%

3 結(jié)果與討論

不同等級(jí)的19批樣品測(cè)定結(jié)果表明，一等品中芍藥苷的含量在2.88%～3.54%，二等品中芍藥苷的含量在2.46%～2.78%，三等品中芍藥苷的含量在2.04%～2.32%，四等品中芍藥苷的含量在1.34%～1.97%。以芍藥苷的含量為指標(biāo)，現(xiàn)有的規(guī)格等級(jí)劃分方法能較好地體現(xiàn)了白芍的質(zhì)量差異，為白芍藥材的原料采購(gòu)及制劑生產(chǎn)和臨床使用提供了依據(jù)。

以上測(cè)定所用白芍樣品均為4年生當(dāng)年采收產(chǎn)白芍，且均為亳州產(chǎn)。白芍為藥材中的大宗商品，庫(kù)存量較大，在產(chǎn)量高時(shí)，入庫(kù)封存量較大，有的貯存期較長(zhǎng)，在存放過(guò)程中，芍藥苷可能會(huì)降低。貯藏時(shí)間對(duì)白芍中芍藥苷含量的影響沒(méi)見(jiàn)報(bào)道，有待進(jìn)一步研究。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：96-97.

[2] 吳菡子，熊南山．白芍的藥理研究與臨床應(yīng)用[J]．中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1998，18(4)：172-173．

[3] 徐國(guó)鈞.中國(guó)藥材學(xué)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1996：178-179.

DeterminationofPaeoniflorininPaeoniaeRadixAlbaofDifferentGradesbyHPLC

HU Zheng-yu， XU Yi-liang

(JiangyinTianjiangPharmaceuticalCo.,Ltd,Jiangyin214434，China)

Objective:To established a method for the determination of paeoniflorin in Paeoniae Radix Alba.MethodsRP-HPLC method was on Kromasil C18column (150 mm×4.6 mm, 5μm), with acetonitrile-0.1% phosphoric acid (14∶86) as mobile phase and detection wavelength at 230 nm. The flow rate was 1.0 mL·min-1and column temperature was 25 ℃.ResultsThe calibration curves of paeoniflorin were in good linearity at the range of 0.201 6～1.008 μg (r=0.999 9). The average recovery was 97.36% (n=6, RSD=1.27%). The results from 19 samples showed that the content of paeoniflorin was between 2.88% to 3.54% in first rank sample, 2.46% to 2.78% in second rank sample, 2.04% to 2.32% in third rank sample, 1.34% to 1.97% in fourth rank sample, respectively.ConclusionThe classification properly reflects the quality of Paeoniae Radix Alba according to content of paeoniflorin, and provides quality information for clinical use.

Paeoniae Radix Alba;Paeoniflorin; HPLC;Determination

2012-05-23)