鄒甜，田連起，葉曉川，張秀橋，周愛(ài)軍，劉焱文*

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué) 中藥資源與中藥復(fù)方教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430061；2.東莞市沙田醫(yī)院，廣東 東莞 523981)

東莞市科技局項(xiàng)目(東科[2010]111號(hào))

*

周愛(ài)軍，E-mail：dgzhouaijun@163.com；劉焱文，E-mail：ywliu2008@163.com

大青龍湯對(duì)脂多糖致發(fā)熱大鼠的解熱作用研究△

鄒甜1，田連起1，葉曉川1，張秀橋1，周愛(ài)軍2*，劉焱文1*

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué) 中藥資源與中藥復(fù)方教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430061；2.東莞市沙田醫(yī)院，廣東 東莞 523981)

目的研究大青龍湯退燒解熱活性物質(zhì)。方法采用內(nèi)毒素致大鼠發(fā)熱模型,觀察大青龍湯不同化學(xué)物質(zhì)部位解熱作用的效果。結(jié)果大青龍湯全方水煎劑及其多糖物質(zhì)部位和生物堿提取物均對(duì)內(nèi)毒素引起的大鼠體溫升高有明顯的抑制作用，在給藥3 h后就有較強(qiáng)的解熱作用，于3，4，6，7 h均與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其解熱作用與阿司匹林相當(dāng)。結(jié)論大青龍湯解熱效果顯著，其解熱的主要物質(zhì)部位為生物堿提取物、多糖、揮發(fā)油及石膏。

大青龍湯；脂多糖；解熱；物質(zhì)部位

“大青龍湯”為我國(guó)醫(yī)圣張仲景所著《傷寒論》的經(jīng)典方劑，由麻黃、桂枝、炙甘草、杏仁、石膏、生姜、大棗7味組方，具有發(fā)汗解表，清熱除煩之功效；臨床用于外感風(fēng)寒，表實(shí)無(wú)汗，兼有里熱之癥等病患[1]。該方劑歷經(jīng)兩千余年的臨床實(shí)踐，療效確切。東莞市沙田鎮(zhèn)醫(yī)院周愛(ài)軍主治醫(yī)師近年采用“大青龍湯”加減方臨床治療流感患者數(shù)百例，效果顯著；特別針對(duì)高燒患者，退熱效果優(yōu)于同類(lèi)中西藥物。本實(shí)驗(yàn)室前期將大青龍湯復(fù)方視為整體，按方中各藥所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)分類(lèi)，將其分為揮發(fā)油、生物堿、酚酸類(lèi)、苷類(lèi)、多糖和水溶性成分等不同有效組分，對(duì)其抗流感病毒的有效物質(zhì)部位進(jìn)行篩選研究。為了進(jìn)一步闡釋大青龍湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本論文通過(guò)建立SD大鼠發(fā)熱模型，視大青龍湯為整體，對(duì)方中植物藥不同有效組分進(jìn)行了解熱的藥理學(xué)研究。

1 材料

1.1 藥物

1.1.1 各味飲片 大青龍湯中麻黃、桂枝、炙甘草、石膏、杏仁、生姜、大棗7味藥均購(gòu)自湖北金貴中藥飲片有限公司，并經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室張秀橋教授鑒定為正品。麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasinicaStapf.的干燥草質(zhì)莖，桂枝為樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl.的干燥嫩枝，杏仁為薔薇科植物山杏Prunusarm-eniacaL.var.ansu Maxim.的干燥成熟種子，甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根及根莖，生姜為姜科植物姜ZingiberofficinaleRosc.的干燥根莖，石膏為硫酸類(lèi)礦物石膏族石膏。

1.1.2 供試藥液的制備

1.1.2.1 大青龍湯全方供試液的制備 7味中藥用自來(lái)水浸泡40 min，加水煎煮兩遍。合并兩次煎液，過(guò)濾濃縮。

1.1.2.2 大青龍湯不同有效部位供試液的制備 按大青龍湯方中各藥配伍劑量比例，分別稱(chēng)取麻黃、桂枝、甘草、杏仁、生姜、大棗適量。取桂枝和冷凍干燥后的生姜，粉碎，超臨界二氧化碳萃取得到超臨界CO2萃取物[2]；桂枝、生姜二藥經(jīng)超臨界二氧化碳萃取后的藥渣與方中其他植物藥混合，用70%乙醇回流提取兩次，合并濾液，回收乙醇至適量，藥液用石油醚脫脂，將石油醚萃取后的殘液堿化，用三氯甲烷萃取5次，合并三氯甲烷萃取液，回收三氯甲烷得到生物堿；將三氯甲烷萃取后的殘液酸化，用乙酸乙酯萃取5次，合并萃取液，回收乙酸乙酯得到酚酸類(lèi)化合物；將乙酸乙酯萃取后的殘液用正丁醇萃取5次，合并萃取液，減壓回收正丁醇得到苷類(lèi)化合物；取前述經(jīng)70%乙醇回流提取方中植物藥所剩藥渣，加水煎煮兩次，合并煎液，濃縮，加無(wú)水乙醇至80%醇度，放置過(guò)夜，濾出沉淀為多糖。

1.2 試劑

脂多糖(Escherichia il，O55：B5, L2880,Sigma公司)。脂多糖(LPS)注射液的制備：無(wú)菌條件下，用0.9%氯化鈉溶液將脂多糖配成20 mg·L-1注射液，備用。阿司匹林(神威藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1101021)。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，雄性，體重180～220 g，購(gòu)自華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院，合格證號(hào)：SCXK(鄂)2010-0007。在室溫(20±2)℃環(huán)境下分籠飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)一周。

1.4 儀器

DL-I型電子體溫計(jì)(江蘇魚(yú)躍醫(yī)用儀器有限公司)。

2 方法[3]

2.1 分組

大鼠每日測(cè)量體溫(肛溫)2次，連續(xù)2日，取兩次體溫的平均值記為基礎(chǔ)體溫。單次體溫超過(guò)38 ℃ 或2次溫差超過(guò)0.5 ℃的動(dòng)物剔除。將合格的大鼠150只隨機(jī)分為15組，即空白對(duì)照組,模型組對(duì)照,阿司匹林對(duì)照組(0.2 g·kg-1)[4],大青龍湯全方水煎高、低劑量組，超臨界CO2萃取物高、低劑量組，生物堿提取物高、低劑量組，酚酸提取物高、低劑量組，苷類(lèi)提取物高、低劑量組，多糖部位高、低劑量組，每組10只。實(shí)驗(yàn)藥物高、低劑量組分別按5倍臨床用藥劑量(相當(dāng)于生藥38.7 g·kg-1)和1倍臨床用藥劑量(相當(dāng)于生藥7.74 g·kg-1)，各部位灌胃給藥劑量見(jiàn)表1。

2.2 動(dòng)物處理及觀察指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)前12 h，禁食不禁水。實(shí)驗(yàn)時(shí)空白對(duì)照組及模型對(duì)照組灌胃給予蒸餾水，其他各組灌胃給藥；給藥后1 h空白組腹腔注射滅菌0.9%氯化鈉溶液，其他各組大鼠分別腹腔注射LPS(20 μg·kg-1)，誘發(fā)動(dòng)物發(fā)熱。

體溫測(cè)定：取各組大鼠腹腔注射前二次測(cè)得的體溫平均值作為基礎(chǔ)體溫(T0)。各組動(dòng)物分別于腹腔注射LPS后1 h開(kāi)始測(cè)體溫(Ti)，以后每隔1 h測(cè)1次體溫，連續(xù)監(jiān)測(cè)7 h。計(jì)算△T(△T=Ti-T0)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，各組體溫△T為縱坐標(biāo)，繪制體溫變化(△T-Time)曲線。

2.3 數(shù)據(jù)處理

3 結(jié)果

以時(shí)間為橫坐標(biāo)，各組體溫△T為縱坐標(biāo)，繪制體溫變化(△T-Time)曲線，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 大青龍湯及其不同物質(zhì)部位對(duì)發(fā)熱模型大鼠△T變化的影響

模型組與空白組比較,模型組大鼠體溫明顯升高，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明造模成功;其他各物質(zhì)部位組與模型組比較，大青龍湯水煎液低劑量組在5 h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在3，4，6，7 h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，其高劑量組在3 h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在4，6，7 h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；生物堿低劑量組在3 h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在4，7 h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；多糖高劑量組在1、3、4、6 h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而超臨界CO2萃取物、酚酸提取物及苷類(lèi)提取物有解熱作用趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明大青龍湯全方解熱效果顯著，其主要解熱有效物質(zhì)部位為生物堿、多糖。與阿司匹林比較，大青龍湯全方水煎液在1～4 h降溫幅度稍低，第5小時(shí)即與之相當(dāng)，第6、7小時(shí)則效果優(yōu)于阿司匹林，說(shuō)明其全方水煎液起效稍慢，但藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 大青龍湯及其不同物質(zhì)部位對(duì)內(nèi)毒素致大鼠發(fā)熱的影響

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，#P<0.05,##P<0.01

4 討論

脂多糖(LPS)誘導(dǎo)發(fā)熱模型所用的劑量范圍較大，其劑量范圍為10～100 μg·kg-1。在探索LPS誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱的最佳劑量時(shí)，本實(shí)驗(yàn)選取了20，50，100 μg·kg-13個(gè)不同的劑量進(jìn)行考察，結(jié)果表明100 μg·kg-1沒(méi)有明顯的致熱效果，50，20 μg·kg-1均可以誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱，但20 μg·kg-1劑量引起實(shí)驗(yàn)大鼠發(fā)熱熱勢(shì)高及持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，且腎毒性也較小，綜合各方面考慮，確定LPS劑量為20 μg·kg-1。大鼠在腹腔注射20 μg·kg-1LPS后在7 h內(nèi)各觀察點(diǎn)的體溫均見(jiàn)顯著增高(P<0.05)，同時(shí)伴有寒顫、精神萎靡和輕微腹瀉等癥狀，表明該劑量LPS成功誘導(dǎo)了大鼠的發(fā)熱模型[5]。LPS誘導(dǎo)發(fā)熱起效較慢，宜較早給藥，所以本實(shí)驗(yàn)提前1 h灌胃給藥[6]。

本方以麻黃為君藥，桂枝為臣藥，甘草味甘平，杏仁味甘苦，苦甘為助，佐麻黃以發(fā)表；大棗味甘溫，生姜味辛溫，佐桂枝以解??；石膏味甘辛微寒，增加清熱除煩之效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,大青龍湯全方水煎液，生物堿及多糖組分有顯著的解熱作用,其作用與阿司匹林相近。另?yè)?jù)文獻(xiàn)報(bào)道，大青龍湯方中臣藥桂枝所含揮發(fā)油的主要成分桂皮醛具有明顯解熱作用[2,7]，石膏水煎液亦具有顯著解熱效果[8]。

根據(jù)本論文的研究結(jié)果和相關(guān)文獻(xiàn)資料綜合分析，我們認(rèn)為，大青龍湯經(jīng)典方劑退燒解熱效果顯著，其解熱的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能為方中生物堿和多糖等組分的配伍協(xié)同作用。

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StudyofDaqinglongTangConcerningLPS(lipopolysas-charideca)UseFebrileRats’AntipyreticEffects

ZOU Tian1，TIAN Lian-qi1，YE Xiao-chuan1，ZHOU Ai-jun2，LIU Yan- wen1

(1.ProvincialandMinistryofEducationKeyLaboratoryofResoureScienceandChineseHerbalCompoundinChineseMedicineHubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Wuhan430061，China;2.ShatianHospitalofDongguanCity，Dongguan523981，China)

Objective:To study antipyretic effects of Daqinglong Tang and filter out the main effective parts to antipyretic.MethodsUsing endotoxin induced fever method to observe effects of Daqinglong Tang antipyretic.ResultsDaqinglong Tang of all square decotion, Polysaccharide parts and Alkaloid parts bring significantly inhibition on rats body temperature rising that caused by Endotoxin. Their antipyretic effects were like aspirin.ConclusionAntipyretic effect of Daqinglong Tang was significant，and effective parts were alkaloid, polysaccharides，volatile oil and Gypsum Fibrosum.

Daqinglong Tang; Lipopolysaccharide; Antipyretic;Material part

2012-05-09)