劉廣州

90例強(qiáng)直性脊柱炎活動(dòng)期患者單核細(xì)胞中CD28、CD80、CD86表達(dá)的臨床意義

劉廣州

目的探討CD28、CD80、CD86在90例強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血單核細(xì)胞中表達(dá)的臨床意義。方法選擇我院骨傷科2011年6月至2012年6月經(jīng)相關(guān)檢查確診的強(qiáng)直性脊柱炎患者180例，其中活動(dòng)期患者90例，穩(wěn)定期患者90例，另選90例體健正常的人群做為對(duì)照組，提取外周血單核細(xì)胞，采用Taqman探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)CD28、CD80、CD86的表達(dá)。結(jié)果強(qiáng)直性脊柱炎患者單核細(xì)胞CD28、CD80、CD86表達(dá)明顯高于對(duì)照組，且活動(dòng)期組患者高于穩(wěn)定期組患者(P＜0.01)。結(jié)論

CD28、CD80、CD86表達(dá)升高可增加強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病率。

強(qiáng)直性脊柱炎;CD28、CD80、CD86;表達(dá)

強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是一種原因不明的全身慢性結(jié)締組織疾病，發(fā)病誘因不太明確，目前認(rèn)為可能與遺傳、慢性感染、內(nèi)分泌紊亂有關(guān)［1］。病變主要累及骶髂關(guān)節(jié)、髖關(guān)節(jié)、椎間關(guān)節(jié)等。臨床分為三期，即早期、活動(dòng)期、穩(wěn)定期。研究發(fā)現(xiàn)AS患者骨、關(guān)節(jié)、滑膜組織內(nèi)有大量炎性T細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞侵潤(rùn)。本研究測(cè)定了180例強(qiáng)直性脊柱炎患者的外周血單核細(xì)胞中表達(dá)水平，并探討了其與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院骨傷科2011年6月至2012年6月經(jīng)相關(guān)檢查確診的強(qiáng)直性脊柱炎住院患者180例，分為，Ⅰ組:活動(dòng)期組90例(男45例，女45例);Ⅱ組:穩(wěn)定期組90例(男45例，女45例);另選90例體健正常的人群做為對(duì)照組(男45例，女45例)。排除標(biāo)準(zhǔn):急、慢性肝腎疾病及感染性疾病;惡性腫瘤及血液系統(tǒng)疾病;正在使用激素類藥物。

1.2 方法

1.2.1 RNA的提取 取患者和正常對(duì)照組患者外周血5 m l，EDTA-Na2抗凝，1 h內(nèi)提取外周血單核細(xì)胞，PBS洗滌一次，所提取的總RNA以1∶50稀釋，用紫外分光密度儀監(jiān)測(cè)其在OD260nm，OD260nm處比值為1.9，在1.8和2.0之間。在含量為1.5%瓊脂糖凝膠的平板上進(jìn)行電泳，完整性良好。

1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄 以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄.

1.2.3 引物及Taqman探針的設(shè)計(jì)及合成，由上海捷瑞公司設(shè)計(jì)提供。見(jiàn)表1。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)中的CD28、CD80、CD86 mRNA的測(cè)定使用Real-MasterMix Probe試劑盒，，用本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的內(nèi)參基因ABL質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋做標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用相對(duì)定量的方法，將目的基因(CD28、CD80、CD86)與內(nèi)參基因ABL拷貝數(shù)的比值取對(duì)數(shù)值為最終有效數(shù)據(jù)來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 利用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用獨(dú)立樣本資料的t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

采用相對(duì)定量方法，AS活動(dòng)組患者共刺激分子CD28、CD80、CD86表達(dá)均高于對(duì)照組(P＜0.05)，AS活動(dòng)期患者。見(jiàn)表2。

表1

表2

3 討論

AS是脊柱關(guān)節(jié)病的一種類型，主要累及骶髂關(guān)節(jié)、髖關(guān)節(jié)、椎間關(guān)節(jié)等，特征是持續(xù)性炎癥，炎癥嚴(yán)重程度不等。AS好發(fā)于青少年，男女比例約為2.5∶1。此病的病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確，從流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，基因和環(huán)境因素在本病的發(fā)病中發(fā)揮作用，目前認(rèn)為其發(fā)生與遺傳、慢性感染、自身免疫功能紊亂和內(nèi)分泌失調(diào)等有關(guān)［2］。免疫調(diào)節(jié)以及免疫功能紊亂在粵雜患者的發(fā)病過(guò)程中起著重要作用。國(guó)內(nèi)外免疫功能紊亂方面的主要發(fā)現(xiàn)是AS患者骨、關(guān)節(jié)及滑膜組織內(nèi)有大量炎性T細(xì)胞、單核原巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，存在T細(xì)胞應(yīng)答和Th1/Th2細(xì)胞因子平衡偏移等。AS患者外周血淋巴細(xì)胞以Th1型細(xì)胞為主，隨著炎癥的活動(dòng)，Th1細(xì)胞的分化能力似Th2細(xì)胞下降。推測(cè)其發(fā)病與Th1型細(xì)胞因子增多、Th2型細(xì)胞因子減少有關(guān)［3］。本研究通過(guò)檢測(cè)AS活動(dòng)期患者外周血單個(gè)核細(xì)胞上的共刺激分子mRNA的表達(dá)，探討AS的免疫學(xué)機(jī)制。

T細(xì)胞的激活需來(lái)自細(xì)胞外的信號(hào)刺激，第一信號(hào)(抗原特異的識(shí)別信號(hào))和第二信號(hào)(表達(dá)于T細(xì)胞表面的膜蛋白分子及其配體介導(dǎo)的共刺激信號(hào))，T細(xì)胞被這兩個(gè)信號(hào)激活后才能發(fā)揮其免疫功能，共刺激分子中最重要的是T細(xì)胞表面的CD28及其相應(yīng)配體CD80和CD86，CD28與CD80結(jié)合可促進(jìn)Th1細(xì)胞增殖，CD28與CD86結(jié)合Th2細(xì)胞增殖［4］。本室建立了采用熒光定量PCR的方法監(jiān)測(cè)CD28、CD80、CD86及ABLm-RNA的新方法。研究發(fā)現(xiàn)AS活動(dòng)組患者共刺激分子CD28、CD80、CD86表達(dá)均高于對(duì)照組，提示CD28、CD80、CD86的異常表達(dá)可能引起與AS相關(guān)的免疫功能的紊亂。

綜上所述，AS患者共刺激分子異常表達(dá)，可能與AS的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系，在臨床上監(jiān)測(cè)患者刺激分子異常表達(dá)水平有助于AS診斷和治療。

［1］HOWARD L.M.KOHM A P.CASTANEDA C L，etal.Therapeutic blockade of TCR signal trasduction and co-stimulation in autoim mune disease.Curr Drug Targets Inflamm Allergy.

［2］王斌，王萍萍.援強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展.四川醫(yī)學(xué)，2008，29(10):409-412.

［3］董青，楊達(dá)人，劉華.HLA-B27陽(yáng)性強(qiáng)直性脊柱炎患者免疫功能和血液流變性的檢測(cè).中國(guó)血液流變學(xué)雜志，2006，16(2): 273-275.

［4］翟士軍，蘇成海.B7-CD28家族分子的免疫調(diào)節(jié)功能及臨床應(yīng)用.放射免疫學(xué)雜志，2008，21(6):575-578.

467500 河南省汝州市第一人民醫(yī)院骨傷科

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