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        酸漿綠茶體外抗氧化活性研究

        2012-10-26 11:08:48劉敏任石濤王曉聞
        關(guān)鍵詞:酸漿過氧化物回歸方程

        劉敏,任石濤,王曉聞

        (山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院,山西 太谷030801)

        酸漿[Physalis al kekengi L.var.franchetii(Mast.)Makino],別名紅姑娘、泡泡草等,茄科,酸漿屬,為多年生宿根草本植物[1]。酸漿始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,明朝李時珍《本草綱目》中也有記載[2]。酸漿全草含有許多功能性化學(xué)成分,包括甾體類,生物堿類,脂類,礦物質(zhì),色素類,氨基酸類,糖類及其他成分等[3]。酸漿葉中含有大量的黃酮類物質(zhì),所以它具有消炎,抗腫瘤,抗糖尿病,抗菌及抗病毒等方面的功能[4]。

        酸漿在中國各地均有野生分布,適應(yīng)性強。目前有關(guān)酸漿的研究也不夠深入,尤其是對酸漿葉子的報道較少,而且以其為原料的食品及藥品市場上還不多見。酸漿有待于進一步的開發(fā)利用,是一種非常有發(fā)展前景的經(jīng)濟作物。本實驗將酸漿葉子做成綠茶是發(fā)揮酸漿葉功效的最簡單、最方便、最快捷與最有效的方法,可以被人體更好的利用。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 原料

        本試驗采用大同市陽高縣長城鎮(zhèn)提供的8月份酸漿植物的葉子,采用傳統(tǒng)工藝。

        1.1.2 主要試劑

        試驗中所用試劑均為分析純。

        無水甲醇、氯化鐵、氯化鉀、二苯代苦味酰肼自由基(DPPH·):美國Sig ma公司。

        丁基羥基甲苯(BHT)、水楊酸、鄰苯三酚、硫酸亞鐵(FeSO4·7 H2O)、硫代巴比妥酸、鐵氰化鉀(K3Fe(CN)6)、Tris:北京瑞爾欣德科技有限公司;三氯甲烷、三氯乙酸、冰乙酸、30%雙氧水(H2O2)、淀粉。

        1.1.3 儀器與設(shè)備

        BS224S電子天平、臺式低速離心機(L-550)(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)、756型紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司)、JDG-0.2真空凍干試驗機、電熱恒溫水浴鍋(北京化玻聯(lián)醫(yī)療器械有限公司)、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司)

        1.2 方法

        1.2.1 酸漿綠茶還原能力的測定

        參照魏金濤等人的方法進行測定[6]。

        1.2.2 酸漿綠茶對DPPH·自由基清除能力的測定

        DPPH·自由基清除能力的方法參考Yamaguchi等[7]報道的方法與于繼賓[8]的方法進行測定。

        1.2.3 酸漿綠茶對·OH自由基清除能力的測定

        ·OH自由基清除能力的方法主要參照陳偉等[9]報道的方法測定。

        1.2.4 酸漿綠茶對O2-·自由基清除能力的測定

        酸漿綠茶對O2-·自由基清除能力的測定方法參照徐懷德[10]報道的方法。

        1.2.5 酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物清除能力的測定

        用甲醇將酸漿綠茶粉溶解,配成2 g·L-1溶液,并作一系列的稀釋。將0.5 mL雞蛋黃勻漿液與10%、0.2 mol·L-1的PBS溶液(p H=7.4)混合后加入不同濃度的樣液0.5 mL混合,再加入0.07 mol·L-1的FeSO4溶液0.05 mL,搖勻,放在37℃下保溫30 min后加入20%的三氯乙酸1.5 mL和等體積0.8%的硫代巴比妥酸,反應(yīng)終止,最終的混合物在100℃的溫度下加熱5 min后在3000 r·min-1的轉(zhuǎn)速下離心10 min,取其上清液,于532 n m處檢測上清夜的吸光度。以不加硫代巴比妥酸的溶液為空白溶液。以BHT作為標準對照,按下式計算各待測樣品對脂質(zhì)過氧化物的清除能力。重復(fù)3次取平均值。

        式中:A——樣液與反應(yīng)溶液混合液的吸光值;

        A1——樣液與空白溶液混合液的吸光值;

        A0——不加樣液的吸光值。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 酸漿綠茶總還原能力的測定

        由圖1可看出,酸漿綠茶樣品在低濃度下,A700值較小,隨著濃度的增加,A700值也隨之增大。說明酸漿綠茶在一定濃度下具有還原能力。

        圖1 酸漿綠茶的還原能力Fig.1 The reducing power of Physalins green tea

        2.2 酸漿綠茶對DPPH·自由基清除能力

        由圖2、圖3可看出,酸漿綠茶對DPPH·自由基有一定的清除能力,清除能力隨濃度的增加而增大。溶液濃度達到1 g·L-1時 ,對DPPH·自由基清除率可以達到90.8%。通過回歸方程y=-28.097x2+117.96 x+1.2571,R2=0.9995及y=-92146x2+3414.7 x+11.623,R2=0.978得出酸漿綠茶、Vc對DPPH·自由基的半抑制濃度IC50值為0.45 g·L-1、0.060 g·L-1。結(jié)果表明,一定濃度的酸漿綠茶對DPPH·自由基具有較強的清除能力,但沒有Vc的能力強。

        圖2 酸漿綠茶清除DPPH·自由基的能力Fig.2 Scavenging activity of physalins green tea on DPPH·radical

        2.3 酸漿綠茶對·OH自由基的清除能力

        由圖4可看出,隨著濃度的增加,酸漿綠茶對Fenton反應(yīng)體系產(chǎn)生的羥自由基的清除力逐漸上升,當濃度為2 g·L-1時,清除作用最強,其清除率達到63.8%。實驗數(shù)據(jù)用Excel進行多項式回歸,回 歸 方 程 為 y= -5.945x2+31.157 x+2 4.9 1 2,R2=0.9 7 6 5,及y=-1 5.5 9 1 x2+71.003 x+18.941,R2=0.9963,回歸方程顯著。通過回歸方程得出酸漿綠茶、Vc清除羥自由基的半抑制濃度IC50值0.99 g·L-1、0.22 g·L-1。結(jié)果表明,一定濃度酸漿綠茶也有清除羥自由基的能力,但是作用不強。

        圖3 Vc清除DPPH·自由基的能力Fig.3 Scavenging activity of Vc on DPPH·radical

        圖4 酸漿綠茶及Vc清除·OH自由基的能力Fig.4 Scavenging activitv of physalins green tea and Vc on hydroxyl radical

        2.4 酸漿綠茶對O2-·的清除能力

        由圖5可看出,反應(yīng)體系吸光值隨反應(yīng)時間延長而穩(wěn)定增加,在體系反應(yīng)時間內(nèi),吸光值和反應(yīng)時間線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)達0.9998,說明反應(yīng)體系在前3 min的反應(yīng)時間內(nèi),穩(wěn)定積累有色中間產(chǎn)物,鄰苯三酚自氧化速率穩(wěn)定,根據(jù)線性方程y=0.0342x+0.1146可知,鄰苯三酚自氧化速率V0為0.0342。

        由圖6可看出,當樣品濃度為2 g·L-1時,其清除率為4.3%,說明酸漿綠茶對O2-·自由基的清除效果不佳。y=0.1714x2-0.4626x+2.192,R2=0.9448,回歸方程顯著。由方程計算得出酸漿綠茶對清除超氧陰離子自由基的IC50值分別為15.43 g·L-1。試驗結(jié)果表明,一定濃度的酸漿綠茶的可清除超氧陰離子自由基,但是作用較弱。

        圖5 鄰苯三酚自氧化速率的測定Fig.5 Linearity correlation bet ween reaction time and adsorbancy of reaction system

        圖6 酸漿綠茶清除超氧陰離子自由基的能力Fig.6 Scavenging activitv of physalins green tea on superoxide anion radical at different concentrations

        2.5 酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物的抑制作用

        由圖7可看出,隨著濃度的增加,酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物的清除力逐漸上升,當濃度為2 g·L-1時,清除作用最強,其清除率達到67.9%。實驗數(shù)據(jù)用Excel進行多項式回歸,回歸方程顯著。通過回歸方程得出酸漿綠茶清除脂質(zhì)過氧化物的半抑制濃度IC50值,為0.83 g·L-1。結(jié)果表明,一定濃度的酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物有較強的清除作用。

        3 結(jié)論與討論

        還原力是表示抗氧化物質(zhì)能夠提供電子能力強弱的重要指標,隨著溶液的吸光度增大,還原能力增強,其抗氧化性亦增強[11~13]。二苯代苦味酰肼自由基(DPPH·)是一種較穩(wěn)定的以氮為中心的自由基,如果受試物能夠清除它,便可以評價此受試物的抗氧化能力[14~17]。O2- ·和·OH 等活性氧自由基誘導(dǎo)的氧化損傷一直被認為是引起衰老、細胞損傷、死亡和組織傷害、細胞癌變的原因之一[18]?!H是最強活性自由基,也是毒性最大的自由基。它可與活細胞中任何分子發(fā)生反應(yīng)造成損害,并導(dǎo)致遺傳突變、膜損傷、酶失活、線粒體氧化磷酸化作用等一系列變化[19]。超氧陰離子在人體內(nèi)存在的一定數(shù)量,不發(fā)生化學(xué)變化對人體無害,但是一旦與羥基結(jié)合生成的產(chǎn)物就會對細胞DNA造成損害,從而破壞了人類機體功能。脂質(zhì)過氧化過程中發(fā)生的ROS氧化生物膜的過程,期間可能生成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物如丙二醛(Malonaldehyde,MDA)和4-羥基壬烯酸(4-h(huán)ydroxynonenal,HNE),從而改變細胞膜的流動性和通透,最終使細胞結(jié)構(gòu)和功能得到改變。

        試驗結(jié)果表明酸漿綠茶具有一定的還原力;對DPPH·自由基、·OH自由基、O2-·自由基具有一定的清除能力,對脂質(zhì)過氧化物有抑制作用,其IC50值分別為0.45 g·L-1、0.99 g·L-1、15.43 g·L-1、0.83 g·L-1;對DPPH·自由基的清除能力較強,但對O2-·自由基的清除能力較弱。酸漿綠茶之所以有以上抗氧化作用可能由于所含的黃酮有關(guān)[20],酸漿綠茶的提取物有待于進一步的研究。

        圖7 酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物清除能力Fig.7 Scavenging Activity of physalins green tea on the POV

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