李 芳，李八方，王景峰，張 晶，李 堯，趙 雪*

(中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東 青島 266003)

海帶巖藻聚糖硫酸酯對(duì)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用

李 芳，李八方，王景峰，張 晶，李 堯，趙 雪*

(中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東 青島 266003)

目的：采用免疫學(xué)評(píng)價(jià)方法，研究海帶巖藻聚糖硫酸酯對(duì)小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。方法：以海帶粗多糖為原料，采用酸提取、離子交換和自由基氧化降解法制備得到不同的巖藻聚糖硫酸酯組分。KM小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和海帶巖藻聚糖硫酸酯組分F-2、Fa和Fb的低、中、高劑量組。除正常組外，其余皮下注射氫化可的松造成免疫低下模型后灌胃。海帶巖藻聚糖硫酸酯F-2、Fa和Fb組小鼠分別灌胃F-2、Fa和Fb不同劑量多糖溶液(分別為25、50、100mg/(kg·d))，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃鹽酸左旋咪唑(20mg/(kg·d))，進(jìn)行免疫指標(biāo)的測(cè)定。結(jié)果：F-2、Fa和Fb組均能顯著提高免疫低下小鼠的脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量比值，提高血清溶血素含量和提高腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力，且F-2和Fa組能增強(qiáng)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力，但Fb組對(duì)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力無(wú)顯著性影響。結(jié)論：海帶巖藻聚糖硫酸酯對(duì)免疫低下小鼠具有較好的免疫調(diào)節(jié)作用，且中、低分子質(zhì)量的巖藻聚糖硫酸酯對(duì)免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用沒(méi)有顯著性差異。

海帶巖藻聚糖硫酸酯；免疫低下小鼠；免疫調(diào)節(jié)

巖藻聚糖硫酸酯是一種來(lái)源于海洋藻類(lèi)、海洋無(wú)脊椎動(dòng)物和被囊動(dòng)物中富含巖藻糖的硫酸多糖，具有抗病毒、抗凝血、抗血栓、抗腫瘤等生物活性[1-3]。研究發(fā)現(xiàn)，海帶硫酸多糖可增強(qiáng)正常小鼠和免疫低下小鼠的免疫功能，具有體外促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖和亞群分化的作用，其免疫調(diào)節(jié)作用對(duì)艾滋病患者的免疫重建具有重要的作用[4-7]，而且海帶硫酸多糖對(duì)小鼠肉瘤S180的抑制活性可能與其對(duì)巨噬細(xì)胞的激活有關(guān)[8]。但是目前的研究大多是高分子質(zhì)量的巖藻聚糖硫酸酯的免疫調(diào)節(jié)活性。

本實(shí)驗(yàn)采用酸提取和自由基氧化降解制備中分子質(zhì)量和低分子質(zhì)量的海帶巖藻聚糖硫酸酯，比較不同分子質(zhì)量的巖藻聚糖硫酸酯對(duì)小鼠免疫功能的影響，為相對(duì)低分子質(zhì)量巖藻聚糖硫酸酯在免疫調(diào)節(jié)方面的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

巖藻聚糖硫酸酯(fucoidan)粗多糖 日照潔晶海洋生物技術(shù)有限公司。

1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)(分析純)、D-甘露糖、D-葡萄糖 上?；瘜W(xué)試劑公司；右旋糖酐分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)品(180、2.5、4.6、7.1、10kD) 中國(guó)藥品生物制品檢定所；D-(＋)-氨基葡萄糖(GlcN)、D-葡萄糖醛酸(GlcUA) 美國(guó)Fluka公司；L-鼠李糖、D-半乳糖、乳糖、D-木糖和L-巖藻糖 美國(guó)Sigma公司；氫化可的松 西安利君制藥有限責(zé)任公司；鹽酸左旋咪唑 山東省仁和堂藥業(yè)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞

健康KM小鼠，雌性，體質(zhì)量18～22g，SPF級(jí)，購(gòu)自青島市藥品檢驗(yàn)所，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(魯)20090007；健康豚鼠，雌性，體質(zhì)量350～400g，購(gòu)自青島市藥品檢驗(yàn)所，動(dòng)物合格證號(hào)：S C X K(魯)20090009，抽取心臟血，分離血清，經(jīng)壓積綿羊紅細(xì)胞吸收后，作為本實(shí)驗(yàn)的補(bǔ)體來(lái)源；綿羊紅細(xì)胞(sheep red blood cell，SRBC)，由濟(jì)南百博生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供無(wú)菌脫纖維羊血，按常規(guī)方法制備SRBC懸液[9]；雞紅細(xì)胞(chicken red blood cell，CRBC)，市售公雞，抽取雞翼靜脈血，按常規(guī)方法制備CRBC懸液。

1.3 儀器與設(shè)備

中空纖維超濾膜(截留分子質(zhì)量10kD和6kD) 天津膜天膜工程技術(shù)有限公司；超濾膜(2.5kD和300D) 美國(guó)GE公司；Agilent 1100 高效液相色譜儀 美國(guó)Agilent公司；HPG-32OH人工氣候培養(yǎng)箱 哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；XSE-4G生物顯微鏡 美國(guó)Sigma公司；游標(biāo)卡尺(精度為0.01mm) 海信威量量具有限公司；Q-Sepharose FF 陰離子交換色譜柱分離 Amersham Pharmacia Biotech公司；ICS-2000離子色譜系統(tǒng) 美國(guó)Dionex公司；TSK-gel G3000 PWxl 色譜柱、TSK-gel G2500 PWxl 日本Tosoh Bioscience公司。

1.4 方法

1.4.1 中分子質(zhì)量海帶巖藻聚糖硫酸酯的制備

巖藻聚糖硫酸酯粗多糖采用 Q-Sepharose FF陰離子交換色譜柱分離，分別用0、0.5、1、2.5mol/L NaCl溶液分步洗脫，收集2.5mol/L NaCl溶液洗脫得到的高硫組分F-2，用截留分子質(zhì)量為10kD的中空纖維超濾膜超濾脫鹽，濃縮凍干。

1.4.2 低分子質(zhì)量海帶巖藻聚糖硫酸酯的制備

取4.5g的巖藻聚糖硫酸酯粗多糖溶于水，配制成100mg/mL溶液，然后加入Cu(AC)2·H2O至Cu2+濃度為0.0267mol/L，調(diào)pH值至7.5左右。水浴加熱至溶液溫度為60℃，然后以12mL/h的速度加入4.5% H2O2溶液。降解5h后，停止加入H2O2，選用截留分子質(zhì)量為10、6kD和2.5kD的超濾膜分離降解產(chǎn)物，得到兩個(gè)低分子質(zhì)量組分Fa(6～10kD)、Fb(2.5～6kD)，然后分別濃縮凍干[10]。

1.4.3 分子質(zhì)量的測(cè)定

采用高效液相色譜法[11]，中分子質(zhì)量巖藻聚糖硫酸酯采用TSK-gel G3000 PWxl 色譜柱分析；低分子質(zhì)量組分采用TSK-gel G2500 PWxl 色譜柱分析。采用Agillent GPC軟件計(jì)算各洗脫峰的重均分子質(zhì)量(Mw)、數(shù)均分子質(zhì)量(Mn)以及多分散系數(shù)D＝Mw/Mn。

1.4.4 硫酸根含量測(cè)定

采用離子色譜法[12]，選用ICS-2000 離子色譜系統(tǒng)，用Ionpac AS11-HC(4mm×250mm)色譜柱測(cè)定。

1.4.5 單糖組成測(cè)定

采用柱前衍生高效液相色譜法[13-14]，并按照參考文獻(xiàn)[15]制備各組分的單糖衍生物，選用ZORBAX Eclipse XDB-C18分離柱(4.6mm×250mm，5μm)進(jìn)行分析。

1.4.6 動(dòng)物分組及實(shí)驗(yàn)

KM小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和海帶巖藻聚糖硫酸酯組分F-2、Fa和Fb的低、中、高劑量組，每組10只，組間平均體質(zhì)量相近。小鼠分別灌胃不同劑量的海帶巖藻聚糖硫酸酯溶液(分別為25、50、100mg/(kg·d))，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃鹽酸左旋咪唑(20mg/(kg·d))，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃生理鹽水，灌胃劑量為0.01mL/(g·d)，所有組均連續(xù)灌胃28d。除正常對(duì)照組外，其余各組均于首次給藥后第21天皮下注射氫化可的松15mg/(kg·d)，連續(xù)注射6d，正常小鼠皮下注射等量生理鹽水。于末次給藥后，禁食不禁水12h后，進(jìn)行各免疫指標(biāo)的測(cè)定[16]。

1.4.7 胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量、脾質(zhì)量/體質(zhì)量比值測(cè)定

KM小鼠于末次給藥后，禁食不禁水12h，分別稱(chēng)其質(zhì)量，脫頸椎處死，剝離脾臟稱(chēng)其質(zhì)量并計(jì)算脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量和胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量比值測(cè)定。

1.4.8 血清溶血素抗體生成測(cè)定

KM小鼠于首次給藥后第23天，每只腹腔注射0.2mL體積分?jǐn)?shù)10%的SRBC致敏。于末次給藥后12h，摘眼球收集血液。分離血清，按體積比1:200生理鹽水稀釋。按文獻(xiàn)[17]方法測(cè)定小鼠血清溶血素含量，計(jì)算半數(shù)溶血值(HC50)。

1.4.9 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)測(cè)定

KM小鼠致敏方法同1.4.8節(jié)。于末次給藥后在測(cè)量部位足墊用20μL體積分?jǐn)?shù)20%的SRBC再次攻擊左后足趾，24h后脫頸椎處死，分別剪下左后足與右后足，同時(shí)測(cè)量左后足與右后足質(zhì)量，并計(jì)算攻擊前后左后足與右后足質(zhì)量的差值[18]。

1.4.10 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力測(cè)定

KM小鼠于末次給藥后12h，每鼠腹腔注射1mL 2%雞紅細(xì)胞懸液，30min后脫頸椎處死。小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的收集、染色和計(jì)數(shù)參見(jiàn)文獻(xiàn)[19]方法。

1.4.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS11.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，進(jìn)行Least-Significant Difference(LSD)比較，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 巖藻聚糖硫酸酯化學(xué)性質(zhì)的比較

圖1 低分子質(zhì)量組分Fa和Fb的分子質(zhì)量測(cè)定曲線Fig.1 HPLC chromatograms of fucoidan fractions (Fa and Fb) with low weights

表1 巖藻聚糖硫酸酯各組分的分子質(zhì)量和硫酸根含量的比較Table 1 Comparison of molecular weights and sulfated ester contents of different fucoidan fractions

如圖1、表1所示采用酸提取法可以將高分子質(zhì)量的巖藻聚糖硫酸酯(200kD)降解，得到的高硫中分子質(zhì)量巖藻聚糖硫酸酯組分F-2分子質(zhì)量為35kD，多分散系數(shù)較大，說(shuō)明其為多個(gè)組分的混合物。F-2主要含有巖藻糖(46.20%)、甘露糖(19.75%)和半乳糖(12.36%)，還含有一定量的鼠李糖、木糖和D-葡萄糖醛酸。而巖藻聚糖硫酸酯粗多糖經(jīng)自由基氧化降解后，得到的重均分子質(zhì)量為7.68kD組分(Fa組分)在高效液相色譜分析中呈單一對(duì)稱(chēng)峰，且分布范圍較窄，組分較純(圖1)，主要由巖藻糖組成，達(dá)到64.25%，其次是半乳糖含量上升到30.74%(表2)，巖藻糖和半乳糖占總單糖組成的94.99%，而甘露糖、鼠李糖和葡萄糖含量很低。而3.89kD的組分主要由重均分子質(zhì)量為6.52kD和4.73kD的兩個(gè)組分組成，采用TSK2500色譜柱也無(wú)法分離，其硫酸根含量最高，達(dá)到32.48%，主要由巖藻糖(46.94%)和半乳糖(37.35%)組成，巖藻糖含量明顯低于7.68kD的組分。

表2 巖藻聚糖硫酸酯各組分組成單糖的物質(zhì)的量比例Table 2 Comparison of molar proportion of monosacchrides in different fucoidan fractions

2.2 巖藻聚糖硫酸酯對(duì)小鼠脾質(zhì)量/體質(zhì)量和胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量比值的影響

由表3可見(jiàn)，注射氫化可的松后，小鼠脾質(zhì)量/體質(zhì)量和胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量比值均明顯降低。與模型對(duì)照組比較，灌胃50mg/kg和100mg/kg的 Fb組分可以顯著提高小鼠脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量比值(P＜0.05)，而灌胃100mg/kg 的F-2和Fa組分均能顯著提高小鼠脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量比值(P＜0.01，P＜0.05)。但是F-2、Fa和Fb各劑量組對(duì)胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量比值均無(wú)顯著性影響(P＞0.05)。

2.3 對(duì)小鼠血清溶血素水平的影響

由表3可見(jiàn)，與模型對(duì)照組相比，F(xiàn)-2組分可顯著提高免疫低下小鼠血清溶血素含量，灌胃50mg/kg和100mg/kg F-2組分，其半數(shù)溶血值分別提高了17.37%和23.02%。Fa(100mg/kg)和Fb(50mg/kg)組分也能顯著提高小鼠半數(shù)溶血值，與模型組比較半數(shù)溶血值分別提高了23.27%和14.53%。但是不同分子質(zhì)量的巖藻聚糖硫酸酯組分之間沒(méi)有顯著性差異。

2.4 對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響

由表3可見(jiàn)，與模型對(duì)照組相比，F(xiàn)-2和Fa組分均分別灌胃50mg/kg和100mg/kg巖藻聚糖硫酸酯均能顯著增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力(P＜0.05，P＜0.01)，分別提高了35.25%、28.81%、32.72%和48.48%。而分子質(zhì)量為3.89kD組分Fb各劑量組對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)均無(wú)顯著性影響。

表3 不同海帶巖藻聚糖硫酸酯組分對(duì)免疫低下模型小鼠免疫功能的影響(±s，n＝10)Table 3 Effects of fucoidan fractions on immune function of immunodepression mice (±s，n ＝ 10)

表3 不同海帶巖藻聚糖硫酸酯組分對(duì)免疫低下模型小鼠免疫功能的影響(±s，n＝10)Table 3 Effects of fucoidan fractions on immune function of immunodepression mice (±s，n ＝ 10)

注： ##.與正常對(duì)照組相比較，有極顯著差異(P＜0.01)；*.與模型對(duì)照組相比較，有顯著性差異(P＜0.05)；**.與模型對(duì)照組相比較，有極顯著性差異(P＜0.01)。下同。

組別 劑量/(mg/(kg·d)) 脾質(zhì)量/體質(zhì)量/(mg/kg) 胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量/(mg/kg) 半數(shù)溶血值(HC50) 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)/mg正常對(duì)照組 5.52± 0.67 1.67± 0.24 83.74± 11.52 22.79± 2.27模型對(duì)照組 3.21± 0.5 0.51± 0.14## 61.59±12.28## 11.49±2.05##陽(yáng)性對(duì)照組 20 3.52± 0.66 0.76± 0.31 73.64± 10.50* 17.18±1.86**25 3.68± 0.78 0.56± 0.16 69.78± 12.03 13.33± 4.38 F-2組 50 3.98± 0.83 0.53± 0.13 72.29±9.51* 15.54± 3.87**100 4.34± 0.97** 0.61± 0.11 75.77±6.53** 14.8±2.18*25 3.35± 0.22 0.62± 0.12 71.01± 9.11 12.23± 6.61 Fa組 50 3.44± 0.56 0.65± 0.18 73.77±14.68 15.25± 3.43*100 3.67± 0.53* 0.55± 0.12 75.92±12.91* 17.06±3.80**25 3.45± 1.14 0.62± 0.12 68.89± 13.64 13.00± 4.40 Fb組 50 3.55± 0.49* 0.65± 0.18 70.54±4.68* 13.99± 3.26 100 3.77± 0.46* 0.55± 0.12 69.73±14.59 13.825±3.97

2.5 對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

表4 不同海帶巖藻聚糖硫酸酯組分對(duì)免疫低下小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響(±s，n＝10)Table 4 Effects of fucoidan fractions on phagocytic functions of immunodepressed mice (±s，n ＝ 10)

表4 不同海帶巖藻聚糖硫酸酯組分對(duì)免疫低下小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響(±s，n＝10)Table 4 Effects of fucoidan fractions on phagocytic functions of immunodepressed mice (±s，n ＝ 10)

組別 劑量/(mg/(kg·d)) 吞噬指數(shù) 吞噬率/%正常對(duì)照組 0.35± 0.03 24.67± 1.94模型對(duì)照組 0.24± 0.07## 15.90±4.48##陽(yáng)性對(duì)照組 20 0.3± 0.05* 20.10± 2.69*25 0.29±0.09 18.50±3.92 F-2組 50 0.31± 0.06* 23.80±3.97**100 0.32± 0.09* 24.60±3.78**25 0.33±0.09* 21.33± 4.21*Fa組 50 0.33± 0.08* 21.56±4.93*100 0.35± 0.06** 22.30±4.59**25 0.28±0.06 18.60±3.63 Fb組 50 0.29± 0.07 22.20±2.66**100 0.39± 0.11** 23.63±3.62**

從表4可以看出，F(xiàn)-2及自由基氧化得到的低分子質(zhì)量組分Fa和Fb均能夠顯著提高免疫低下小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力(P＜0.05，P＜0.01)。其中F-2(50mg/kg和100mg/kg)、Fa(50mg/kg和100mg/kg)和Fb(100mg/kg)均可以顯著提高腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)。

3 討論與結(jié)論

大量研究表明，多糖及其衍生物具有很好的免疫調(diào)節(jié)作用，而對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有毒性，屬于具有較強(qiáng)的絲裂原樣活性的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑[20]。海帶多糖是一種主要由巖藻糖、半乳糖和甘露糖組成的雜多糖，還含有較高的硫酸根。高分子質(zhì)量的巖藻聚糖硫酸酯由于分子質(zhì)量大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，難于研究其活性原理和構(gòu)效關(guān)系。而且高分子質(zhì)量巖藻糖水溶性差，大量服用會(huì)明顯延長(zhǎng)凝血時(shí)間[21]。

本研究采用實(shí)驗(yàn)室制備的中分子質(zhì)量和低分子質(zhì)量的巖藻聚糖硫酸酯組分，觀察了巖藻聚糖硫酸酯在體內(nèi)對(duì)氫化可的松所致免疫低下小鼠的作用，發(fā)現(xiàn)巖藻聚糖硫酸酯可以顯著增強(qiáng)脾臟的發(fā)育，提高小鼠的體液免疫機(jī)能如血清溶血素和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞免疫機(jī)能如腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力。對(duì)溶血素的產(chǎn)生和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的恢復(fù)，證明它是一種對(duì)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞有直接作用的免疫調(diào)節(jié)劑。目前一般認(rèn)為，免疫活性的增強(qiáng)與腫瘤和病毒免疫監(jiān)控有密切的關(guān)系，巖藻聚糖硫酸酯促進(jìn)的免疫活性有益于人們進(jìn)一步研究藥物對(duì)腫瘤免疫和病毒免疫的作用。

本實(shí)驗(yàn)比較發(fā)現(xiàn)，灌胃不同的分子質(zhì)量、硫酸根含量和單糖組成的巖藻聚糖硫酸酯在提高免疫低下小鼠的免疫功能方面沒(méi)有顯著性差異。經(jīng)自由基氧化降解得到的低分子質(zhì)量的巖藻聚糖硫酸酯仍然具有較好的免疫活性，而且易于吸收，食用安全，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，為以后研究巖藻聚糖硫酸酯活性的構(gòu)效關(guān)系提供參考。

[1] 林洪, 江潔, 薛長(zhǎng)湖, 等. 褐藻巖藻聚糖結(jié)構(gòu)和活性研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)海洋藥物, 2002(6): 42-47.

[2] POMIN V H, PAULO A S M. Structure, biology, evolution and medical importance of sulfated fucans and galactans[J]. Glycobiology, 2008, 18(12): 1016-1027.

[3] BERTEAU O, MULLOY B. Sulfated fucans, fresh perspectives: structures,functions and biological properties of sulfated fucans and an overview of enzymes active toward this class of polysaccharide[J]. Glycobiology,2003, 13(6): 29-40.

[4] 劉治東, 王靜鳳, 王玉明, 等. 魷魚(yú)墨黏多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2009(9): 147-150.

[5] 王文濤, 周金黃, 邢善田, 等. 海藻硫酸多糖對(duì)正常及免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用[J]. 中國(guó)藥理學(xué)及毒理學(xué)雜志, 1994, 8(3): 199-202.

[6] CLOYD M W, CHEN J J Y, WANG Liqiang. How does HIV cause AIDS ? The homing theory[J]. Mol Med Today, 2000, 6(3): 108-111.

[7] 錢(qián)宗玲. 艾滋病藥物最新研究進(jìn)展[J] . 中國(guó)新藥雜志,1997, 6(6): 407-409.

[8] 宋劍秋, 徐譽(yù)泰, 張華坤, 等. 海帶硫酸多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用[J]. 中國(guó)免疫學(xué)雜志, 2000, 16(2): 70.

[9] 邊棣. 去氫駱駝蓬堿對(duì)小鼠免疫功能的影響[J]. 中國(guó)藥理學(xué)報(bào), 1987,8(5): 477-478.

[10] NARDELLA A, CHAUBET F, VIDAL C B, et al. Anticoagulant low molecular weight fucans produced by radical process and ion exchange chromatography of high molecular weight fucans extracted from the brown seaweedAscophyllum nodosum[J]. Carbohydr Res, 1996, 289:201-208.

[11] 魏遠(yuǎn)安, 方積年. 高效凝膠滲透色譜法測(cè)定多糖純度及分子量[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 1989, 24(7): 532-536.

[12] 尹利昂, 陳士國(guó), 薛長(zhǎng)湖, 等. 四種海參中含巖藻糖支鏈的硫酸軟骨素化學(xué)組成差異的分析[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2009,39(9): 63-68.

[13] FU D, ONEILL R A. Monosaccharide composition analysis of oligosaccharides and glycoproteins by high-performance liquid chromatography[J]. Anal Biochem, 1995, 227(2): 377-384.

[14] STRYDOM D J. Chromatographic separation of 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone -derivatized neutral, acidic and basic aldoses[J]. J Chromatogr A, 1994, 678(11): 17-23.

[15] YUTAKA K, SHUGO W, MAMORU K, et al. Structure of fucose branches in the glycosaminogly can from the body wall of the sea cucumberStichopus japonicus[J]. Carbohydrate Res, 1997, 297(39):273-279.

[16] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司. 保健食品檢測(cè)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范(2003年版) [S]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2003: 27-29.

[17] MIYAKE M, TAKI T, HITOMI S, et al. Correlation of expression of H/Ley/Leb antigens with survival in patients with carcinoma of the lung[J].New Engl J Med, 1996, 327(1): 14-18.

[18] 王靜鳳, 王奕, 趙林, 等. 日本刺參的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究[J].中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2007, 37(1): 93-96.

[19] 王靜鳳, 胡京濱, 李立德. 海脈沖營(yíng)養(yǎng)素(HMC)研究: HMC對(duì)小鼠免疫功能的影響[J]. 青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 1997, 27(4): 521-526.

[20] 田庚元, 馮宇澄. 多糖類(lèi)免疫調(diào)節(jié)劑的研究和應(yīng)用[J]. 化學(xué)進(jìn)展,1994, 6(2): 114-124.

[21] LI Ning, ZHANG Quanbin, SONG Jinming. Toxicological evaluation of fucoidan extracted fromLaminaria japonicain Wistar rats[J]. Food and Chemical Toxicology, 2005, 43(3): 421-426.

Immunomodulatory Effect of Fucoidan fromLaminaria japonicain Mice

LI Fang，LI Ba-fang，WANG Jing-feng，ZHANG Jing，LI Yao，ZHAO Xue*
(College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)

Objective: To investigate the effect of fucoidan fromLaminaria japonicaon immune regulation in immunodepressed mice by oral administration. Methods: In this study, different fucoidan fractions were obtained by acid hydrolysis, anion exchange chromatography on Q-Sepharose FF and free radical oxygen degradation and ultrafiltration technology from high molecular weight fucoidan extracted fromLaminaria japonica. The fractions with higher sulfate ester and fucose content on immune regulation were selected by chemical analysis. KM mice were randomly divided into twelve groups: normal control group, model control group, positive group, low dosage (25 mg/(kg·d)), medium dosage (50 mg/(kg·d)) and high dosage (100 mg/(kg·d)) groups of F-2, Fa and Fb fractions, respectively. The immune regulation was investigated by using the model mice in normal and in immunodepression induced by hydrocortisone. Results: The effect on immune function of mice administered with different fucoidan fractions fromLaminaria japonicadid not reveal significant difference. All F-2, Fa and Fb could antagonize the decline of spleen/body weight induced by hydrocortisone, increase hemolysin content (HC50), and promote the ability of macrophages for celiac macrophage. Meanwhile, both F-2 and Fa could improve delayed hypersensitivity level, while Fb had no significant effect on delayed hypersensitivity level. Conclusion: Fucoidan fraction had an excellent effect on immune regulation in immunodepressed mice. However, these fractions did not reveal significant difference in the effect on immune function of mice.

fucoidan；immunodepressed mice；immune regulation

Q946.3；TS218

A

1002-6630(2012)05-0238-05

2011-04-19

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30800858)；山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZR2010CQ020)

李芳(1986—)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)楹Ｑ笊锘钚晕镔|(zhì)。E-mail：lifang8626616@126.com

*通信作者：趙雪(1976—)，女，講師，博士，研究方向?yàn)楹Ｑ蠡钚晕镔|(zhì)。E-mail：zhaoxue@ouc.edu.cn