孫克剛 施建國 蔣宇丹

（上海禾豐制藥有限公司 上海 201206）

鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液，主要成份分別為鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸腎上腺素。兩者均為腎上腺素類受體激動劑，使心臟收縮力增強，心率加快，骨骼肌血管、支氣管平滑肌舒張。臨床上做為搶救藥，用于治療心源性或感染性休克、心搏驟停等。鹽酸異丙腎上腺素注射液[1]和鹽酸腎上腺素注射液[2]均為《中國藥典》2010年版二部收載品種，均采用高效液相色譜法進行含量測定及有關物質檢查，但色譜條件不同，為將兩個品種的檢驗方法進行統(tǒng)一，以方便生產(chǎn)檢驗，本文在中國藥典提供的色譜系統(tǒng)的基礎上進行優(yōu)化，建立了同一種色譜條件測定鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液的含量與有關物質。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1100高效液相色譜儀，VWD紫外檢測器，Sartorius CPA225 D電子天平。鹽酸異丙腎上腺素(山東科源制藥有限公司)；腎上腺素(武漢武藥制藥有限公司)；鹽酸異丙腎上腺素注射液(規(guī)格：2 ml∶1 mg)和鹽酸腎上腺素注射液(規(guī)格：1 ml∶1 mg)由本公司提供。乙腈、甲醇、庚烷磺酸鈉為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 鹽酸異丙腎上腺素注射液的溶液制備

1)供試品溶液的制備。精密量取鹽酸異丙腎上腺素注射液適量，加0.1%焦亞硫酸鈉溶液制成20 μg·ml-1的溶液。

2)對照品溶液的制備。精密稱取鹽酸異丙腎上腺素對照品適量，加0.1%焦亞硫酸鈉溶液溶解并定量稀釋制成 20 μg·ml-1的溶液。

3)對照溶液的制備。精密量取鹽酸異丙腎上腺素注射液1 ml，置100 ml量瓶中，加0.1%焦亞硫酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。

2.2 鹽酸腎上腺素注射液的溶液制備

1)供試品溶液的制備。精密量取鹽酸腎上腺素注射液適量，加4%醋酸溶液制成0.12 mg·ml-1的溶液。

2) 對照品溶液的制備。精密稱取腎上腺素對照品適量，加4%醋酸溶液溶解并定量稀釋制成0.12 mg·ml-1的溶液。

3)對照溶液的制備。精密稱取重酒石酸去甲腎上腺素對照品12 mg，置10 ml量瓶中，加流動相溶解至刻度，搖勻，精密量取1 ml，置100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成12 μg·ml-1去甲腎上腺素的溶液。精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，精密加入供試品溶液5 ml，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.3 空白輔料溶液的制備

稱取焦亞硫酸鈉適量，用4%醋酸溶液溶解并稀釋制成0.2 mg/ml焦亞硫酸鈉的溶液。

2.4 色譜條件

色譜柱：Welch Materials C18色譜柱 (4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：甲醇-乙腈-庚烷磺酸鈉溶液（取庚烷磺酸鈉1.76 g，加水溶解并稀釋至800 ml，搖勻）（1∶1∶ 8）。檢測波長：280 nm；流速：2.0 ml/min；柱溫：30 ℃。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

取重酒石酸去甲腎上腺素對照品10 mg，加0.1 mol/L鹽酸5 ml使溶解，取1 ml，加30%過氧化氫溶液0.1 ml，搖勻，在紫外光燈（254 nm）下照射90 min，加流動相9 ml，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗溶液[3]。取系統(tǒng)適用性試驗溶液20 μl，注入液相色譜儀，除主成分峰外，應有相對保留時間1.2和1.5的兩個降解峰，主峰及兩個降解產(chǎn)物之間的分離度均應符合要求。理論板數(shù)按去甲腎上腺素峰計算不低于2 000（圖1）。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗溶液色譜圖

2.6 專屬性試驗

分別取空白輔料溶液及兩種注射液的供試品溶液、對照品溶液各20 μl，進樣，結果表明空白輔料不干擾鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸腎上腺素的含量測定（圖2、圖3）。

圖2 鹽酸異丙腎上腺素注射液輔料、對照品溶液與供試品溶液色譜圖

2.7 線性關系及范圍

分別精密稱取鹽酸異丙腎上腺素適量，按“2.1 2)”配 制 成 10、16、20、24、32、40 μg·ml-1的 溶 液， 各取20 μl，按“2.4”項下測定，記錄色譜圖。以鹽酸異丙腎上腺素峰面積(X)對其質量濃度(Y，mg·ml-1)進行回歸，得鹽酸異丙腎上腺素回歸方程為：Y=5.935×103X-21.50，r=0.999 9。結果表明鹽酸異丙腎上腺素在10～40 μg·ml-1范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

圖3 鹽酸腎上腺素注射液輔料、對照品溶液與供試品溶液色譜圖

分別精密稱取腎上腺素適量，按“2.2 2)”配制成60、96、120、144、192、240 μg·ml-1的溶液，各取 20 μl，按 “2.4”項下測定，記錄色譜圖。以鹽酸腎上腺素峰面積(X)對其質量濃度(Y，mg·ml-1)進行回歸，得鹽酸腎上腺素注射液回歸方程為：Y=1.142×104X+26.56，r=0.999 6。結果表明腎上腺素在60～240 μg·ml-1范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

2.8 檢測限的考察

按信噪比3∶1測得鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸腎上腺素最小檢測限為 40.66 ng·ml-1和 44.12 ng·ml-1。

2.9 精密度試驗

配制供試品溶液共6份，分別進樣20 μl，鹽酸異丙腎上腺素注射液標示量RSD值為0.44%，鹽酸腎上腺素注射液標示量RSD值為0.09%。

2.10 回收試驗

按處方量的80%、100%、120%并分別按“2.1”和“2.2”配制16、20、24 μg·ml-1的鹽酸異丙腎上腺素溶液和96、120、144 μg·ml-1鹽酸腎上腺素溶液，各取 20 μl，按“2.4”項下方法測定，計算得鹽酸異丙腎上腺素的平均回收率為100.5%，RSD值為0.76%(n=9)；鹽酸腎上腺素的平均回收率為100.2%，RSD值為0.60%(n=9)。

2.11 含量測定

取對照品溶液、供試品溶液各20 μl，按照“2.4”項下方法測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算。將鹽酸異丙腎上腺素注射液三批和鹽酸腎上腺素注射液三批含量測定結果分別與《中國藥典》2010年版方法比較，差異不大(表1、2)。

表1 鹽酸異丙腎上腺素注射液三批含量測定結果

表2 鹽酸腎上腺素注射液三批含量測定結果

2.12 有關物質的檢查

精密吸取空白輔料溶液、對照溶液、鹽酸異丙腎上腺素注射液各100 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰（扣除相對保留時間為0.07之前的輔料峰和溶劑峰），與輔料峰相鄰的最大色譜峰不得大于對照溶液主峰（鹽酸異丙腎上腺素）面積的10倍（10.0%）；其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的1.5倍（1.5%），其他各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的2倍（2.0%）(表3、圖4)。

表3 鹽酸異丙腎上腺素注射液三批有關物質測定結果

圖4 鹽酸異丙腎上腺素注射液有關物質色譜圖

精密吸取空白輔料溶液、供試品溶液、對照溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液的色譜圖中如有與去甲腎上腺素峰保留時間一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算，不得過腎上腺素標示量的1.0%。如有其他雜質峰，扣除焦亞硫酸鈉峰、醋酸峰及之前的輔料峰，與輔料峰相鄰的最大色譜峰不得大于對照溶液中腎上腺素峰的峰面積(10%)，及其他各雜質峰面積之和不得大于對照溶液中腎上腺素峰面積的0.1倍(1.0%)(表4、圖5)。

表4 鹽酸腎上腺素注射液三批有關物質測定結果

圖5 鹽酸腎上腺素注射液有關物質色譜圖

2.13 鹽酸異丙腎上腺素與鹽酸腎上腺素的同時測定

分別取鹽酸異丙腎上腺素注射與鹽酸腎上腺素注射液供試品溶液5 ml和1 ml，混勻，進樣20 μl，結果發(fā)現(xiàn)鹽酸異丙腎上腺素與鹽酸腎上腺素兩峰分離效果良好（圖 6）。

圖6 鹽酸異丙腎上腺素注射液與鹽酸腎上腺素注射液主峰分離色譜圖

3 討論

經(jīng)實驗比較，本法與藥典法無差異，但本法同時適用于鹽酸異丙腎上腺素注射液、鹽酸腎上腺素注射液的含量測定和有關物質檢查，方便生產(chǎn)上對腎上腺素類產(chǎn)品的同時檢驗。

參考《中國藥典》2010年版二部中鹽酸異丙腎上腺素注射液的流動相：庚烷磺酸鈉溶液-甲醇（80∶20）（用1 mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0），為使流動相同時適用于鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸腎上腺素，對流動相的比例進行調(diào)整，發(fā)現(xiàn)流動相比例為甲醇-乙腈-庚烷磺酸鈉溶液（1∶1∶8）時，主成分峰與雜質峰的分離情況最好，故選用其為流動相。紫外掃描圖顯示鹽酸異丙腎上腺素和腎上腺素均在280 nm波長有最大吸收，因此選擇280 nm波長作為檢測波長。美國藥典[4]記載鹽酸腎上腺素注射液含量測定采用的色譜柱長度為150 mm，流速采用2.0 ml/min，經(jīng)試驗用柱長為250 mm的色譜柱，主峰出峰都較晚，為25 min之后，故選擇采用150 mm長度的色譜柱，流速采用2.0 ml/min。

鹽酸異丙腎上腺素與鹽酸腎上腺素分子結構中均具有兒茶酚（鄰苯二酚）結構，性質不穩(wěn)定，接觸空氣或受日光照射，極易被氧化變質，故制成注射液需加入焦亞硫酸鈉作為抗氧劑。但焦亞硫酸與鄰苯二酚易生成磺化物，雖可通過本文所研究的色譜方法對該磺化物進行分析，但還須對該磺化物生成過程進一步研究確認，且在有必要時應進行相關的藥理毒理研究。

鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液，光照、高溫破壞后降解產(chǎn)物較少，酸、堿、氧化破壞后均產(chǎn)生大量降解產(chǎn)物。但主成分與降解產(chǎn)物的分離度均符合要求，不干擾鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液含量及有關物質測定。

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：2010 年版（二部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：701-702.

[2] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：2010 年版（二部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：460.

[3] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：2010 年版（二部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010： 571-572.

[4] The United States Pharmacopeial Convention .USP34-NF29[M]. Rockcille：The United States Pharmacopeial Convention，2011：2701.