羅開梅，鄒金美，方吉樂，鄭建萍，鄭靈榕，張國(guó)廣

(漳州師范學(xué)院生物系，福建漳州 363000)

楮頭紅的抗氧化活性研究

羅開梅，鄒金美，方吉樂，鄭建萍，鄭靈榕，張國(guó)廣*

(漳州師范學(xué)院生物系，福建漳州 363000)

分別用純水、60%乙醇和無水乙醇三種溶劑對(duì)楮頭紅進(jìn)行提取，檢測(cè)了三種提取物中的總黃酮含量及其抗氧化活性。結(jié)果表明純水、60%乙醇和無水乙醇三種溶劑提取物中的總黃酮含量分別為0.081、0.311、0.217mg/mL，三種提取物都具有較好的抗氧化能力，其中以黃酮含量最高的60%乙醇提取物的總抗氧化、抑制羥基自由基和超氧陰離子自由基活力最強(qiáng)，三種提取成分的抗氧化活性及對(duì)自由基的抑制能力在1～7g/L的濃度范圍內(nèi)呈量效關(guān)系，且與總還原力測(cè)定結(jié)果呈正對(duì)應(yīng)關(guān)系。

楮頭紅，總抗氧化能力，還原力，羥自由基，超氧陰離子自由基

生物代謝過程中發(fā)生的一系列氧化還原反應(yīng)中會(huì)產(chǎn)生一些活性自由基等代謝中間產(chǎn)物，人體內(nèi)過量的自由基會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化，損傷DNA和蛋白質(zhì)分子，從而對(duì)細(xì)胞和組織造成傷害，進(jìn)而誘發(fā)細(xì)胞衰老或人罹患多種疾病。適當(dāng)食用一些具有抗氧化活性的物質(zhì)可清除體內(nèi)自由基，對(duì)一些疾病有輔助治療作用，因此，近年來從中草藥中尋找功效明顯、毒副作用小的天然抗氧化物質(zhì)或其它天然活性物質(zhì)成為新藥開發(fā)或篩選新型抗氧化食品添加劑的有效途徑之一。楮頭紅(Sarcopyramis nepalensisWall)又名風(fēng)柜斗草，是野牡丹科肉穗草屬植物，在我國(guó)主要分布于廣東、廣西、臺(tái)灣、福建、四川、云南、湖北、江西等省份，全草可藥用，具有清熱解毒、清肝瀉火之功效，可以用于治療急、慢性肝炎、肺熱咳嗽、蛇頭疔、無名腫毒、胃腸炎等疾?。?］，該植物鮮草或干草在福建閩南地區(qū)廣為使用，除中藥房外，市場(chǎng)上也有鮮草售賣，是一種極有價(jià)值的藥用植物資源［2］。已有一些研究報(bào)道了楮頭紅中富含黃酮類、多酚、皂苷、鞣質(zhì)、游離苷類、還原糖、有機(jī)酸等化學(xué)成分［3－6］，但對(duì)其系統(tǒng)的體外抗氧化性的研究尚不充分，本研究開展了對(duì)楮頭紅體外抗氧化性的研究，為更好的開發(fā)利用該資源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

楮頭紅鮮草 2011年11月份購(gòu)自漳州市薌城區(qū)北橋市場(chǎng)青草鋪，該植物正處于開花結(jié)果期，經(jīng)檢索鑒定為楮頭紅;羥自由基測(cè)定試劑盒、超氧陰離子自由基測(cè)定試劑盒、總抗氧化能力測(cè)定試劑盒 購(gòu)自南京建成生物工程研究所;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品鑒定所;亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉 分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司。

RE52－99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠; AR124CN電子分析天平 美國(guó)奧豪斯;超聲波細(xì)胞破碎儀 寧波新芝生物公司;UV－1750紫外可見光分光光度計(jì) 日本島津。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 楮頭紅提取物的制備 將新鮮楮頭紅清洗晾干后稱取10g，研缽研碎，用約200mL純水將研碎的材料沖洗入燒杯中，將燒杯置于超聲波細(xì)胞破碎儀中超聲破碎提取30min，采用的超聲波破碎程序是破碎15s、間歇15s、超聲頻率40Hz、超聲功率800W，超聲破碎中外加冰塊控制溫度不超過70℃。超聲提取結(jié)束后4℃，12000r/min離心收集上清液，65℃減壓濃縮后定容至終濃度為0.1g/mL(以鮮草重量計(jì)算)的純水提取物(PWE)備用。將提取溶劑分別更換為60%乙醇和無水乙醇，重復(fù)上述步驟分別得到0.1g/mL的60%乙醇提取物(60%EE)和無水乙醇提取物(AEE)備用。

1.2.2 三種溶劑提取物中總黃酮含量的測(cè)定［7］蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的建立:精密稱取蘆丁對(duì)照品5mg，置于50mL容量瓶中，加無水乙醇適量，超聲處理使其溶解，純水定容，搖勻，即得濃度為0.1mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于6只10mL具刻度試管中，用60%乙醇定容至5mL，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，靜置6min，加10%硝酸鋁0.3mL，搖勻，放置6min，加入5%氫氧化鈉溶液4mL，加純水定容，搖勻，靜置15min，以不加標(biāo)準(zhǔn)樣品液管為空白，于510nm測(cè)定吸光度，以吸光值為縱坐標(biāo)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量(mg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為:A=1.3146x+ 0.0062，R2=0.9992。

三種提取溶劑中總黃酮含量的測(cè)定:分別精密量取1.0mL三種溶劑提取物，按照上述的方法在510nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)回歸方程計(jì)算提取物中總黃酮的含量。

1.2.3 三種溶劑提取物總抗氧化能力測(cè)定 將三種溶劑提取物配制成以鮮草計(jì)1、2、3、4、5、6、7g/L系列濃度，每個(gè)濃度做三個(gè)平行，用分光光度計(jì)于520nm測(cè)吸光度，操作步驟及測(cè)定方法按試劑盒說明書提供的方法進(jìn)行測(cè)定?？偪寡趸芰?T－AOC)定義為在37℃時(shí)，每分鐘每毫升樣品使反應(yīng)體系的吸光度(OD)值每增加0.01時(shí)，為一個(gè)總抗氧化能力單位(U)。

1.2.4 三種提取物抑制羥自由基能力和抑制超氧陰離子自由基能力測(cè)定 將三種提取物配制成1、2、3、4、5、6、7g/L系列濃度，操作步驟及測(cè)定方法按兩種試劑盒說明書提供的方法進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)濃度做三個(gè)平行，用分光光度計(jì)于550nm處測(cè)吸光度，抑制率按照試劑盒提供說明書進(jìn)行計(jì)算。

1.2.5 總還原力測(cè)定［8］分別從三種提取物配制成的系列濃度中取1mL溶液，加0.2mL 0.2mol/L pH6.6的磷酸鹽緩沖液，然后加入0.5mL 1%K3［Fe(CN)6］混勻，50℃水浴中反應(yīng)20min，取出后迅速冷卻，加入1mL 10%的三氯乙酸混勻，12000×g離心5min，取1.5mL上清液，加入0.2mL 1%FeCl3和3mL蒸餾水搖勻，用純水做對(duì)照，5min后，于700nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，吸光度值越大表示還原能力越強(qiáng)。同時(shí)設(shè)置系列濃度的VC為陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)用origin 6.1軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 楮頭紅三種溶劑提取物中總黃酮含量

測(cè)得楮頭紅PWE、60%EE和AEE母液(濃度均為鮮草 0.1g/mL)的吸光值分別為 0.113、0.415、0.292，代入線性回歸方程Y=1.3146x+0.0062，計(jì)算得到三種溶劑提取物中總黃酮含量分別為0.081、0.311、0.217mg/mL，其中60%EE中總黃酮含量最高，三者間黃酮含量差異達(dá)到顯著水平。

2.2 楮頭紅提取物總抗氧化能力

楮頭紅三種溶劑提取物的總抗氧化能力在設(shè)定的濃度范圍內(nèi)隨提取物濃度的增加而增強(qiáng)(圖1)，呈一定的量效關(guān)系。三種溶劑的提取物總抗氧化能力有所差異，相同濃度下60%EE總抗氧化能力最強(qiáng)。在60%EE濃度為7g/L時(shí)總抗氧化能力達(dá)到最高值，為7.995U/mL，總抗氧化能力的高低與總黃酮含量有一定的相關(guān)性。

圖1 楮頭紅三種溶劑提取物總抗氧化能力測(cè)定結(jié)果Fig.1 Total antioxidative capacity of the three kindsof extracts of S.nepalensis

2.3 抑制羥自由基的能力

楮頭紅三種溶劑的提取物對(duì)羥自由基的抑制能力較強(qiáng)，在設(shè)定的最低濃度時(shí)清除率即達(dá)到80%以上，且均在1～7g/L范圍內(nèi)隨提取物濃度增大而抑制率增強(qiáng)，有一定的量效關(guān)系。總體比較，60%EE對(duì)羥自由基的抑制效果最好，60%EE在濃度為7g/L對(duì)羥自由基的抑制率最大達(dá)到98.2%。

圖2 楮頭紅三種溶劑提取物對(duì)羥自由基抑制能力Fig.2 Inhibition effects on·OH of the three kinds of extracts of S.nepalensis

2.4 抑制超氧陰離子的能力

三種溶劑的楮頭紅提取物對(duì)超氧陰離子的抑制能力均隨著濃度增大而增強(qiáng)，呈一定的量效關(guān)系。在三種提取物濃度均為7g/mL時(shí)，抑制超氧陰離子的能力由強(qiáng)到弱順序?yàn)?60%EE＞AEE＞PWE。

圖3 楮頭紅三種溶劑提取物抑制超氧陰離子的能力Fig.3 Inhibition effects on O2－·of the three kinds of extracts of S.nepalensis

2.5 總還原力測(cè)定結(jié)果

從三種溶劑提取物還原能力實(shí)驗(yàn)結(jié)果中(圖4)可以看出，同一溶劑提取物的還原能力隨著濃度的增大而增強(qiáng)，呈一定的量效關(guān)系。不同溶劑提取物的還原能力有所差異，由強(qiáng)到弱順序?yàn)?60%EE＞AEE＞PWE，該順序基本與三種提取物中總黃酮含量和總抗氧化能力結(jié)果一致。陽(yáng)性對(duì)照VC在較低濃度下測(cè)出的吸光值遠(yuǎn)高于提取物。

圖4 楮頭紅三種溶劑提取物總還原能力的測(cè)定結(jié)果Fig.4 Reduction abilities of the three kinds of extracts of S.nepalensis

3 結(jié)論與討論

本文研究了楮頭紅三種提取物的體外抗氧化活性，結(jié)果表明三種提取物都具有很好的抗氧化活性，且活性高低與濃度呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，總體比較三種溶劑中60%EE抗氧化活性明顯強(qiáng)于另外兩種提取物，這種抗氧化活性可能是由該提取物中濃度較高的黃酮類物質(zhì)賦予的。

楮頭紅三種溶劑提取物對(duì)羥自由基的抑制活性較強(qiáng)，在較低濃度下抑制率就達(dá)到80%以上，而對(duì)超氧陰離子自由基的抑制活性相對(duì)較弱，在設(shè)計(jì)的最大濃度下抑制率均小于30%，這表明對(duì)一特定自由基楮頭紅中具有清除作用的活性物質(zhì)可能為不同成分，或是多種成分綜合作用的結(jié)果。多數(shù)中草藥植物中含有大量的黃酮類、多酚類、皂苷類以及鞣質(zhì)類等有很強(qiáng)抗氧化活性的物質(zhì)［9］，已有報(bào)道［3－6］表明楮頭紅富含黃酮類、多酚、皂苷、鞣質(zhì)、游離苷類、還原糖、有機(jī)酸等成分，黃酮類成分含量較高的是槲皮素和異鼠李素［10－11］，李清祿［6］等對(duì)楮頭紅活性研究中也發(fā)現(xiàn)楮頭紅干品的水提取物和乙醇提取物有較強(qiáng)的清除羥自由基的活性，與本研究結(jié)果一致。

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Study on antioxidant activity ofSarcopyamis nepalensisWall extracts

LUO Kai－mei，ZOU Jin－mei，F(xiàn)ANG Ji－le，ZHENG Jian－ping，ZHENG Ling－rong，ZHANG Guo－guang*
(Department of Biological Science and Technology，Zhangzhou Normal University，Zhangzhou 363000，China)

Effectively active components ofSarcopyamis nepalensisWall were extracted using pure water，60% ethanol and anhydrous ethanol respectively，and then total flavonoids content and the antioxidant potency of the three kinds of extracts were investigated，employing various established in vitro systems including total antioxidative capacity，superoxide and hydroxyl radical inhibiting ability，reducing power.According to the results，total flavonoid content of pure water，60%ethanol and anhydrous ethanol three kinds of solvent extracts were 0.081，0.311 and 0.217mg/mL.Three kinds of extracts had good antioxidant activity;among them 60%ethanol extract was the strongest vitality in total antioxidant potency，hydroxyl radicals and superoxide radical inhibiting ability.Antioxidant ability of three kinds of extracts showed dose－effect relationship within 1～7g/L，moreover，there was compatible corresponding relation between antioxidant ability and the test results of reduction ability.

S.nepalensisWall;totalantioxidantcapacities;reduction ability;hydroxyradical;superoxide anion radical

TS201.4

A

1002－0306(2012)21－0109－03

2012－04－10 *通訊聯(lián)系人

羅開梅(1977－)，女，碩士，講師，主要從事天然產(chǎn)物的研究。

福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2010J01240);師院大學(xué)生科研立項(xiàng)項(xiàng)目。