蔣 磊，孟祥松，李 軍，益 磊，馬欣羽

(1.亳州市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽亳州236800;2.安徽中醫(yī)學(xué)院，安徽合肥230031)

蒲地藍(lán)消炎口服液是由蒲公英、黃芩、板藍(lán)根、苦地丁四味中藥組成，具有清熱解毒、抗炎消腫的功能?？捎糜诎X腫、腮腺炎、咽炎、淋巴結(jié)炎、扁桃體炎等疾病的治療［1］。蒲公英是蒲地藍(lán)消炎口服液的主藥之一，現(xiàn)代藥理研究表明，蒲公英的藥理作用主要有以下幾點(diǎn):抗菌及抗病毒作用、提高免疫功能的作用、抗胃損傷作用、保肝膽作用、抗腫瘤作用［2］。此外，蒲公英還是一味治療婦科疾病的良藥，單用即有可靠的效果，若以其為主組方辨證論治療效更佳。可用于回乳，更年期綜合征，女性腹痛等［3］。蒲地藍(lán)消炎口服液現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)收載的質(zhì)控項(xiàng)目中未對(duì)蒲公英有效成分進(jìn)行質(zhì)量控制，因此作者擬對(duì)處方中蒲公英的有效成分咖啡酸進(jìn)行定性定量控制研究。首先采用薄層色譜法作定性鑒別，并以口服液中特異性較強(qiáng)的咖啡酸為指標(biāo)，為了有效地控制制劑質(zhì)量，采用RP－HPLC法對(duì)處方中蒲公英的咖啡酸進(jìn)行含量測(cè)定，考察蒲地藍(lán)消炎口服液中咖啡酸的線性范圍、專屬性試驗(yàn)、精密度考察、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)，為蒲地藍(lán)消炎口服液的質(zhì)量控制提供簡(jiǎn)便可行，重現(xiàn)性好的方法，從而建立蒲地藍(lán)消炎口服液的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器、試劑與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀:型號(hào):Agilent 1200，Hypersil ODS(4.6 mm ×250 mm，2.5 μm)色譜柱，G1329A 自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，G1315D檢測(cè)器(上海禾工科學(xué)儀器有限公司)，超聲儀:型號(hào):JL360DT(上海吉理超聲儀器有限公司)，三用紫外分析儀:型號(hào):UV－8(無錫科達(dá)儀器廠)，離心沉淀機(jī):型號(hào):80－2(上海手術(shù)器械廠)，分析天平:型號(hào):ES－180J(沈陽(yáng)龍騰電子稱量責(zé)任有限公司)，分析天平:型號(hào):AB135－S(瑞士梅特勒－托利多)，數(shù)顯恒溫水浴鍋:型號(hào):HH－S6(江蘇省金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠)，酸度計(jì):型號(hào):PHS－25(上海第二分析儀器廠)。

1.2 試劑與試藥 咖啡酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110885－200102);水(娃哈哈純凈水，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司，批號(hào):20110409);乙腈(色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào):20110209);甲醇(色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào):20110209);其他試劑均為分析純。

1.3 藥品 蒲地藍(lán)消炎口服液(市售)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜分析

2.1.1 供試品溶液的制備 取本品10 mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液［6］。

2.1.2 陰性對(duì)照溶液的制備 取除蒲公英以外的其他3味藥材按處方制備成缺蒲公英的樣品，同2.1.1法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.3 對(duì)照品溶液的制備 取咖啡酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.4 薄層色譜分析 展開劑:三氯甲烷－甲醇－甲酸(9∶1∶0.5)，方法:吸取上述三種溶液各 5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，放入展開缸中展開，取出，晾干。置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品與對(duì)照品藥材在相同的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照則不顯斑點(diǎn)，見圖1。

圖1 蒲地藍(lán)消炎口服液的薄層鑒別

2.2 高效液相色譜分析

2.2.1 色譜條件 Hypersil ODS(4.6 mm × 250 mm，2.5 μm)色譜柱;流動(dòng)相:甲醇－磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鈉1.56 g，加水溶解為1 000 mL，再加1%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.8 ～4.0);檢測(cè)波長(zhǎng) 323 nm;流速 1.0 mL·min－1;柱溫40℃。理論板數(shù):以咖啡酸計(jì)算應(yīng)不低于3 000［4］。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對(duì)照品溶液［5］精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24 h的咖啡酸對(duì)照品8.95 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.2.2 供試品溶液 取本品2 mL，置10 mL量瓶中，加5%甲酸的甲醇溶液至刻度，搖勻，離心，取上清液，置棕色瓶中，即得。

2.2.2.3 陰性對(duì)照液 取除蒲公英以外的其他3味藥材按處方制備成缺蒲公英的樣品，再按供試品溶液方法制備，即得。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取按2.2.2.1項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液，分別取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 置于 10 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，由峰面積(Y)對(duì)相應(yīng)的濃度(X)直線回歸，得咖啡酸回歸方程為:Y=33.402X+16.38，r=0.999，表明咖啡酸在 8.95 ～53.7 μg·mL－1的濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)(見表 2、圖2)。

表2 咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.4 專屬性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、樣品溶液、陰性對(duì)照液注入色譜儀，記錄色譜圖，從圖3、4、5中可以看出，咖啡酸與其相鄰峰完全分離，陰性對(duì)照色譜圖在對(duì)應(yīng)的咖啡酸峰位置處無干擾峰，即表明其他組分對(duì)測(cè)定無干擾?？Х人岱迮c其他組分峰的分離度都大于1.5。對(duì)照品液相色譜圖(見圖 3、4、5)。

圖3 對(duì)照品色譜圖

圖4 樣品色譜圖

圖5 陰性對(duì)照色譜圖

2.2.5 精密度考察 取同一對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量10 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD為0.26%。表明儀器與色譜條件具有良好的精密度。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品5份，按2.2.2.2項(xiàng)制備供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液10 μL注入高效液相色譜儀。測(cè)定峰面積，結(jié)果連續(xù)5針供試品峰面積的RSD為0.30%，表明含量測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品溶液，在 0、2、4、6、8、10 h分別進(jìn)樣10 μL，依法測(cè)定峰面積，結(jié)果6次測(cè)定的咖啡酸峰面積RSD為0.01%，表明樣品溶液在10 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

2.2.8 回收率試驗(yàn)［7］精密量取同一批已知含量的供試品(含咖啡酸濃度為91.94 μg·mL－1)2 mL 6 份，分成 3 組，每組2份，分別置5 mL量瓶中，分別加入咖啡酸對(duì)照品(含咖啡酸濃度為 89.5 μg·mL－1)1.8、2.1、2.4 mL，加甲醇定容，按2.2.2.2 方法制備，按 2.2.1 項(xiàng)下分別進(jìn)樣 10 μL，記錄色譜圖，計(jì)算咖啡酸的回收率(見表3)。

表3 咖啡酸回收率計(jì)算結(jié)果

2.2.9 樣品含量測(cè)定 將4批不同批號(hào)的蒲地藍(lán)消炎口服液按 2.2.3方法制備，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量(見表4)。

表4 咖啡酸含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用硅膠G板，以三氯甲烷－甲醇－甲酸(9∶1∶0.5)為展開劑，置紫外光燈(365 nm)下檢視，斑點(diǎn)清晰。RP－HPLC在選擇檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，經(jīng)紫外－可見分光光度計(jì)掃描，咖啡酸在323.2 nm處有最大吸收，故選323 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

4 結(jié)論

本方法可通過簡(jiǎn)單有效的方法首先對(duì)蒲地藍(lán)消炎口服液中咖啡酸進(jìn)行薄層色譜定性鑒別，確定其中含有咖啡酸，之后采用高效液相色譜法進(jìn)行定量檢測(cè)，從而有效地控制蒲地藍(lán)消炎口服液中蒲公英的投藥量，為蒲地藍(lán)消炎口服液質(zhì)量控制提供了準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、可行的方法。

［1］曹兵，胡春雪，熊葉紅，等.蒲地藍(lán)消炎片質(zhì)量控制方法研究［J］.大理學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，7(8):4 －6.

［2］王柏清，郭青竹，董玉旺.蒲公英的藥理作用［J］.獸醫(yī)導(dǎo)刊，2010，10(12):43.

［3］桂風(fēng)云.蒲公英在婦科的臨床應(yīng)用［J］.甘肅中醫(yī)，2010，23(7):33 －34.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:331.

［5］晏嬡，劉世霆，許重遠(yuǎn)，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2006，23(3):229 －231.

［6］劉廣川，呂劍，楊小孟.蒲地藍(lán)消炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.首都醫(yī)藥，2007，14(6):49.

［7］劉文英.藥物分析［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1998:72－73.