陳文 王湘君 徐云升 趙陽 邵東旭 林芳松

（1 瓊州學(xué)院理工學(xué)院 海南 三亞572022；2 瓊州學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 海南 三亞 572022 3 新鄉(xiāng)市環(huán)境保護監(jiān)測站, 河南 新鄉(xiāng) 453003）

0 引言

海南省五指山苦丁茶屬冬青科的兩個種，即冬青科冬青屬大葉冬青和冬青科冬青屬苦丁茶[1]?？喽〔枋且环N中藥,具有清熱解毒、消炎、調(diào)節(jié)腸胃等功效,是民間一種較為高級的茶品[2],海南五指山不少地區(qū)建立了苦丁茶基地,集種植、加工、銷售于一體,并取得了較好的經(jīng)濟效益。筆者對五指山一些苦丁茶基地的調(diào)查發(fā)現(xiàn),不少苦丁茶葉遭到丟棄,不能有效地利用,造成很大的浪費。為此實驗通過測定不同部位苦丁茶葉的多糖含量, 為評價苦丁茶的質(zhì)量,進一步綜合利用苦丁茶提供一定依據(jù)。

1 實驗研究

1.1 五指山苦丁茶中多糖含量的測定

茶葉中可被利用的生物活性成分茶多糖是非常重要的，糖類是自然界最多的有機化合物，也是重要生物高分子化合物和重要信息分子。多糖及糖復(fù)合物分布廣泛，功能多種多樣，它們參與細(xì)胞各種生命活動調(diào)節(jié)。有的多糖具有特殊生物活性，是一種免疫調(diào)節(jié)劑，且無毒副作用，被作為臨床用藥或疫苗[3]。

茶多糖是茶葉中的一種生理活性物質(zhì),是由糖類、蛋白質(zhì)、果膠和灰分組成的一種類似靈芝多糖和人參多糖的高分子化合物,其相對分子量為107000[4]。從化學(xué)組成上看,可以分為由均一單糖糖基組成的均多糖、多種單糖糖基組成的雜多糖及結(jié)合肽鏈或脂類等物質(zhì)的復(fù)合多糖，約占茶葉干物質(zhì)的20%。茶多糖是一種水溶性的復(fù)合多糖，產(chǎn)品的外觀呈淡褐色,熱水中溶解度約 76%，不溶于高濃度的有機溶劑。高溫下易喪失活性，過酸或偏堿性均會使多糖部分降解。經(jīng)分離純化茶多糖為粉末狀固體，不易潮解，無味，溶于水，不溶于高濃度有機溶劑。茶多糖的研究在二十世紀(jì)90年代初已經(jīng)開始研究，幾十年的研究表明：茶多糖其杰出功效是降血糖、降血脂，從而達到防治糖尿病作用，同時在抗凝、防血栓形成，保護血相和增強人體非特異性免疫能力等方面均有明顯效果，是一種很有開發(fā)前景天然藥物。目前國內(nèi)外都在發(fā)展多糖的研究，我國主要集中在人參、銀耳、黑木耳、刺參和黃茂等名貴中藥材的研究上，對茶多糖的研究較少，尚處于初級研究階段。不過不少營養(yǎng)學(xué)家已預(yù)言, 21 世紀(jì)將是 “多糖時代”。隨著糖生物學(xué)和糖化學(xué)的發(fā)展,人們將對茶多糖有更多的了解,更好地利

用茶多糖的生理功能,為人類的身體健康與生活質(zhì)量的提高服務(wù)。

1.1.1 材料、設(shè)備與試劑

1.1.1.1 苦丁茶樣品

新鮮苦丁茶樣品：采摘自主峰1867m 的五指山野生苦丁茶

一級品苦丁茶：一芽兩葉，肥壯嬌嫩

二級品苦丁茶：靠近一芽兩葉一端的茶葉

三級品苦丁茶：老葉但未脫落的茶葉

四級品苦丁茶：脫落的老葉

將采摘的苦丁茶按四個等級分類,分別用自來水,雙蒸水洗凈,風(fēng)干。所有樣品均于80 °C 恒溫干燥8 h,粉碎備用。

1.1.1.2 主要設(shè)備

電子調(diào)溫電熱套：天津市泰斯特儀器有限公司

電子分析天平（萬分之一）：賽多利斯特科學(xué)儀器（北京）有限公司

容量瓶：10mL，100mL，1000mL

吸量管：10mL，5mL，2mL，0.5mL

TU-1901 型雙光束紫外可見分光光度計：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司

HH-1 數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市開發(fā)區(qū)吉特實驗儀器廠

常用的化學(xué)實驗玻璃儀器

1.1.1.3 主要試劑

（1）無水葡萄糖（A·R）（標(biāo)準(zhǔn)品）

（2）蒽酮溶液：準(zhǔn)確稱取蒽酮0.4039g 先加6mL 無水乙醇助溶，后加75℅的硫酸200mL，搖勻置于棕色瓶中備用（現(xiàn)配現(xiàn)用避光低溫保存）。

1.2 實驗方法

1.2.1 苦丁茶黃酮樣品液制備

1.2.1.1 樣品處理

將不同級別新鮮苦丁茶粉碎樣品過80 目篩,用0.0001g分析天平準(zhǔn)確稱取樣品粉末苦丁茶樣品約2g 置于圓底燒瓶中，加50ml 蒸餾水加熱回流2 次，每次45min，然后過濾，合并濾液，用蒸餾水定容至100ml，取1ml 稀釋至50ml，搖勻，備用[5]。

1.2.2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：

用電子分析天平準(zhǔn)確稱取 105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品16.01mg 置于100ml 的容量瓶中，加水溶解并定容，備用[6]。

取此標(biāo)準(zhǔn)液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml 分別置于25ml的容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。各精密吸取2.0ml置于具塞試管中，冰浴，各加入 0.5‰的蒽酮－硫酸試劑4ml，混勻，沸水浴7min，用流動的水迅速冷至室溫，放置10min 后，于620nm 處測定吸光度以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度（C）為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程。

1.2.3 最佳波長的選擇

取標(biāo)準(zhǔn)待測液（7 支比色管）在TU-1901 紫外-可見分光光度計上，550-650nm 波長范圍內(nèi)進行光譜掃描，取最大吸收波長為檢測波長，最后得到620nm 處吸收最大。在620nm的最佳波長處,測定吸光度 A。然后以葡萄糖準(zhǔn)液的濃度為橫坐標(biāo),以其吸光度A 為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 苦丁茶樣品多糖含量測定

分別準(zhǔn)確量取不同級別苦丁茶樣品茶多糖溶液 2ml 于具塞試管中，冰浴3min,加入0.5‰的蒽酮硫酸試劑4ml,再沸水浴7min,冷卻后，用1cm 比色皿,以試劑空白作參比,于波長620nm 處測吸光度,重復(fù)測定六次。

1.2.5 實驗數(shù)據(jù)與實驗結(jié)果

1.2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線實驗數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表1-1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線實驗數(shù)據(jù)

圖1-1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液吸光度曲線圖

1.2.5.2 樣品實驗數(shù)據(jù)與實驗結(jié)果

計算公式：

茶多糖物質(zhì)總含量（%）=2C×10-3×100 × 25 ÷2 ×100℅

C：測定樣品多糖平均濃度

表2 各等級茶葉樣品實驗數(shù)據(jù)與結(jié)果

經(jīng)數(shù)據(jù)處理和計算得出不同等級即不同部位海南五指山苦丁茶多糖含量不一樣，四個等級的五指山苦丁茶中多糖含量分別為5.945℅、5.875℅、5.777℅和5.681℅，一級苦丁茶多糖含量較豐富，其他級別整體含量與之相差不大?？喽〔枞~中糖類物質(zhì)一般占到干重的 20%～25%，但是泡茶時最多泡出它的5%左右。

2.實驗結(jié)果討論與分析

2.1 與國內(nèi)其他地區(qū)不同等級苦丁茶物質(zhì)含量比較

2.1.1 實驗結(jié)果比較

五指山苦丁茶中兩種物質(zhì)與廣東、貴州、浙江、四川苦丁茶進行對比[7]。

表2-1 國內(nèi)不同等級苦丁茶中多糖含量

經(jīng)過表格的數(shù)據(jù)對比可知，五指山兩個等級的苦丁茶中的多糖含量均比廣東、貴州、浙江、四川這四個省份的苦丁茶高，但大大低于茶葉的多糖含量[8]（茶葉的含量一般為20%～25%）。是構(gòu)成了海南五指山苦丁茶味濃、先苦而回味甘甜、澀味感和收斂性不強等品質(zhì)特征的原因。

2.1.2 實驗結(jié)果分析

苦丁茶多糖是重要的一個天然藥物,有很好的保健作用，糖類化合物在較高溫度下被硫酸作用脫水生成糠醛或糠醛衍生物,能與蒽酮縮合生成藍綠色化合物。實驗采用無水葡萄糖作為基準(zhǔn)物質(zhì)，原料為不同等級的海南五指山苦丁茶，采用硫酸-蒽酮法，通過TU-1901 型紫外可見分光光度計，測定茶葉中茶多糖含量，方法簡單快速并具有較好的精密度與準(zhǔn)確度，基準(zhǔn)物質(zhì)無水葡萄糖便宜易得、對儀器條件要求不高的優(yōu)點。作為一種對于茶葉品質(zhì)的初步鑒定、快速測定方法，有一定應(yīng)用價值。

實驗存在以下問題，所采用苦丁茶樣品材料的等級級別較少并且等級級數(shù)相差不大，數(shù)據(jù)顯示相差不明顯；另因蒽酮-硫酸溶液的穩(wěn)定性（如受環(huán)境如光照、溫度等條件影響較大）較差，對實驗結(jié)果有影響，故蒽酮硫酸溶液用于多糖含量測定時,宜新鮮配制并注意避光。測量結(jié)果存在著一定的誤差，有待以后繼續(xù)研究改進。實驗測量時采用多次平行測定，準(zhǔn)確度相對較高，仍具有參考價值。

3 結(jié)論

苦丁茶是天然保健綠色食品，有較好的藥用價值。五指山苦丁茶樣品中多糖的含量是：一級品> 二級品> 三級品>四級品。 一級品與二級品差別不大,而三級品和四級品則差別較大,尤其四級品含量較低。不同部位的苦丁茶多糖含量存在著一定的差別, 就多糖含量來分析,三級品老葉但未脫落的苦丁茶仍可利用。建議在采摘苦丁茶時,同時采摘未脫落的老葉,以免脫落后成分損失而失去利用價值。

海南五指山地區(qū)四季如春，獨特的氣候?qū)ΨN植苦丁茶可以提供優(yōu)越的環(huán)境，對實現(xiàn)海南五指山苦丁茶產(chǎn)業(yè)化，市場化具有重要意義。實驗結(jié)果相對國內(nèi)其它地區(qū)有較強的競爭優(yōu)勢，這對五指山苦丁茶發(fā)展研究提供科學(xué)的參考價值。目前，國家正在大力發(fā)展海南國際旅游島，應(yīng)合理利用發(fā)展契機，開發(fā)五指山苦丁茶產(chǎn)業(yè)如飲料等新產(chǎn)品，具備良好的發(fā)展前景,促使苦丁茶行業(yè)迅猛發(fā)展。