王永昌,高克立,樊錦慧,李 娟
(甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院分析實(shí)驗(yàn)中心,甘肅 蘭州 730050)
分光光度法測定雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷的含量
王永昌,高克立,樊錦慧,李 娟
(甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院分析實(shí)驗(yàn)中心,甘肅 蘭州 730050)
目的 建立雞矢藤藥材中總環(huán)烯醚萜苷的含量測定方法。方法 采用分光光度法,以雞矢藤苷為對照品,經(jīng)香草醛-乙酸顯色,紫外-可見光全波長掃描在620 nm處有最大吸收,并在此處測定其含量。結(jié)果 雞矢藤苷及其藥材在620 nm處有最大吸收,測得含量穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,雞矢藤苷在10.3~51.5μg/m l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.999 5)。結(jié)論 建立雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷的含量測定方法,該方法簡便、準(zhǔn)確、可靠,可作為雞矢藤提取、分離、純化過程的質(zhì)量控制方法。
分光光度法;雞矢藤;總環(huán)烯醚萜苷;含量測定
雞矢藤為茜草科雞矢藤屬多年生草質(zhì)藤本植物,雞矢藤[Paederia scandens(Lour.)Merr.]或毛雞矢藤[P.scandens(lour.)merr.var.tomentosa(Bl.)H.-M.]全草或根是我國傳統(tǒng)的中草藥,具有祛風(fēng)活血,止痛解毒,消食導(dǎo)滯,除濕消腫的功效,在我國分布廣泛。雞矢藤含有多種化學(xué)成分,包括揮發(fā)油、環(huán)烯醚萜苷類、多種烷醇、齊墩果酸等油脂及甾醇類化合物[1]?,F(xiàn)代研究證明,雞矢藤提取物具有良好的保肝、鎮(zhèn)痛、抗驚、解毒、消炎、抗病毒和抗腫瘤等作用[2~7]。研究表明,雞矢藤總環(huán)烯醚萜苷是一類有效成分[8~9]。目前,對雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷的質(zhì)量控制研究較少[10]。我們通過分光光度法建立了雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷含量的測定方法,此法簡便、快速、準(zhǔn)確、易行,適于對雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷的含量進(jìn)行測定。
1.1 材料
雞矢藤藥材采自甘肅隴南地區(qū),標(biāo)本經(jīng)甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院石長栓副研究員鑒定為茜草科雞矢藤屬植物雞矢藤的全草。
雞矢藤苷對照品由本研究室分離純化并鑒定結(jié)構(gòu),采用HPLC歸一法測定其含量為98.60%。
薄層層析硅膠G(批號:040212,青島海洋化工有限公司生產(chǎn))、層析用硅膠(100~140目,青島海洋化工有限公司生產(chǎn))、D101 型大孔吸附樹脂[非極性,批號:04/05/12(1-2)]、活性炭(粒狀,批號:020226,天津市天達(dá)凈化材料精細(xì)化工廠生產(chǎn))、冰醋酸、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇及其他試劑均為市售AR級。
1.2 儀器與設(shè)備
AE260(萬分之一)型電子分析天平(上海)、DHG-9030型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海)、SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州)、KDM型調(diào)溫電熱套(山東)、B3200S-T型超聲波振蕩儀、BüCHI 461型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士)、UV-240型紫外-可見分光光度儀(日本島津)、Aligent-1100型高壓液相色譜儀(德國)、DLSB-5/10型低溫循環(huán)泵(鄭州)。
1.3 對照品溶液的制備
精密稱取雞矢藤苷對照品10.0 mg置10 m l容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,制成1.03mg/m l的對照品溶液備用。
1.4 供試品溶液的制備
精密稱取在60℃干燥后粉碎的雞矢藤粗粉10.0g,用甲醇索氏提取2 h,過濾取濾液,定容至100 ml容量瓶中,搖勻,作為供試品溶液。
2.1 顯色條件
精密吸取對照品溶液、供試品溶液和甲醇0.5m l于10 m l試管中,水浴蒸干,冷卻至室溫后,加入0.2 ml的5%香草醛冰醋酸溶液和0.8m l的高氯酸,經(jīng)60℃水浴加熱15 min,取出立即置冰水浴中3min[11],用冰醋酸定容至刻度,搖勻,以甲醇管為空白,用紫外-可見分光光度計于620 nm處測定吸光度。
2.2 吸收波長的選擇
精密吸取對照品溶液、供試品溶液和甲醇 0.5 m l,按“2.1”項(xiàng)下顯色條件顯色,用紫外-可見分光光度計于200~700 nm范圍掃描,結(jié)果對照品和供試品溶液在620 nm處具有相似最大吸收,故選擇620 nm為測定吸收峰。
2.3 線性關(guān)系
精 密 吸 取 對 照 品 溶 液 0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50 ml,水浴蒸干,按“2.1”項(xiàng)下顯色條件顯色,在620 nm 處測定吸光度值,分別為 0.091、0.186、0.287、0.372、0.293、0.557、0.638、0.742、0.843。以對照品溶液濃度(c)為橫坐標(biāo),吸光度(A)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果雞矢藤苷在10.3~51.5μg/ml范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,得回歸方程:A=0.018c-0.091 8,R2=0.999 5。
2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取對照品溶液1.0m l,用甲醇定容至10m l容量瓶中,搖勻。精密吸取 0.5ml,水浴蒸干,按“2.1”項(xiàng)下顯色條件顯色后1~2 h內(nèi),每隔10min在620 nm處測定其吸光度,其吸光值分別為 0.047,0.047,0.047,0.047,0.048,0.047,0.047,0.048,0.047,0.047,0.046,0.046,平均值為 0.047,RSD=0.02%(n=12),表明在0~2 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.5 精密度試驗(yàn)
取對照品溶液 0.5 m l,水浴蒸干,按“2.1”項(xiàng)下顯色條件顯色,顯色后 1 h 內(nèi)連續(xù)測定 6 次吸光度,RSD=0.02%(n=6),表明儀器精密度良好。
2.6 重復(fù)性試驗(yàn)
精密稱取雞矢藤粗粉 6 份,每份 10.0 g,按“2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。以“2.1”項(xiàng)下方法顯色,測定結(jié)果平均含量為1.53%,RSD=2.33%(n=6),說明該法重復(fù)性良好。
2.7 加標(biāo)回收試驗(yàn)
精密吸取“2.7”項(xiàng)各供試品溶液 5.0ml,分別精密加入對照品溶液 1.0m l,甲醇定容至 10.0ml,混勻,制成樣標(biāo)供試液。按“2.1”項(xiàng)下方法顯色,測定并計算回收率,具體見表1。
表1 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果
2.8 樣品測定
精密稱取雞矢藤粗粉 6 份,每份 10.0 g,按“2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。以“2.1”項(xiàng)下方法顯色,測定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出甘肅產(chǎn)地雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷平均含量為1.50%。
(1)雞矢藤中含有多種化學(xué)成分,包括揮發(fā)油、環(huán)烯醚萜苷類、多種烷醇、齊墩果酸等油脂及甾醇類化合物,僅對某一成分進(jìn)行含量測定很難全面評價其質(zhì)量的優(yōu)劣。曲銀鋒等[12]對雞矢藤注射液中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析及測定,孫素珍[10]利用超高壓液相色譜法測定了雞矢藤熊果苷含量[10],我們認(rèn)為也應(yīng)該對作為雞矢藤抗炎鎮(zhèn)痛的有效部位之一的環(huán)烯醚萜苷類,進(jìn)行質(zhì)量控制,并以雞矢藤苷為對照品測定其總環(huán)烯醚萜苷較為合理。
(2)在試驗(yàn)過程中,曾選擇香草醛-冰醋酸法[13],對二甲氨基苯甲醛-鹽酸法[14],對二甲氨基苯甲醛-醋酸法[13],用紫外-可見分光光度計在400~700 nm范圍內(nèi)掃描,3種顯色方法均在620 nm處有最大吸收,香草醛-冰醋酸法中標(biāo)準(zhǔn)溶液顯天藍(lán)色,呈色較穩(wěn)定,含量測定在2 h內(nèi)較穩(wěn)定。而對二甲氨基苯甲醛-鹽酸法和對二甲氨基苯甲醛-醋酸法顯色不明顯,且不穩(wěn)定。故認(rèn)為選擇香草醛-冰醋酸法測定雞矢藤總環(huán)烯醚萜苷類成分較為理想。
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A
1671-1246(2012)02-0096-02
甘肅省科技廳條件財務(wù)處項(xiàng)目(GKS022-B05-07)