彭 燕 劉志偉

廣東省深圳市西鄉(xiāng)人民醫(yī)院檢驗科，廣東深圳 518102

目前HP感染診斷常規(guī)檢測方法有快速尿素酶試驗、13C或14C尿素呼氣試驗、糞便HP抗原檢測、病理學(xué)染色檢查（如Warrhin-Starry銀染、免疫組化染色等）、血清和分泌物（唾液、尿液等）抗體檢測和聚合酶鏈反應(yīng)等，近年來，應(yīng)用免疫學(xué)方法診斷漸成為研究熱點(diǎn)。免疫透射比濁法是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合形成復(fù)合物，通過測定復(fù)合物形成量的多少對抗原或抗體進(jìn)行定量的方法，免疫透射比濁法可以通過儀器的自動化分析得到相應(yīng)結(jié)果，從而克服了人為誤差。本文應(yīng)用比濁法和膠體金法檢測在我院體檢的300名患者的血清幽門螺桿菌抗體，并對比濁法定量檢測的測定值>60 AU/mL的32位體檢患者進(jìn)行HP的分離培養(yǎng)鑒定。結(jié)果報道如下：

1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 標(biāo)本來源 2011年08月～2011年10月來我院300名體檢者，其中，男180例，年齡22～53歲；女120例，年齡23～57歲。

1.1.2 檢測試劑 ①定性試劑：幽門螺桿菌尿素酶抗體檢測試劑盒（膠體金法）由北京康美天鴻生物科技有限公司提供。②定量試劑：幽門螺桿菌快速測定試劑盒（比濁法）由深圳亞輝龍生物科技有限公司提供，并配有標(biāo)準(zhǔn)品，所含HP抗體濃度是40 AU/mL；高值質(zhì)控物和低值質(zhì)控物，所含HP抗體濃度分別是30 AU/mL和10 AU/mL；結(jié)果的判定：樣本值<12 AU/mL為陰性；12 AU/mL≤ 樣本值 ≤ 15 AU/mL為可疑；樣本值>15 AU/mL為陽性；樣本值>60 AU/mL，提示幽門螺桿菌現(xiàn)癥感染。③HP的分離培養(yǎng)鑒定：在胃竇部距幽門2～3 cm處胃體小彎處分別鉗取黏膜組織，置無菌生理鹽水中4℃保存，在4 h內(nèi)接種SKirrow S選擇性培養(yǎng)基中，置厭氧罐內(nèi)，緩慢注入混合氣體（5%O2、10%CO2、85%N2），37℃培養(yǎng)連續(xù)5 d觀察結(jié)果。HP的鑒定依據(jù)主要包括：革蘭染色陰性，外觀呈S或弧形，生化反應(yīng)結(jié)果為尿素酶試驗陽性、觸酶試驗陽性和氧化酶試驗陽性；標(biāo)準(zhǔn)菌株：幽門螺桿菌NCTC11637（CagA陽性）作為質(zhì)控菌株

1.1.3 儀器 日立7170S全自動生化檢測儀，每天檢測前均經(jīng)過校準(zhǔn)，儀器性能穩(wěn)定。

1.2 方法

按常規(guī)方法采取被檢測者靜脈血3～5 mL，分離血清，用日立全自動生化檢測儀嚴(yán)格按照幽門螺桿菌快速測定試劑盒（比濁法）說明書操作進(jìn)行HP-Ab測定試驗，同時用膠體金試紙板條進(jìn)行HP-Ab測定。對比這兩種檢測方法的結(jié)果的判定符合率。對比濁定量檢測的測定值>60 AU/mL的32位體檢患者作為鑒定組；另隨機(jī)選擇比濁定量檢測的測定值介于“15～60 AU/mL”的30位體檢患者作為對照組，分別進(jìn)行HP的分離培養(yǎng)鑒定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

研究資料用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用百分率表示，組間對比采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比濁法和膠體金法檢測結(jié)果比較

用比濁法和膠體金法分別檢測這300份體檢標(biāo)本HPAb，結(jié)果見表 1。

2.2 HP分離培養(yǎng)鑒定結(jié)果

對用比濁法定量測定值>60 AU/mL的32位體檢患者的鑒定組和比濁定量檢測的測定值介于“15～60 AU/mL”的30位體檢患者的對照組分別進(jìn)行HP的分離培養(yǎng)鑒定，結(jié)果見表2。鑒定組的HP分離培養(yǎng)鑒定的陽性例數(shù)、陽性率 （30例，96.75%）與對照組（2例，6.67%）比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。

表1 300份標(biāo)本比濁法定量測定HP-Ab的結(jié)果

表2 鑒定組和對照組的HP分離培養(yǎng)鑒定結(jié)果

3 討論

胃幽門螺桿菌（helicobacter pylori，HP）是慢性胃炎、消化性潰瘍的重要致病因素，并與胃癌的發(fā)生有密切關(guān)系[1]，另外HP感染在心腦血管疾病、免疫性疾病、營養(yǎng)代謝性疾病和皮膚病等的發(fā)病過程中也有一定的作用[2]。因此，根除Hp對治療和預(yù)防上述疾病有著重大意義。由本資料可知：比濁法定量檢測HP的陽性率為47.33%。與由2001～2004年中華醫(yī)學(xué)會全國HP分會進(jìn)行的一項涉及全國20個省市的自然人群HP流行病學(xué)調(diào)查顯示的我國HP感染率為40%～90%，平均59%[3]相符。所以必須高度重視，有慢性病史的患者應(yīng)做HP檢測，以及時對癥治療防患于未然。

比濁法定量檢測HP抗體，是將幽門螺旋桿菌抗原吸附于乳膠粒顆粒上，通過孵育使稀釋的人血清中的特異性抗體與抗原結(jié)合，經(jīng)孵育后，產(chǎn)生的吸光度變化量與檢測樣本中的幽門螺旋桿菌特異性抗體濃度成正比。當(dāng)樣品值介于“12 AU/mL≤樣本值≤15 AU/mL”判斷為可疑，即弱陽性。而膠體金技術(shù)定性檢測幽門螺桿菌抗體檢測是利用人血清、血漿或全血中抗胃幽門螺旋桿菌抗體，檢測時，加入的樣品首先與包被抗原的膠體金顆?；靹?，并因毛細(xì)管作用混合液將沿膜向檢測區(qū)移動。當(dāng)患者樣品中含有胃幽門螺旋桿菌特異性抗體時，即與檢測線（T線）上的抗原形成“抗原-抗體-抗原”膠體金顆粒復(fù)合物，并顯示為紅線，并以紅線顯色的強(qiáng)弱判斷為陽性、弱陽性和陰性。由本資料表1可知：膠體金法定性測定HP感染的陽性和陰性率與比濁法測定比較無明顯的差異性（P>0.05），而膠體金法定性測定HP感染的弱陽性率明顯低于比濁法定量測定HP的弱陽性率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），這是因為在膠體金定性檢測HP感染時，常因操作者的判斷力誤將弱陽性判斷為陰性，或者將弱陽性判斷為陽性率較低。而比濁法定量檢測HP抗體時，是應(yīng)用于全自動的生化儀器，可以排除人為的干擾因素，因此比濁法定量檢測的弱陽性率明顯高于膠體金法檢測。

機(jī)體感染HP經(jīng)過有效的藥物治療后，即使成功地根除了HP，血清HP抗體仍然需要6個月以上的時間才能消失[4]。所以，單純的定性檢測HP抗體并不能確診是不是HP現(xiàn)癥感染，而比濁法定量檢測HP抗體時，當(dāng)樣本測定值>60 AU/mL，提示幽門螺桿菌現(xiàn)癥感染，由本研究資料表2可知：對用比濁法定量測定值>60 AU/mL的32位體檢患者進(jìn)行Hp的分離培養(yǎng)鑒定，其培養(yǎng)陽性率為93.75%，而對照組30位體檢患者的HP培養(yǎng)陽性率為6.67%，兩者差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。雖然診斷HP感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”是病原學(xué)檢查，即HP培養(yǎng)成菌落后用各種鑒定方法進(jìn)行鑒定，其特異性可達(dá)100%[5]。但由于HP的培養(yǎng)要求高，易污染，給分離鑒定造成困難，而且HP培養(yǎng)時間長，不利于快速診斷。因此，比濁法定量檢測可以提示HP現(xiàn)癥感染，有利于HP感染的快速診斷，并及時對癥用藥治療，控制HP的感染和減少HP對機(jī)體的傷害。

綜合本研究資料，作者認(rèn)為：比濁法定量檢測血清胃幽門螺桿菌抗體具有敏感性高、特異高、簡便、快速、可重復(fù)性好的特點(diǎn)，而且當(dāng)測定值>60 AU/mL時，可以高度提示患者機(jī)體處于現(xiàn)癥的HP感染，可以及時對癥治療，減少HP對機(jī)體造成的傷害。

[1]李巖.消化性潰瘍的藥物治療進(jìn)展[J].中國實用內(nèi)科雜志，2007，27（1）：24-25.

[2]高文，胡伏蓮.幽門螺桿菌感染與胃腸道外疾病[J].中國醫(yī)刊，2007，42（2）：22-27.

[3]高文，胡伏蓮.中華醫(yī)學(xué)會第4次全國幽門螺桿菌學(xué)術(shù)會議報道[J].中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報，2005，20：9.

[4]王光尚.幽門桿菌感染診斷和治療研究進(jìn)展[J].內(nèi)科，2011，6（2）：160-163.

[5]Jaup BH，Stenquist B，Brandberg A.Helicobacter pylori culture from a positive，liquid-based urease test for routine clinical use：a cost-effective approach[J].Helicobacter，2000，5：22-23.