劉 勇 劉建生 李居劍 王 艷

山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院普外科，山西太原 030001

胰腺癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，具有局部侵襲力高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移早的特點(diǎn)，目前認(rèn)為手術(shù)是其唯一的可治愈性手段，然而85%的胰腺癌患者就診時(shí)已屬晚期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除率僅為10%～15%[1]，故控制轉(zhuǎn)移是提高患者預(yù)后的關(guān)鍵。近年來有關(guān)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1（metastasis associated 1，MTA1）和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因 KISS-1與腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)系日益受到人們的關(guān)注。筆者運(yùn)用免疫組化法檢測(cè)胰腺癌組織中MTA1與KISS-1蛋白的表達(dá)情況，在此基礎(chǔ)上探討其與胰腺癌病理指標(biāo)的關(guān)系及二者的相關(guān)性，為胰腺癌的研究提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院2005年1月～2010年12月行手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的胰腺癌標(biāo)本36例。其中，男23例，女13例，年齡45～77歲。高分化組11例，低中分化組25例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組13例，無轉(zhuǎn)移組23例。按2007年UICC標(biāo)準(zhǔn)TNM臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期21例。所有患者術(shù)前均未接受放化療治療，臨床資料完整。另取10例經(jīng)病理證實(shí)的癌旁胰腺組織作為對(duì)照。

1.2 試劑與方法

MTA1兔抗人多克隆抗體，KISS-1兔抗人多克隆抗體以及二抗PV-6001均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。所有石蠟標(biāo)本均行4 μm連續(xù)切片，脫蠟至水后3%H2O2去離子水孵育，EDTA緩沖液加熱修復(fù)抗原，依次滴加一抗二抗，用PBS液代替一抗做陰性對(duì)照，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，樹脂封片。每例均行Envision免疫組化二步法染色和HE染色，光鏡觀察。

1.3 結(jié)果判斷

MTA1的表達(dá)主要在細(xì)胞核，而KISS-1的陽性表達(dá)則位于細(xì)胞質(zhì)，均呈棕黃色顆粒。陽性結(jié)果判定方法參照劉源等[2]的標(biāo)準(zhǔn)，以染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)綜合判定。陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：無細(xì)胞染色為0分，<10%為1分，10%～30%為2分，>30%為3分；顯色強(qiáng)度：不顯色或顯色不清為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深棕色為3分。二項(xiàng)乘積0～1為陰性（-），2～3 為弱陽性（+），4～5 為中度陽性（++），>5 為強(qiáng)陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTA1與KISS-1在胰腺癌中的表達(dá)情況

MTA1陽性染色主要位于細(xì)胞核中，部分位于胞漿，呈棕黃色。胰腺癌組織中的陽性表達(dá)率為77.8%（28/36），而在對(duì)照組癌旁胰腺組織中的表達(dá)為20.0%（2/10），二者相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.517，P ＜ 0.01）。

KISS-1蛋白陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒物質(zhì)。在36例胰腺癌組織中的陽性表達(dá)率[38.9%（14/36）]明顯低于癌旁正常胰腺組織的 90.0%（9/10），（χ2=8.178，P ＜0.01）。

2.2 MTA1、KISS-1的表達(dá)與胰腺癌病理指標(biāo)的關(guān)系

MTA1蛋白的陽性表達(dá)在不同的分化組、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及臨床分期組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且隨腫瘤分化程度的降低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的產(chǎn)生及臨床分期的提高而增高。而KISS-1蛋白的陽性表達(dá)則隨分化程度的降低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)及臨床分期的進(jìn)展而降低。同時(shí)，二者的表達(dá)均與患者的年齡、性別及腫瘤的部位無關(guān)（P＞0.05）。見表1。

表1 腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1的表達(dá)與胰腺癌病理指標(biāo)的關(guān)系（例）

2.3 MTA1與KISS-1在胰腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

染色結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，在28例MTA1表達(dá)陽性的胰腺癌組織中，僅有7例KISS-1亦表達(dá)陽性。經(jīng)Spearman相關(guān)性分析表明MTA1與KISS-1的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)（r=-0.533，P＜ 0.01）。 見表 2。

表2 腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1與抑制基因KISS-1在胰腺癌中（例）

3 討論

3.1 MTA1與胰腺癌的關(guān)系

該基因是1993年從鼠的乳腺癌細(xì)胞株中克隆出來的，因其參與腫瘤的轉(zhuǎn)移，故命名為腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1（metastasis associated 1，MTA1）。它是核小體重構(gòu)及組蛋白脫乙?；笍?fù)合物NuRD （nucleosomeremodeling and histone deacetylase）的一個(gè)亞基。NuRD是一種具有染色質(zhì)重構(gòu)與組蛋白去乙?；钚缘亩鄟唵位鶑?fù)合物[3]。MTA1蛋白在NuRD復(fù)合物中與去乙?；福╤istone deacetylases，HDACs）緊密結(jié)合，并作為組蛋白去乙?；傅妮o助啟動(dòng)因子，抑制轉(zhuǎn)錄過程。MTA1通過對(duì)細(xì)胞表面黏附分子、細(xì)胞骨架蛋白轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控使細(xì)胞間黏附力的下降，從而參與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過程[4-7]。目前已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，MTA1基因表達(dá)與乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌等許多惡性腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[3]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在胰腺癌組織中MTA1的陽性表達(dá)率為77.8%，高于癌旁組織中的表達(dá)。MTA1的陽性表達(dá)與胰腺癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及臨床分期有關(guān)，且隨腫瘤分化程度的降低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的產(chǎn)生及臨床分期增加而升高。提示臨床上檢測(cè)MTA1的表達(dá)可能有助于評(píng)估胰腺癌的分化程度及判斷患者的預(yù)后。

3.2 KISS-1與胰腺癌的關(guān)系

該基因是在1996年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，可抑制腫瘤細(xì)胞的趨向性和侵襲性，并限制其遷移能力，從而抑制惡性腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移[8]。盡管到目前為止，KISS-1基因抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制尚未明確，但最新研究表明可能與信號(hào)傳導(dǎo)途徑有關(guān)，一方面它通過抑制MMP-9的活性和MAPK途徑抑制細(xì)胞的移行能力；另一方面也可通過G蛋白耦聯(lián)途徑激發(fā)鈣動(dòng)員抑制腫瘤細(xì)胞增殖[9]。KISS-1在正常組織中如腦、胎盤、睪丸、肝臟和小腸中都有不同水平表達(dá)，而在多種存在轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中表達(dá)缺失[10]。大量研究已經(jīng)證明KISS-1與黑素瘤、甲狀腺癌、膀胱癌以及子宮內(nèi)膜癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[11-12]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，KISS-1在胰腺癌組織中的陽性表達(dá)率38.9%顯著低于癌旁胰腺組織的90.0%，并隨分化程度的降低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)及臨床分期增加而降低。這說明KISS-1在胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中起著重要作用，同時(shí)也預(yù)示KISS-1可能成為新的預(yù)測(cè)胰腺癌惡性潛能的標(biāo)記物。

3.3 MTA1與KISS-1在胰腺癌組織中的關(guān)系

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MTA1和KISS-1存在負(fù)相關(guān)性，證實(shí)了二者在胰腺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起著重要的相互作用。

總之，MTA1和KISS-1的異常表達(dá)與胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。聯(lián)合檢測(cè)MTA1與KISS-1有望為預(yù)測(cè)胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力、選擇臨床治療方案以及評(píng)價(jià)患者預(yù)后提供參考。

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