丁蓓蒂 陳 浩 劉 航

四川省樂山市食品藥品檢驗所，四川 樂山 614000

木蘭科植物翼梗五味子Schisandra henryi Clarke，分布于我國長江以南各省區(qū)。為《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2010年版“西五味子”來源之一，有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心等功效。根據(jù)文獻(xiàn)報道及藥效學(xué)研究結(jié)果，翼梗五味子中含有五味子酯甲、去氧五味子素、五味子乙素、五味子甲素等成分。為此，本文采用高效液相色譜法對翼梗五味子中五味子酯甲進(jìn)行了含量測定研究，為進(jìn)一步建立五味子藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

美國Agilent1100液相色譜儀;五味子酯甲對照品為中國藥品生物制品檢定所提供 (批號1529-201001，含量測定用);翼梗五味子購自樂山市中藥材公司 (樣1-2號)、樂山市龍馬藥業(yè) (樣3-4號)、成都中藥材市場 (樣5-6號);四氫呋喃為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱 Diamonsil C18(250×4.6mm)4μm;流動相四氫呋喃 -水 (40：60)，檢測波長為254nm，柱溫為35℃，流速為1.0ml/min。對照品及樣品的HPLC圖見圖1。

2.2 供試品溶液的制備 取樣品粉末 (過三號篩)約 1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理 (功率250W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 線性范圍的考察

精密稱取五味子酯甲對照品11.48mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液;精密量取貯備液 0.1、0.5、1.0、2.5、5.0，置 10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液及貯備液各10μl，注入高效液相色譜儀分別進(jìn)行測定。以進(jìn)樣量 (μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為 Y=1187.7x-13.646，r=0.9999，結(jié)果表明五味子酯甲在 0.04592 ～4.592μg與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗 精密量吸取五味子酯甲對照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣 5次，結(jié)果五味子酯甲峰面積的 RSD為 0.25%。

2.5 穩(wěn)定性試驗 精密量吸取供試品溶液20μl，分別于0，4，8，12，24h按上述色譜條件進(jìn)樣測定，計算RSD為0.58%。結(jié)果表明供試品溶液中五味子酯甲在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗 精密稱取翼梗五味子藥材同批號樣品6份，每份約1.0g，按前述供試品制備方法及色譜條件進(jìn)行五味子酯甲含量測定，測得五味子酯甲平均含量 (按干燥品計算) 為0.0612%，RSD為1.82%。

2.7 回收率試驗

精密吸取濃度為0.459mg/ml的對照品溶液1.0ml，共6份，分別置50ml錐形瓶中，水浴上揮干甲醇。取已知含量的樣品 (1號樣品，HPLC法測定含量為0.0612%)6份，每份約0.8g，共6份，精密稱定，置上述圓底燒瓶中，按擬定方法進(jìn)行供試品溶液制備和五味子酯甲含量測定(按干燥品計算)，結(jié)果見表1。

表1 回收率測定結(jié)果

以上試驗結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確度良好。

2.8 樣品測定

按正文含量測定方法測定6批樣品中五味子酯甲含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品的含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

3.1.1 測定波長的選擇

采用甲醇作溶劑制備五味子酯甲對照品溶液，在200～500nm波長下掃描其光譜圖，結(jié)果在254nm波長處有最大吸收，故測定波長選定為254nm。

3.1.2 流動相的選擇

采用流動相四氫呋喃-水 (40：60)對本品供試品溶液進(jìn)行系統(tǒng)適用性考察，結(jié)果在該流動相下，本品五味子酯甲峰形對稱，理論板數(shù)6000，分離度符合要求。因此選定四氫呋喃-水 (40：60)作為測定流動相。

3.2 提取方法及時間的考察

取本品粉末1.0g，4份為一組，精密稱定，置錐形瓶中，每組分別精密加入甲醇25ml、乙醇25ml，稱定重量，分別超聲處理30min、45min、60min、90min或水浴上加熱回流30min、45min、60min、90min，放冷，再稱定重量，用所加溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。進(jìn)樣量20μl，按上述選定的色譜條件實驗，結(jié)果表明：甲醇提取效果優(yōu)于乙醇，采用超聲處理30min與其余方法無明顯差異，因此選定超聲處理30min為本品提取方法。

3.3 本實驗建立的翼梗五味子藥材中測定五味子酯甲的高效液相色譜法，具操作性、穩(wěn)定性及代表性。測定了翼梗五味子多批次藥材中五味子酯甲含量，為五味子藥材質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

［1]國家藥典委員會.中國藥典［S].一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：210.

［2]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志［M].第二十四卷.北京：科學(xué)出版社，1983：129-134.

［3]肖培根.新編中藥志［M].第三卷.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：284-291.