亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        31例B型血友病患者凝血因子Ⅸ基因突變研究

        2012-09-27 11:20:28劉丹娟李莉艷羅深秋
        重慶醫(yī)學(xué) 2012年12期
        關(guān)鍵詞:血友病內(nèi)含子外顯子

        劉丹娟,李莉艷,李 強(qiáng),孫 競(jìng),鐘 梅,羅深秋△

        (南方醫(yī)科大學(xué):1.細(xì)胞生物學(xué)教研室/骨與軟骨再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;2.南方醫(yī)院婦產(chǎn)科;3.南方醫(yī)院檢驗(yàn)科;4.南方醫(yī)院血液科,廣州 510515)

        血友病是一組X連鎖隱性遺傳的出血性疾病,臨床上常見的有A型血友?。℉A)和B型血友病(HB)兩型,分別是由于凝血因子(F)Ⅷ和FⅨ基因突變所引起。在男性血友病患者中,HA占80%~85%,而HB僅占15%~20%,在男性中的發(fā)病率大約為1/30 000[1],女性患者罕見。HB基因突變具有明顯的異質(zhì)性,可發(fā)生在FⅨ基因外顯子、內(nèi)含子、啟動(dòng)子及其側(cè)翼序列的任何位置[2]。目前已知的FⅨ基因突變類型包括點(diǎn)突變、缺失、插入等。

        本研究利用PCR法及DNA測(cè)序技術(shù)對(duì)31例HB患者進(jìn)行FⅨ基因突變檢測(cè),對(duì)于明確FⅨ基因突變機(jī)制有重要意義,且豐富了FⅨ基因突變譜。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 31例HB患者均來(lái)自本院血液科及婦產(chǎn)科門診,F(xiàn)Ⅸ活性測(cè)定均小于5%。

        1.2 研究方法 采集HB患者外周血2mL,以乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,采用外周血DNA提取試劑盒(美國(guó)Life公司)提取DNA。根據(jù)FⅨ基因序列(Gene Bank K02402),參照文獻(xiàn)[3]設(shè)計(jì)并合成8對(duì)擴(kuò)增引物(表1),引物由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。

        PCR反應(yīng)總體積為50μL,加入上游和下游引物各5pmol(終濃度為0.1μmol/L),4種dNTP各5nmol(終濃度為0.1 mmol/L),5μL 10×Taq PCR Buffer(100mmol/L Tris-HCl,15mmol/L MgCl2和 500mmol/L KCl,pH 8.3),2U Taq DNA聚合酶(TAKARA公司),基因組DNA 50~200ng。PCR反應(yīng)在美國(guó)PE公司的9700型熱循環(huán)儀上進(jìn)行。測(cè)序工作由上海英駿生物技術(shù)有限公司完成。

        表1 引物序列

        續(xù)表1 引物序列

        2 結(jié) 果

        31例HB患者通過(guò)DNA測(cè)序均檢測(cè)到了突變位點(diǎn)。檢測(cè)結(jié)果顯示,F(xiàn)Ⅸ基因的突變位點(diǎn)分散無(wú)熱點(diǎn)區(qū),突變類型也不同。本研究中共發(fā)現(xiàn)了34種突變,其中1例為三重突變,6例為雙重突變,此外還發(fā)現(xiàn)13種新突變。31例HB患者均發(fā)現(xiàn)基因突變,其基因突變發(fā)生的堿基改變、具體部位(基因堿基序列編號(hào)采用Yoshitake方法[4])、引起的氨基酸變化和是否為CpG突變熱點(diǎn)見表2。

        表2 31例HB患者FⅨ基因突變

        續(xù)表2 31例HB患者FⅨ基因突變

        3 討 論

        FⅨ基因定位于Xq27.1,基因全長(zhǎng)約33.5kb,由8個(gè)外顯子、7個(gè)內(nèi)含子及其側(cè)翼序列中的調(diào)控區(qū)所組成[5],mRNA全長(zhǎng)2 804bp。FⅨ基因任意位置的缺陷引起蛋白結(jié)構(gòu)功能和數(shù)量的改變,均可導(dǎo)致HB的發(fā)生。

        HB基因突變類型種類繁多,以點(diǎn)突變、短片段的缺失(少于30bp)和插入突變多見,其中80%左右為單個(gè)堿基的突變[6]。不同于 HA,HB的散發(fā)率可達(dá)30%~50%[7]。1990年Brownlee首次建立了HB突變數(shù)據(jù)庫(kù)。隨著病例數(shù)目的積累,新的缺陷正不斷地被發(fā)現(xiàn)。從已報(bào)道的突變分布看,包括polyA信號(hào)在內(nèi)的FⅨ基因所有區(qū)域均有突變發(fā)生。本研究除外6例缺失(一例全基因缺失和5例短片段缺失),其余均為點(diǎn)突變,占80.6%。由于編碼與Ca2+結(jié)合的EGF區(qū)及催化區(qū),外顯子4和8的突變發(fā)生率較高[8]。本研究中的31例患者,有11例發(fā)生于外顯子4和8,占35.5%。而外顯子1、6、7中突變較少,共占19.4%。

        CpG雙核苷酸區(qū)域被認(rèn)為是突變熱點(diǎn)[9-10],劉敬忠等[11]采用PCR法和GAWTS技術(shù)也進(jìn)一步證實(shí)了CpG確系突變熱點(diǎn),主要是(C→T/A)。研究中有7例發(fā)生在CpG熱點(diǎn)上,類型為(C→T),(G→A)和(G→T),占22.6%。

        Toyozumi等[12]確定了內(nèi)含子1的第192核苷酸(FⅨ192)為二核苷酸多態(tài)性位點(diǎn),存在于健康日本人中。王寧遂等[13]發(fā)現(xiàn)并計(jì)算出中國(guó)人FⅨ-192A和G的基因頻率分別為0.81和0.19。本研究中有4例患者的突變發(fā)生于此處,進(jìn)一步驗(yàn)證了該基因此位置的多態(tài)性。2例患者只檢測(cè)出此惟一多態(tài)性位點(diǎn)需進(jìn)一步檢測(cè)未測(cè)序列,以確定致病突變位點(diǎn)。

        經(jīng)過(guò)最新的血友病B數(shù)據(jù)庫(kù)資料查詢,本研究共發(fā)現(xiàn)13種新突變,為國(guó)際上首次報(bào)道。其中4種為發(fā)生在外顯子的錯(cuò)義突變,氨基酸改變分別為L(zhǎng)-Q、Y-D、S-P和 V-G。除了-T為已報(bào)道的導(dǎo)致閱讀框架移位的突變點(diǎn)外,其余3種均為新發(fā)現(xiàn)的缺失突變類型,其中-GCTGAAACCA和-GCTAAACA引起閱讀框架移位,根據(jù)剪切位點(diǎn)的位置判斷[14],-ATTT為剪接位 點(diǎn) 缺 失。此 外,T6320A、C6828T、G6640A、A29753G、G30321T和T17517G等6種突變發(fā)生于內(nèi)含子部位,已知6320為剪切位點(diǎn),可確定T6320A為致病突變,其余5種突變是否為一種新的多態(tài)性或者為致病突變,則需要進(jìn)一步研究。

        本文報(bào)道了31例HB患者FⅨ基因突變的研究,對(duì)臨床進(jìn)行HB攜帶者篩查及產(chǎn)前基因診斷具有重要的參考和指導(dǎo)意義。而FⅨ基因新突變的發(fā)現(xiàn),在豐富HB基因突變譜的同時(shí),還有助于進(jìn)一步了解FⅨ基因中某些氨基酸殘基對(duì)于FⅨ凝血活性的重要性,為明確HB的分子致病機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

        [1] Giannelli F,Green PM,High KA,et al.Haemophilia B:database of point mutations and short additions and deletions-third edition[J].Nucleic Acids Res,1992,20(Supp l):2027-2063.

        [2] 段寶華.血友病B患者及其攜帶者基因診斷新進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè),2002,23(3):133-134.

        [3] Vidal F,F(xiàn)arssac E,Altisent C,et al.FactorⅨ gene sequencing by a simple and sensitive 15-h(huán)our procedure for haemophilia B diagnosis:identification of two novel mutations[J].British J Haematol,2000,111(21):549-551.

        [4] Yoshitake S,Schach BG,F(xiàn)oster DC,et al.Nucleotide sequence of the gene for human factor(antihemophilic factor B)[J].Biochemistry,1985,24(3):3736-3750.

        [5] Bowen D.Haemophilia A and haemophilia B:molecular insigIlt8[J].Mol Patllol,2002,55(2):127-144.

        [6] Garmen E,Pilar C,Satumino H,et al.Molecular analysis in hemophilia B families:identification of six new mutations in factorⅨgene[J].Haematologiea,2003,88(101):235-236.

        [7] Mukherjee S,Mukhopadhyay A,Chaudhuri K,et al.Analysis of haemophilia B database and strategies for identification of common point mutations in the factorⅨgene[J].Haemophilia,2003,9(13):187-192.

        [8] 張媛,楊林花,陸曄玲,等.應(yīng)用DNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)血友病B患者FⅨ基因突變[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2009,17(2):476-478.

        [9] 劉敬忠,向華,劉亮,等.應(yīng)用基因擴(kuò)增轉(zhuǎn)錄技術(shù)診斷乙型血友病[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,1995,75(10):599-601.

        [10]王寧遂,鄧兵,朱靜.應(yīng)用多聚酶鏈反應(yīng)和雙鏈DNA循環(huán)測(cè)序?qū)Ⅸ基因點(diǎn)突變的研究[J].中華血液學(xué)雜志,1995,16(5):227-228.

        [11]劉敬忠,張紀(jì)平,陳懷華,等.27例乙型血友病患者Ⅸ因子基突變研究[J].高技術(shù)通訊,1994,4(3):29-32.

        [12]Toyozumi H,Kojima T,Matsushita T,et al.Diagnosis of hemophilia B carriers using two novel dinucleotide polymophisms and HhaI RFLP of the factorⅨgene in Japanese subjects[J].Thromb Haemost,1995,74(4):1009-1014.

        [13]王寧遂,鄧兵,朱靜.一種FⅨ基因多態(tài)性在我國(guó)人群中的檢出[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,1994,11(4):217-218.

        [14]Ketterling RP,Drost JB,Scaring WA,et al.Reported in vivo splice-site mutations in the factorⅨ gen severity of splicing defects and a hypothesis for predicting deleterions splice donr mutation[J].Human Mutation,1999,13(7):221-231.

        猜你喜歡
        血友病內(nèi)含子外顯子
        外顯子跳躍模式中組蛋白修飾的組合模式分析
        線粒體核糖體蛋白基因中內(nèi)含子序列間匹配特性分析
        外顯子組測(cè)序助力產(chǎn)前診斷胎兒骨骼發(fā)育不良
        不同方向內(nèi)含子對(duì)重組CHO細(xì)胞中神經(jīng)生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響
        更 正
        外顯子組測(cè)序助力產(chǎn)前診斷胎兒骨骼發(fā)育不良
        內(nèi)含子的特異性識(shí)別與選擇性剪切*
        51例血友病患者家庭注射調(diào)查分析
        新生兒甲型血友病的護(hù)理1例
        血友病患者健康狀態(tài)評(píng)定
        99视频偷拍视频一区二区三区| 久久青青草原一区网站| 国产成人自拍视频视频| 日韩精品免费av一区二区三区| 一区一级三级在线观看| 美国黄色片一区二区三区| 亚洲中文字幕巨乳人妻| 日韩有码中文字幕第一页| 男女打扑克视频在线看| 综合偷自拍亚洲乱中文字幕| 国产精品无码一区二区在线看| 少妇高潮尖叫黑人激情在线| 日韩欧美一区二区三区中文精品| 免费无码又爽又刺激聊天app| 无套内射无矿码免费看黄| 亚洲 欧美 综合 另类 中字 | 国产成人精品午夜福利免费APP| 亚洲av影院一区二区三区四区| 国产一级毛片卡| yy111111少妇影院| 日本女优久久精品观看| 国产精品一区二区av白丝在线| 精品无码人妻久久久一区二区三区| 亚洲色欲久久久综合网| 亚洲精品乱码久久久久久麻豆不卡| 男人的天堂av网站一区二区| 成人性生交大片免费看7| 国产一区二区三区白浆肉丝| 精品一区二区av天堂色偷偷| 无码av天天av天天爽| 美女下蹲露大唇无遮挡| 国产精品无码一区二区三级 | 亚洲av日韩av无码污污网站| 久久久久国产一区二区| 一国产区在线观看| 99熟妇人妻精品一区五一看片| 蜜桃久久综合一区二区| 国产精品二区一区二区aⅴ污介绍| 国产极品裸体av在线激情网| 人妻丰满av无码中文字幕| 性一交一乱一伧国产女士spa |