莊曉峰 陳 亮 張宏福 趙 峰 盧慶萍 薩仁娜 李東衛(wèi) 何科林

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193)

作為一種非再生資源，磷在飼料工業(yè)中具有舉足輕重的地位，是繼蛋白質(zhì)和能量之外的第3昂貴的飼料原料[1-4]。生產(chǎn)上為避免動(dòng)物磷營(yíng)養(yǎng)缺乏，往往向飼料中添加大量無(wú)機(jī)磷酸鹽，既增加了飼料成本，也導(dǎo)致磷的過(guò)量排泄和對(duì)環(huán)境的嚴(yán)重污染[5-8]。因此，準(zhǔn)確評(píng)定飼料磷的生物學(xué)效價(jià)對(duì)減少磷資源浪費(fèi)、降低環(huán)境污染等都具有重要意義。體內(nèi)法評(píng)定飼料磷生物學(xué)效價(jià)的結(jié)果雖然客觀可靠，但耗時(shí)、耗力、耗資，且條件難以控制、重復(fù)性差[9]，很難滿足實(shí)際需求。而體外法由于快速、簡(jiǎn)便、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越受到營(yíng)養(yǎng)學(xué)家的關(guān)注。迄今，體外法評(píng)定飼料磷透析率的方法有試管法和透析管法。試管法由于密閉酶促反應(yīng)環(huán)境中消化產(chǎn)物對(duì)酶促反應(yīng)的抑制而遭病詬;透析管法則常將試管等容器中模擬胃的消化產(chǎn)物轉(zhuǎn)入透析袋中進(jìn)行小腸段模擬[10-14]，胃和小腸階段之間涉及樣品的轉(zhuǎn)移過(guò)程，增加了試驗(yàn)誤差。針對(duì)傳統(tǒng)的體外消化法，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)出了單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)，克服了傳統(tǒng)體外消化法在消化過(guò)程中無(wú)法實(shí)現(xiàn)產(chǎn)物實(shí)時(shí)分離的缺陷，使用實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的消化產(chǎn)物分離技術(shù)，通過(guò)計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制體外消化過(guò)程，基本排除了由于人工操作引入的系統(tǒng)誤差，提高了試驗(yàn)結(jié)果的重演性[15-16]。本試驗(yàn)利用SDS-Ⅰ型仿生消化系統(tǒng)，參考Liu等[11]測(cè)定飼料磷體外透析率的操作，在前期關(guān)于不同截留分子質(zhì)量(MWCO)透析袋對(duì)仿生消化法評(píng)定飼料總磷體外透析率影響研究的基礎(chǔ)上[17]，探討消化殘?jiān)偭诇y(cè)定法和透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法評(píng)定飼料原料磷體外透析率的可行性，為確立仿生消化法評(píng)定豬飼料磷體外透析率的適宜操作規(guī)程提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選用玉米、豆粕、菜籽粕、麥麩、米糠5種豬常用飼料原料，其磷含量如表1所示，用四分法取樣后粉碎過(guò)40目篩，-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩WCO為14 000和3 500 u的透析袋購(gòu)自北京經(jīng)科宏達(dá)生物技術(shù)有限公司(美國(guó)Viskase公司進(jìn)口分裝)。

表1 飼料原料的磷含量(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table1 Phosphorus content of feed ingredients(DM basis) %

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)1參考Liu等[11]評(píng)定飼料磷體外透析率的操作，選用美國(guó)ViskasMWCO為14 000和3 500 u的透析袋進(jìn)行試驗(yàn)，仿生消化結(jié)束后分別測(cè)定玉米、豆粕、麥麩消化殘?jiān)锌偭准巴肝鲆褐袩o(wú)機(jī)磷含量，每個(gè)樣品4個(gè)重復(fù)。

試驗(yàn)2參考Liu等[11]評(píng)定飼料磷體外透析率的操作，選用美國(guó)ViskasMWCO為14 000和3 500 u的透析袋，通過(guò)測(cè)定仿生消化透析液中的無(wú)機(jī)磷含量，評(píng)定玉米、豆粕、菜籽粕、米糠、麥麩的磷體外透析率，每個(gè)樣品4個(gè)重復(fù)。

1.3 透析袋的處理

1.4 透析液的配制

在39℃下配制pH 6.44的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液作為小腸階段透析液，每瓶透析液體積精確為1 L，并加入160×104U青霉素鉀防止微生物的生長(zhǎng)。

1.5 仿生消化系統(tǒng)操作過(guò)程

仿生消化時(shí)間及操作方法參考Liu等[11]評(píng)定飼料磷體外透析率的試驗(yàn)，胃和小腸段消化時(shí)間分別設(shè)置為75和240 min。具體操作為:準(zhǔn)確稱取1.000 0 g飼料原料(精確至0.000 2 g)于10 mL玻璃試管中，同時(shí)測(cè)定干物質(zhì)含量，用20 mL模擬胃液(含1 475.0 U/mL胃蛋白酶)將飼料樣品完全轉(zhuǎn)移至裝好透析袋的仿生消化管中。把消化管置于仿生消化系統(tǒng)中，開(kāi)始試驗(yàn)。胃階段消化結(jié)束后，用加酶器在每個(gè)消化管中分別加入2 mL NaHCO3溶液(調(diào)節(jié)pH為6.44)及2 mL豬模擬小腸液，使食糜中含69.10 U/mL胰蛋白酶(Amresco)、8.68 U/mL糜蛋白酶(Amresco)、221.43 U/mL淀粉酶(Sigma)，然后接通透析液管道，讓小腸段透析液循環(huán)流過(guò)仿生消化管，每排5個(gè)消化管的透析液作為1個(gè)重復(fù)。待樣品消化結(jié)束后，準(zhǔn)確移取10 mL緩沖溶液瓶中的透析液于50 mL容量瓶中，采用鉬黃比色法測(cè)定其中無(wú)機(jī)磷含量[18]，計(jì)算透析液中無(wú)機(jī)磷總量。同時(shí)用去離子水將透析袋中的消化液和殘?jiān)鼰o(wú)損失的轉(zhuǎn)移至150 mL的燒杯中，65℃條件下烘至無(wú)水痕后，測(cè)定殘?jiān)偭缀縖18]。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用SAS 8.0的MEANS模塊對(duì)基本統(tǒng)計(jì)量進(jìn)行分析，按平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;并對(duì)不同處理?xiàng)l件下測(cè)定結(jié)果進(jìn)行成組法t檢驗(yàn)或配對(duì)法t檢驗(yàn)。其中數(shù)據(jù)計(jì)算公式如下:

消化殘?jiān)偭诇y(cè)定法測(cè)得飼料總磷體外透析率(%)=100×[1-P3/(M0×DM0×P1)];

透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法測(cè)得飼料磷體外透析率(%)=100×[P2/(M0×DM0×P1)]。

式中:M0為飼料樣品重(g);DM0為飼料樣品干物質(zhì)含量(%);P1為飼料樣品總磷含量(%，絕干基礎(chǔ));P2為透析液中無(wú)機(jī)磷含量(g);P3為消化殘?jiān)偭缀?g)。

2 結(jié)果

2.1 不同MWCO透析袋條件下豬飼料原料總磷體外透析率及透析液中無(wú)機(jī)磷和有機(jī)磷比率

由表2和表3可知，MWCO 14 000 u透析袋條件下測(cè)得玉米、豆粕、麥麩總磷體外透析率分別為42.91%、48.41%和86.13%，有機(jī)磷比率分別為58.56%、61.74%和7.33%。MWCO 3 500 u透析袋條件下測(cè)得飼料原料總磷體外透析率分別為17.23%、28.04%和78.24%，有機(jī)磷比率分別為27.22%、50.11%和 1.46%，相比 MWCO 14 000 u透析袋條件下有機(jī)磷透過(guò)量已降低，但仍然沒(méi)有將有機(jī)磷完全截留，沒(méi)有達(dá)到無(wú)機(jī)磷與有機(jī)磷的有效分離。

表2 MWCO 14 000 u透析袋條件下豬飼料原料總磷體外透析率及透析液中無(wú)機(jī)磷和有機(jī)磷比率Table2 Total phosphorus in vitro dialyzability of feed ingredients and inorganic and organic phosphorus ratios in dialysate using MWCO 14 000 u dialysis tubings %

表3 MWCO 3 500 u透析袋條件下豬飼料原料總磷體外透析率及透析液中無(wú)機(jī)磷和有機(jī)磷比率Table3 Total phosphorus in vitro dialyzability of feed ingredients and inorganic and organic phosphorus ratios in dialysate using MWCO 3 500 u dialysis tubings %

2.2 不同MWCO透析袋條件下透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法測(cè)得飼料原料磷體外透析率

由表4可知，不同MWCO透析袋條件下，透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法測(cè)得飼料原料磷體外透析率存在顯著差異(P＜0.05)。MWCO 14 000 u透析袋測(cè)得玉米、豆粕、菜籽粕、米糠、麥麩磷的體外透析率分別為17.78%、18.52%、34.77%、14.09%、79.82%，顯著高于MWCO 3 500 u透析袋測(cè)得結(jié)果(P＜0.05)，分別提高5.24%、4.53%、6.82%、1.63%、2.72%。飼料中的無(wú)機(jī)磷分子質(zhì)量極小，分析本試驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為，不同MWCO透析袋條件下飼料原料有機(jī)磷的降解率存在差異。

表4 不同MWCO透析袋條件下透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法測(cè)得飼料原料磷體外透析率Table4 Phosphorus in vitro dialyzability of feed ingredients measured by inorganic phosphorus determination using different MWCO dialysis tubings %

2.3 仿生消化法測(cè)定豬飼料原料磷體外透析率的精度

由表5可知，MWCO 14 000 u透析袋條件下，透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法測(cè)得玉米、豆粕、菜籽粕、米糠、麥麩的磷體外透析率分別為(17.78±0.28)%、(18.52±0.32)%、(34.77±0.55)%、(14.09±0.45)%、(79.82±0.69)%，重復(fù)間最大絕對(duì)偏差分別為 0.60%、0.79%、1.24%、0.88%、1.42%，變異系數(shù)為 1.56%、1.74%、1.59% 、3.22% 、0.86% 。

表5 MWCO 14 000 u透析袋條件下透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法測(cè)得飼料原料磷體外透析率Table5 Phosphorus in vitro dialyzability of feed ingredients measured by inorganic phosphorus determination using MWCO 14 000 u dialysis tubings %

由表6可知，本試驗(yàn)測(cè)定飼料磷體外透析率的變異系數(shù)均控制在4%以內(nèi)，低于Liu等[19]、方熱軍[12]的體外試驗(yàn)及賈剛等[20]的體內(nèi)試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)。從本試驗(yàn)結(jié)果可知，與傳統(tǒng)體外消化試驗(yàn)及體內(nèi)試驗(yàn)相比，在SDS-Ⅰ型仿生消化系統(tǒng)上評(píng)定飼料磷體外透析率具有較好的試驗(yàn)精度。

表6 不同研究者測(cè)定飼料磷體外透析率的變異系數(shù)的比較Table6 The coefficient of variation of phosphorus in vitro dialyzability of feed ingredients measured by different researchers %

3 討論

3.1 消化殘?jiān)偭诇y(cè)定法評(píng)定豬飼料原料磷體外透析率的可行性

植物性飼料中的磷以無(wú)機(jī)磷和有機(jī)磷(主要是植酸磷)2種形式存在。以無(wú)機(jī)鹽形式存在的磷在消化道溶解后可直接被動(dòng)物吸收利用，而以有機(jī)化合物形式存在的磷必須經(jīng)酶水解釋放出無(wú)機(jī)磷后才能被動(dòng)物吸收利用[21]，因此，消化殘?jiān)偭诇y(cè)定法評(píng)定飼料磷體外透析率的可行性取決于是否存在透析袋可將飼料中有機(jī)磷完全截留。前期關(guān)于不同透析袋對(duì)仿生消化法評(píng)定豬飼料干物質(zhì)和磷體外透析率影響的研究表明，美國(guó)ViskasMWCO 3 500 u透析袋條件下，消化殘?jiān)偭诇y(cè)定法測(cè)得飼料磷體外透析率最低且最接近報(bào)道的體內(nèi)結(jié)果[17]。本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定飼料消化殘?jiān)锌偭缀考巴肝鲆褐袩o(wú)機(jī)磷含量，對(duì)MWCO 3 500 u透析袋分離無(wú)機(jī)磷與有機(jī)磷的有效性進(jìn)行研究。

MWCO 3 500 u透析袋條件下測(cè)得玉米、豆粕、麥麩總磷透析率分別為17.23%、28.04%、78.24%，顯著低于MWCO 14 000 u透析袋條件下測(cè)定結(jié)果，分別降低25.68%、20.37%、7.89%。透析袋MWCO降低，仿生消化透析液中無(wú)機(jī)磷和有機(jī)磷透析量均有所下降，但從無(wú)機(jī)磷和有機(jī)磷所占比例可以看出，有機(jī)磷透析量的降低對(duì)飼料總磷透析率的降低起了主要作用。MWCO 3 500 u透析袋條件下測(cè)得玉米、豆粕、麥麩透析液中有機(jī)磷比率分別為27.22%、50.11%和1.46%，相比14 000 u透析袋條件下有機(jī)磷透過(guò)量已降低，但是仍有部分有機(jī)磷通過(guò)透析袋進(jìn)入到透析液中。MWCO 3 500 u透析袋條件下通過(guò)測(cè)定消化殘?jiān)偭缀吭u(píng)定飼料磷體外透析率，會(huì)將透析液中的部分有機(jī)磷認(rèn)定為可吸收磷，使測(cè)定結(jié)果偏高，因此，由于透析袋的限制，消化殘?jiān)偭诇y(cè)定法并不適用于飼料磷體外透析率的研究。

3.2 不同MWCO透析袋對(duì)透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法評(píng)定飼料原料磷體外透析率的影響

迄今，關(guān)于飼料磷透析率的體外評(píng)定，國(guó)內(nèi)外動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)家都有諸多報(bào)道。大多數(shù)研究者選用MWCO 12 000～14 000 u的透析袋，通過(guò)測(cè)定透析液中無(wú)機(jī)磷含量評(píng)定飼料磷體外透析率，但關(guān)于透析袋孔徑是否對(duì)飼料磷透析率存在影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)選用MWCO 14 000和3 500 u的透析袋，利用仿生消化系統(tǒng)評(píng)定了5種豬常用飼料原料磷體外透析率。

從本試驗(yàn)結(jié)果可知，MWCO 14 000 u透析袋條件下測(cè)得玉米、豆粕、菜籽粕、米糠、麥麩磷的透析率均顯著高于MWCO 3 500 u透析袋測(cè)定結(jié)果，分別提高 5.24%、4.53%、6.82%、1.63%、2.72%。根據(jù)植酸分子結(jié)構(gòu)，其含有12個(gè)可解離的質(zhì)子，這些位點(diǎn)可以與蛋白質(zhì)、氨基酸、淀粉和脂質(zhì)等物質(zhì)上的陽(yáng)離子基團(tuán)結(jié)合，以植酸復(fù)合物的形式存在，而飼料中的無(wú)機(jī)磷分子質(zhì)量很小。Newkirk等[22]研究報(bào)道植酸酶與植酸結(jié)合受到植物組織中其他組分不同程度的阻礙作用。Zyla等[10]報(bào)道，非淀粉多糖酶與植酸酶之間存在協(xié)同作用，也進(jìn)一步證明了這個(gè)問(wèn)題。分析本試驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為，MWCO 3 500 u透析袋條件下飼料有機(jī)磷的降解率低于MWCO 14 000 u透析袋。其原因是采用MWCO 3 500 u透析袋進(jìn)行試驗(yàn)，蛋白質(zhì)、淀粉等的酶解產(chǎn)物無(wú)法及時(shí)透析出去，對(duì)酶促反應(yīng)的抑制作用導(dǎo)致蛋白質(zhì)等降解率降低，從而導(dǎo)致植酸磷無(wú)法暴露出來(lái)與植酸酶結(jié)合，無(wú)機(jī)磷透析率降低。由于麥麩較高的內(nèi)源植酸酶活性，本試驗(yàn)測(cè)得其磷體外透析率達(dá)到了79.82%，是否存在其他原因還需要進(jìn)一步的研究。結(jié)合本試驗(yàn)結(jié)果，建議透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法評(píng)定飼料磷體外透析率時(shí)采用MWCO為14 000 u的透析袋，這也與Zyla 等[10]、方熱軍[12]、左建軍[13]、Liu 等[19]、張鐵鷹[23]的報(bào)道一致。

3.3 透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法評(píng)定豬飼料原料磷體外透析率的可行性

關(guān)于飼料磷體外透析率的研究，大部分研究者的操作步驟為:飼料樣品與胃蛋白酶鹽酸溶液混合于10 mL試管中，恒溫水浴培養(yǎng)固定時(shí)間;胃階段消化結(jié)束后，向上述試管中加入固定體積的含有胰蛋白酶的NaHCO3溶液，并轉(zhuǎn)移至MWCO 12 000～14 000 u的透析袋中于固定體積的緩沖溶液中恒溫透析，結(jié)果測(cè)定透析液中的無(wú)機(jī)磷含量計(jì)算飼料磷體外透析率。本試驗(yàn)在仿生消化系統(tǒng)的基礎(chǔ)上對(duì)以前研究者的操作稍作改動(dòng)，胃階段即在透析袋中進(jìn)行，消化結(jié)束后，通過(guò)加酶器在透析袋中加入調(diào)節(jié)pH的NaHCO3溶液及小腸模擬消化酶，有效消除了消化殘?jiān)D(zhuǎn)移過(guò)程的系統(tǒng)誤差;小腸階段采用循環(huán)緩沖溶液進(jìn)行透析，有效避免了反應(yīng)體系可能存在的飽和問(wèn)題。

體外消化試驗(yàn)是通過(guò)模擬動(dòng)物消化道環(huán)境條件來(lái)進(jìn)行，但是消化道中的酶是一個(gè)復(fù)雜多變的多酶系統(tǒng)，且消化過(guò)程受到神經(jīng)、激素系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，體外條件下難以完全模擬[24]，所以在體外模擬消化試驗(yàn)上更應(yīng)注重體外試驗(yàn)法的精確度、可重復(fù)性和可靠性。本試驗(yàn)測(cè)得飼料磷體外透析率的變異系數(shù)均控制在4%以內(nèi)，低于Liu等[19]、方熱軍[12]的體外試驗(yàn)及賈剛等[20]的體內(nèi)試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)。由此可得，在SDS-Ⅰ型仿生消化系統(tǒng)上，透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法能夠?qū)崿F(xiàn)飼料磷體外透析率的研究。

4 結(jié)論

①M(fèi)WCO 3 500 u透析袋條件下，飼料有機(jī)磷仍可通過(guò)透析袋進(jìn)入到透析液中，因此消化殘?jiān)偭诇y(cè)定法不適宜于飼料磷體外透析率的研究。

②采用透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法評(píng)定飼料磷體外透析率，MWCO 14 000 u透析袋測(cè)得結(jié)果顯著高于3 500 u透析袋，且試驗(yàn)精度優(yōu)于傳統(tǒng)體外方法，因此，MWCO 14 000 u透析袋條件下的透析液無(wú)機(jī)磷測(cè)定法更適宜于飼料磷體外透析率的研究。

[1]LEI X G，STAHL C H.Nutritional benefits of phytase and dietary determinants of its efficacy[J].Journal of Applied Animal Research，2000，17(1):97-112.

[2]NOVAK J M，WATTS D W，HUNT P G，et al.Phosphorus movement through a coastal plain soil after a decade of intensive swine manure application[J].Journal of Environmental Quality，2000，29(4):1310-1315.

[3]FAN M Z，ARCHBOLD T，SAUER W C，et al.Novel methodology allows simultaneous measurement of true phosphorus digestibility and the gastrointestinal endogenous phosphorus outputs in studies with pigs[J].The Journal of Nutrition，2001，131:2388-2396.

[4]霍啟光.動(dòng)物磷營(yíng)養(yǎng)與磷源[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2002.

[5]JONGBLOED A W，LENIS N P，MROZ Z.Impact of nutrition on reduction of environmental pollution by pigs:an overview of recent research[J].Veterinary-Quarterly，1997，19(3):130-134.

[6]OGILVIE J R，BARRY D A，GOSS M J，et al.Balancing environmental and economic concerns in manure management by use of an on-farm computerized decision support program，MCLONE4[C]//MOORE J A.Animal agriculture and food processing wastes.Proceedings of the 8th international symposium.Des Moines:ASAE，2000:460-467.

[7]PAIK I K.Management of excretion of phosphorus，nitrogen and pharmacological level minerals to reduce environmental pollution from animal production[J].Asian Australasian Journal of Animal Science，2001，14(3):384-394.

[8]HAN I K，LEE J H，PIAO X S，et al.Feeding and management system to reduce environmental pollution in swine production[J].Asian-Australasian Journal of Animal Science，2001，14(3):432-444.

[9]WALDROUP P W.Bioassays remain necessary to estimate phosphorus，calcium bioavailability[J].Feedstuffs，1996，68(46):13-14，16-18，23.

[10]ZYLA K，LEDOUX D R，GAREIA A，et al.An invitro procedure for studying enzymic dephosphorylation of phytate in maize-soyabean feeds for turkey poults[J].British Journal of Nutrition，1995，74(1):3-17.

[11]LIU J Z，LEDOUX D R，VEUM T L.In vitro procedure for predicting the enzymatic dephosphorylation of phytate in corn soybean meal diets for growing swine[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，1997，45(7):2612-2617.

[12]方熱軍.豬對(duì)植物性飼料真消化率及其真可消化磷預(yù)測(cè)模型的研究[D].博士學(xué)位論文.雅安:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.

[13]左建軍.非常規(guī)植物飼料鈣和磷真消化率及預(yù)測(cè)模型研究[D].博士學(xué)位論文.廣州:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[14]BOLLINGER D W，TSUNODA A，LEDOUX D R，et al.A comparison of the test tube and the dialysis tubing in vitro methods for estimating the bioavailability of phosphorus in feed ingredients for swine[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，2005，53:3287-3294.

[15]趙峰.對(duì)家禽飼料有效能評(píng)定理論及實(shí)踐中若干問(wèn)題的探討[J].中國(guó)家禽，2009，31(15):35-39.

[16]李輝.單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)(SDS-Ⅰ)測(cè)定鴨飼料代謝能值的精度、變異因素及可加性研究[D].碩士學(xué)位論文.合肥:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[17]莊曉峰，張宏福，陳亮.不同透析袋對(duì)仿生消化法評(píng)定豬飼料原料干物質(zhì)和磷體外消化率的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2012，24(8):1527-1533.

[18]張麗英.飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2003.

[19]LIU J Z，LEDOUX D R，VEUM T L.In vitro prediction of phosphorus availability in feed ingredients for swine[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，1998，46:2678-2681.

[20]賈剛，王康寧.生長(zhǎng)豬植物性飼料中可消化磷的評(píng)定[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2000，12(3):24-29.

[21]JONGBLOED A W.Phosphorus in the feeding of pigs:effect of diet on the absorption of phosphorus by growing pigs[D].Ph.D.Thesis.Wageningen:Wageningen Agricultural University，1987.

[22]NEWKIRK R W，CLASSEN H L.In vitro hydrolysis of phytate in canola meal with purified and crude sources of phytase[J].Animal Feed Science and Technology，1998，72:3-4，315-327.

[23]張鐵鷹.植酸酶體外消化評(píng)定技術(shù)的研究[D].博士學(xué)位論文.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2002.

[24]WOLTERS M G E，SCHREUDER H A W，HEUVEL G V D，et al.A continuous in vitro method for estimation of the bioavailability of minerals and trace elements in foods:application to breads varying in phytic acid content[J].British Journal of Nutrition，1993，69:849-861.