郭小龍，周小波，蹇 丹，蒙柯帆，王小琳，王 晗，許閩廣

（海南醫(yī)學(xué)院，海南 ?？?571101）

化學(xué)合成藥物是目前治療中、重度高血壓以及高血壓危象的首選藥物，對(duì)腎血管性高血壓有降壓顯效快、療效明確等優(yōu)勢(shì)，但也具有不可避免的副作用，尤其易導(dǎo)致血壓變化過快和藥源性低血壓。眾所周知，血壓驟然升降對(duì)于存在血管硬化的患者有導(dǎo)致血管破裂出血的潛在風(fēng)險(xiǎn)，因此，尋找降壓平穩(wěn)且能有效維持血壓的藥物有著重大的臨床意義。文獻(xiàn)報(bào)道，黎藥青葙子具有降壓作用[1]，但其降壓機(jī)制至今尚未明確。因此，研究黎藥青葙子的降壓機(jī)制，有助于闡明其可能的作用靶點(diǎn)，對(duì)該藥物在高血壓領(lǐng)域的應(yīng)用提供相應(yīng)的理論基礎(chǔ)。

青葙（Celosia argentea）是莧科一年生草本植物，生于田野、路旁和荒地，為旱地常見雜草[1]。青葙的種子稱為青葙子，為常用黎藥，味苦、性微寒，有清肝明目、降血壓的功效[2]。林介鴻[3]報(bào)道，青葙子單用可治療高血壓。青葙子與車前子、牛蒡子和女貞子組成“四子湯”，青光眼病人用后有明顯利尿作用[4]。但是，尚未見有關(guān)青葙子降低腎血管性高血壓大鼠血壓的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道。而Ang II 水平的降低既可使血壓降低，又可以利尿、減輕鈉水潴留[5]。因此，本實(shí)驗(yàn)以自制腎血管性高血壓大鼠模型為對(duì)象，將青葙子與生理鹽水對(duì)大鼠血壓及血漿Ang II的影響進(jìn)行了比較，通過這一實(shí)驗(yàn)了解青葙子對(duì)腎血管性高血壓大鼠血壓及血漿Ang II水平的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

SD 雄性大鼠35 只，體重150～180 g，購于長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部。動(dòng)物飼料購于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飲水為居民生活用水，每天換一次新鮮水。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)按照臨床外科操作指南進(jìn)行。采用2K1C 方法建立腎血管性高血壓模型[6～12]。用3%的戊巴比妥鈉（1 ml/kg）腹腔注射麻醉SD 大鼠。把直徑為0.25 mm的針灸針與左側(cè)腎動(dòng)脈血管長軸緊貼平行放置，用無菌絲線扎緊左側(cè)腎動(dòng)脈（使管徑變?yōu)樵瓉淼?/4，腎動(dòng)脈縮窄直徑，即為0.25 mm）和針灸針打結(jié)固定后抽出針灸針。術(shù)后第5周篩選出建模成功的大鼠，高血壓的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：建模處理后凡血壓比處理前高20 mmHg，且尾動(dòng)脈收縮壓（SBP）高于115 mmHg 為腎血管性高血壓大鼠[12]。建模成功的大鼠共14 只，隨機(jī)分為兩組：對(duì)照組為腎血管性高血壓大鼠（4只），給予生理鹽水灌胃4周；實(shí)驗(yàn)組為腎血管性高血壓大鼠（10 只），給予青葙子（5.25 g/kg）灌胃4周，每天一次，每周7天。同時(shí)，每周定時(shí)測(cè)量一次大鼠尾動(dòng)脈收縮壓（SBP）和平均動(dòng)脈壓（MAP）。根據(jù)人用有效劑量按公斤體重折算為動(dòng)物有效劑量后，大鼠有效劑量選5.25 g/kg。采用煎制中藥的方法[13]，將青葙子加入蒸餾水中煎煮，水煎兩次，濾液混合，于4℃冰箱保存，用時(shí)取所需量。限于課題的經(jīng)費(fèi)不足，本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量較少，只設(shè)計(jì)了一個(gè)空白對(duì)照組，沒有進(jìn)行半數(shù)有效量和半數(shù)致死量實(shí)驗(yàn)來確定青葙子的劑量，人用有效劑量按公斤體重折算為動(dòng)物有效劑量，實(shí)驗(yàn)過程中未發(fā)現(xiàn)大鼠有異常行為。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥及主要試劑

青葙子（玉林市華濟(jì)中藥飲片有限公司，批號(hào)：10010050）。大鼠血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（上海繼錦化學(xué)科技有限公司，批號(hào)：20110701A）。

1.3 實(shí)驗(yàn)器械

酶標(biāo)儀（xMark，序列號(hào)：10112）、制冷高速離心機(jī)（德國eppendorf）和-128℃深冷保存箱（海爾公司）。

1.4 血壓測(cè)量

于術(shù)前、術(shù)后每周一次、藥物干預(yù)后每周一次采用BP-6 無創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）測(cè)量大鼠清醒狀態(tài)下尾動(dòng)脈壓。設(shè)置加熱箱的溫度為35℃，將大鼠置于加熱箱內(nèi)，然后將大鼠尾巴穿過光電脈搏探測(cè)器的阻斷端，從另一端穿出；預(yù)熱10分鐘直至可以看出較好的脈搏波形；將傳感器接口插到對(duì)應(yīng)機(jī)箱內(nèi)的連接器上；使用專用連線連接加熱箱控制面板脈搏傳感器接口與通用8 道系統(tǒng)。測(cè)量3次，每次5 min，取其平均值，連續(xù)測(cè)量9周[8～14]。藥物干預(yù)4周后取血，取血前經(jīng)右側(cè)頸總動(dòng)脈插管法動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)大鼠頸動(dòng)脈血壓[15]（BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司）。

1.5 血樣標(biāo)本采集及AngⅡ測(cè)定

在藥物干預(yù)最后一天處死大鼠。處死前麻醉大鼠，打開腹腔，從腹腔靜脈采血4 ml，離心（制冷高速離心機(jī)，參數(shù)設(shè)置：4℃，2000 rps，10 min），采用大鼠AngⅡ酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒測(cè)定Ang II 水平，嚴(yán)格按照試劑盒的說明操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

全部數(shù)據(jù)均采用SPSS 18.0（SPSS Inc）軟件分析，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。兩組間比較采用成組設(shè)計(jì)的獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，同一組干預(yù)處理前、后比較采用配對(duì)t 檢驗(yàn)，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腎動(dòng)脈縮窄術(shù)后大鼠尾動(dòng)脈收縮壓的變化

BP-6 無創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)結(jié)果顯示，腎動(dòng)脈縮窄手術(shù)后，從建模手術(shù)后第1周開始，隨著時(shí)間推移，14 只大鼠尾動(dòng)脈收縮壓逐漸升高，到術(shù)后第3周在高水平維持基本穩(wěn)定（見圖1）。由于在建模階段（藥物處理前）本實(shí)驗(yàn)尚未分組，所有大鼠都只做了相同處理（建模手術(shù)），圖1 所反映的血壓是所有實(shí)驗(yàn)大鼠的尾動(dòng)脈收縮壓的平均值。2K1C 法建模手術(shù)后大鼠尾動(dòng)脈收縮壓的平均值與術(shù)前比較有顯著性差異。

圖1 腎動(dòng)脈狹窄手術(shù)后不同時(shí)期大鼠尾動(dòng)脈收縮壓變化（±s，n=14）

2.2 青葙子對(duì)腎血管性高血壓大鼠MAP 尾和SBP 尾的影響

BP-6 無創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)結(jié)果顯示，對(duì)照組動(dòng)物藥物干預(yù)后與干預(yù)前的血壓差值與實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物相應(yīng)差值比較，其（MAP 尾B-MAP 尾A）和（SBP 尾B-SBP尾A）均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異（見表1）。

表1 兩組大鼠用藥后與用藥前的血壓差值比較（±s，mmHg）

表1 兩組大鼠用藥后與用藥前的血壓差值比較（±s，mmHg）

注：與對(duì)照組相比，*P＞0.05。A 指建模后干預(yù)處理前的血壓，B 指干預(yù)后的血壓

分組 MAP 尾B-MAP 尾A SBP 尾B-SBP 尾A-0.6±4.5-1.4±22.6*對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組5.6±13.73.4±20.0*

2.3 青葙子對(duì)腎血管性高血壓大鼠 mCAP、SBP頸和Ang II水平的影響

BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)和酶標(biāo)儀結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，其mCAP、SBP 頸和Ang II 均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異（見表2）。

表2 兩組大鼠藥物處理后的SBP 頸、mCAP 比較（±s，mmHg）

表2 兩組大鼠藥物處理后的SBP 頸、mCAP 比較（±s，mmHg）

注：與對(duì)照組相比，*P＞0.05。mCAP 指頸動(dòng)脈平均壓

分組 SBP 頸 mCAP Ang II 158.0±28.1180.7±19.6*對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組147.8±21.9160.8±13.7*93.7±32.2128.5±52.9*

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)顯示，青葙子對(duì)腎血管性高血壓大鼠（SBP尾B-SBP尾A）的降低作用不明顯，這與林介鴻[1]的研究結(jié)果不一致。本次實(shí)驗(yàn)的對(duì)象很明確，為腎血管性高血壓大鼠，而林介鴻學(xué)者的研究對(duì)象為高血壓病人，且沒有說明其是原發(fā)性高血壓還是腎血管性高血壓，這可能與人和大鼠對(duì)青葙子的反應(yīng)有差別以及高血壓的類型有關(guān)。此外，林介鴻學(xué)者的研究為臨床療效觀察，沒有隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)的支持，其樣本只含5例高血壓病人，觀察時(shí)間僅為一周，而青葙子是黎藥，通過口服其療效在短時(shí)間內(nèi)難以確定[5]，其研究結(jié)果的準(zhǔn)確性可能會(huì)受到一定的質(zhì)疑。

本次實(shí)驗(yàn)同時(shí)還觀察了大鼠的（MAP 尾B-MAP尾A）、mCAP和SBP頸，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，也與林介鴻學(xué)者的研究結(jié)果不一致。頸動(dòng)脈壓的測(cè)定受外界因素影響小于尾動(dòng)脈壓的測(cè)定，收縮壓的波動(dòng)也比平均動(dòng)脈壓大，故（MAP尾B-MAP尾A）、mCAP和SBP頸可更準(zhǔn)確地反映大鼠的動(dòng)脈血壓，這進(jìn)一步支持青葙子對(duì)腎血管性高血壓大鼠降壓作用不明顯這一結(jié)果。

腎血管性高血壓，由腎實(shí)質(zhì)和（或）腎血管病變引起的高血壓。而本次試驗(yàn)建立的高血壓模型是由腎血管狹窄引起的。腎血管狹窄導(dǎo)致腎缺血，腎灌注壓降低，交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮性升高及到達(dá)致密斑處的小管液中的鈉離子濃度降低時(shí)，激活腎素-血管緊張素系統(tǒng)，腎素分泌增加，血漿Ang II 水平升高[16]，Ang II 通過直接收縮血管和間接引起鈉水潴留等作用而導(dǎo)致血壓升高。然而，青葙子作用后，青葙子組的Ang II 水平與對(duì)照組相比，無顯著差異，這表明青葙子對(duì)腎血管性高血壓大鼠的Ang II水平無明顯影響。

本次實(shí)驗(yàn)是根據(jù)大鼠建模后最后一次（高血壓形成期第4周）測(cè)定的SBP尾進(jìn)行高血壓大鼠成功模型篩選和分組的，SBP尾也是最后觀察青葙子療效的一個(gè)重要指標(biāo)，因?yàn)镾BP尾數(shù)據(jù)比其他各指標(biāo)數(shù)據(jù)更加齊全。雖然頸動(dòng)脈壓和Ang II水平的測(cè)定受內(nèi)、外界因素影響更小，但取樣過程中有部分大鼠死亡，對(duì)照組只測(cè)到2只大鼠的頸動(dòng)脈壓、3只大鼠的Ang II水平，實(shí)驗(yàn)組測(cè)到9只大鼠的頸動(dòng)脈壓和Ang II水平，導(dǎo)致樣本數(shù)更少，且頸動(dòng)脈壓和Ang II水平只在取樣時(shí)測(cè)過一次，這也從一定程度上減少了本實(shí)驗(yàn)的說服力。限于課題的經(jīng)費(fèi)不足，本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物量較少，只設(shè)計(jì)了一個(gè)空白對(duì)照組，沒有剔除部分應(yīng)激反應(yīng)很厲害的大鼠，且沒有進(jìn)行半數(shù)有效量和半數(shù)致死量實(shí)驗(yàn)來確定青葙子的劑量，只是將人用有效劑量按公斤體重折算為動(dòng)物有效劑量。以上因素都有可能增加本次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為假陰性的可能性。因此，要得出更具說服力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，有待開展規(guī)模更大、對(duì)照更加完整、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)更加周全的實(shí)驗(yàn)。

[1]福建省科學(xué)技術(shù)委員會(huì)《福建植物志》編寫組.福建植物志（一）[M].福州:福建科學(xué)技術(shù)出版社，1982.

[2]肖培根.中藥志（三）[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1984.

[3]林介鴻.青葙子治療高血壓有效[J].中醫(yī)雜志，1962（8）:19.

[4]史載祥.全國中西醫(yī)結(jié)合治療心血管病及血瘀證高級(jí)論壇和研修班論文匯編[C].北京:中日友好醫(yī)院，2004.

[5]淤澤溥，李文明，蔣家雄，等.青葙子對(duì)家兔瞳孔和眼內(nèi)壓的影響[J].云南中醫(yī)雜志，1990，11（1）:30-31.

[6]尚明月.地黃降壓湯對(duì)腎血管性高血壓大鼠血壓及血漿血管緊張素II、醛固酮影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].吉林:吉林大學(xué)，2007.

[7]Hocher B，Zart R，Diekmann F ，et al.Paracrine renal endothelin system in rats with liver cirrhosis[J].Br J Pharmacol，1996，118（2）:220-227.

[8]戴勇，彭武建，徐卓佳，等.“兩腎一夾”腎血管性高血壓大鼠模型的改進(jìn)[J].實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)管理，2006，23（2）:60-63.

[9]傅辰生，劉春鳳，徐少偉，等.羅格列酮對(duì)兩腎一夾高血壓大鼠的降壓作用[J].復(fù)旦學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2006，33（6）:807-809，818.

[10]錢之玉.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)與指導(dǎo)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2003.

[11]傅繼華，陳宇飛，張琪，等.高血壓大鼠腎血管性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭谱鞲倪M(jìn)[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，26（6）:383.

[12]Hocher B，George I，Diekmann F，et al.ETA receptor blockade induces fibrosis of the clipped kidney in two-kidney-one-clip renovascular hypertensive rats[J].Journal of Hypertension，2000，18（12）:1807-1814.

[13]鄧賢彬.中藥湯劑的“煎服法”[J].中國醫(yī)藥指南，2011（15）:128-129.

[14]Hocher B，Rohmeiss P，Diekmann F，et al.Distribution of endothelin receptor subtypes in the rat kidney.Renal and haemodynamic effects of the mixed （A/B）endothelin receptor antagonist bosentan[J].Eur J Clin Chem Clin Biochem，1995，33（8）:463-472.

[15]鄭宏剛，丁紅葉，孫保存，等.卡托普利與洛沙坦對(duì)腎性高血壓大鼠血壓的影響[J].天津醫(yī)藥，2006，134（4）:259-261.

[16]肖獻(xiàn)忠.病理生理學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2010.■