鄧心蕊，王振宇，2＊

（1.東北林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，哈爾濱150040；2.哈爾濱工業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)研究院，哈爾濱150001）

多酚類物質(zhì)是日常飲食中最豐富的水溶性抗氧化劑和最具活性的抗氧化物質(zhì)［1－2］。大量研究證明，氧化是引起人類老化和大量疾病的原因［3－6］。膳食中的抗氧化劑可以激發(fā)細(xì)胞防御抗氧化傷害并且保護(hù)細(xì)胞組件。在食品工業(yè)中，抗氧化劑已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于延長產(chǎn)品的貨架期。一些人工合成的抗氧化劑，如BHA和BHT，對健康存在潛在危害和毒性［7］。所以，從天然資源中尋找合適的抗氧化劑取代人工合成的，已經(jīng)受到廣泛關(guān)注。

很多植物中均存在多酚類物質(zhì)，如一些果蔬、香料、堅果等。研究比較多的如葡萄和茶葉，因為其多酚類物質(zhì)發(fā)現(xiàn)較早、含量較高，所以研究較深入；還有一類原料，由于來源廣泛、培育便宜或適于經(jīng)濟(jì)種植而受到關(guān)注，如蘋果、海帶、燕麥、馬鈴薯等；再者，一些具有特殊功能性質(zhì)的多酚類物質(zhì)來源也深得研究者的青睞，如藍(lán)莓等一系列漿果不僅抗氧化性強(qiáng)且其中富含色素類物質(zhì)，為進(jìn)一步用于食品工業(yè)的天然色素方面提供了來源。前期研究發(fā)現(xiàn)，松科植物中富含多酚類物質(zhì)［8－10］，且有研究證明其在含量及抗氧化性方面的優(yōu)勢［11］。

紅皮云杉（Picea koraiensis）為松科云杉屬常綠喬木，高30m以上、胸徑達(dá)60～80cm，樹冠尖塔型，樹皮灰褐色或淡紅褐色，葉四棱狀線形，球果卵狀圓柱形［12］。紅松（Pinus koraiensis）為松屬常綠針葉喬木，樹冠圓錐形，樹皮鱗狀裂開、內(nèi)皮淺駝色、裂縫紅褐色，球果圓錐狀卵形［13］。紅皮云杉和紅松作為東北地區(qū)主要優(yōu)勢松樹種，具有很好的經(jīng)濟(jì)開發(fā)優(yōu)勢，且東北地區(qū)林場有企業(yè)規(guī)模大、機(jī)械化水平高、林區(qū)道路密度大等特點。本研究選擇伊春、葦河、長白山作為原料采集地，研究紅皮云杉和紅松不同生態(tài)環(huán)境下的活性物質(zhì)含量，以多酚、黃酮和原花青素含量，確定優(yōu)勢資源品種。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

紅皮云杉和紅松松果，采摘于伊春、葦河和長白山。

1.2 實驗儀器

高速萬能粉碎機(jī)；電子天平；分析天平；超聲波發(fā)生器；電熱恒溫水浴鍋；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；臺式低速離心機(jī)；可見分光光度計。

1.3 實驗方法

1.3.1 超聲波提取

以不同采摘地的紅皮云杉和紅松球果為樣品，將樣品在避光通風(fēng)處自然晾干，塑封在陰涼處備用。使用前用粉碎機(jī)粉碎，過20目篩。取3g樣品粉末，用60mL 40%乙醇溶液在25℃超聲波提取，超聲功率200w時間30min，將提取液4000r／min離心10min后真空抽濾，固體物質(zhì)加入離心后液體同體積的40%乙醇，再復(fù)提2次，合并3次，在40℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，用40%乙醇定容至100mL。每種樣品做3組平行。

1.3.2 多酚含量的測定

本實驗采用《GBT 8313－2008茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》，略有修改。

取沒食子酸對照品0.110g±0.001g，加蒸餾水定容至100mL容量瓶。分別取1～7mL置于100mL容量瓶中，加蒸餾水定容。各取1～10mL棕色容量瓶，加10%福林粉溶液5.0mL，3～8min后，加7.5%碳酸鈉溶液4mL，加水定容至刻度。25℃水浴1h，在765nm處，以蒸餾水為空白，測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，沒食子酸含量作為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品測定：取一定量的樣品提取液，稀釋一定的倍數(shù)，按上述步驟操作測定吸光度值。并做3組平行試驗。

1.3.3 黃酮含量測定

采用《GBT 20574－2006蜂膠中總黃酮含量的測定方法 分光光度比色法》，略有修改。

取蘆丁對照品50mg，加無水乙醇，定容至50mL容量瓶（1mg／mL）。取10mL，無水乙醇定容至50mL容量瓶（0.2mg／mL）。分別取1至7mL置于50mL容量瓶中，加95%乙醇至15mL。加硝酸鋁溶液1mL（100g／L），加醋酸鉀溶液1mL（9.8g／mL），加水定容至刻度。靜置1h，在415nm處，以30%乙醇溶液為空白，測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁含量作為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品測定：吸取5mL稀釋液，以相同方法測定吸光度值。并做3組平行試驗。

1.3.4 原花青素的測定

采用《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范（2003版）》，略有修改。

取原花青素標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg，溶于10mL甲醇。分別取0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5mL 置 于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。取正丁醇與鹽酸（95∶5體積混合）6mL，至具塞錐瓶中，0.2mL硫酸鐵銨溶液（用濃度2mol／L鹽酸配成2%（w／v）的溶液），加1mL待測品。沸水浴精確加熱40min，立即置冰水中冷卻，加熱完畢后15min，在546nm處，測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，原花青素含量作為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品測定：取一定量的樣品提取液，稀釋一定的倍數(shù)，按上述步驟操作測定吸光度值。并做3組平行試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 多酚含量測定結(jié)果

圖1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

將不同地區(qū)紅皮云杉及紅松球果共六種樣品的提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)，吸取1mL于10mL棕色容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定方法，在765nm波長下測定吸光度值。沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。各樣品的多酚含量分別為：紅皮云杉伊春155.358mg／g，葦河125.395mg／g，長白山166.743mg／g；紅松伊春24.933mg／g，葦 河10.357mg／g，長白山8.046mg／g。不同地域紅皮云杉中多酚含量為紅松的5～20倍。其中，長白山紅皮云杉中多酚含量最高，伊春次之。

2.2 黃酮含量測定結(jié)果

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

將樣品提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)，吸取5mL于50mL容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定方法，在415nm波長下測定吸光度值。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。各樣品的黃酮含量分別為：紅皮云杉伊春1.941mg／g，葦河2.111mg／g，長白山2.355mg／g；紅松伊春1.584mg／g，葦河1.161 mg／g，長白山1.217mg／g。不同地域紅皮云杉中黃酮含量均略高于紅松。但同一樹種間，差異不大。

2.3 原花青素含量測定結(jié)果

圖2 原花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線

將樣品提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)，吸取1mL于10mL容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定方法，在546nm波長下測定吸光度值。原花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。各樣品中原花青素含量分別為：紅皮云杉伊春143.742mg／g，葦河144.762mg／g，長白山170.476mg／g；紅松伊春43.891mg／g，葦河31.130mg／g，長白山14.667mg／g。不同地域紅皮云杉中原花青素含量為紅松的3～11倍。其中，長白山的紅皮云杉原花青素含量最高，葦河和伊春次之。

2.4 活性物質(zhì)含量總表

表1 不同生態(tài)環(huán)境下的紅皮云杉和紅松活性物質(zhì)總表

從實驗結(jié)果來看，紅皮云杉在多酚和原花青素的含量上均顯著優(yōu)于紅松，在黃酮含量上紅皮云杉略高于紅松。所以選擇紅皮云杉作為進(jìn)一步研究對象，且以長白山為最好，伊春次之。

3 結(jié)論

通過對伊春、葦河、長白山地區(qū)紅皮云杉和紅松球果中多酚、黃酮、原花青素的研究，確定其多酚含量最高在166.743mg／g，原花青素含量達(dá)170.476 mg／g，可見其活性物質(zhì)含量十分豐富。此最高結(jié)果均屬于長白山紅皮云杉球果，所以可見，長白山紅皮云杉球果為多酚類物質(zhì)的資源優(yōu)勢松樹種類。為今后進(jìn)一步研究松多酚生理功能等方面，提供了基礎(chǔ)。

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